Survivin在口腔粘膜下纤维性变和癌变中的表达及临床意义*

张大宫　卫倩　夏金圣

(上海市奉贤区中心医院口腔科, 上海 201400)



·论著·

Survivin在口腔粘膜下纤维性变和癌变中的表达及临床意义*

张大宫卫倩夏金圣

(上海市奉贤区中心医院口腔科, 上海 201400)

【摘要】目的分析生存蛋白(Survivin)在口腔粘膜下纤维性变(OSF)和癌变中的表达及其临床意义。方法选取2011年8月～2014年8月在医院接受治疗的OSF患者17例和OSF癌变患者18例，并选取同期进行口腔健康检查的健康人群20例作为研究对象，采用SP方法检测三组患者的Survivin表达情况。结果健康人群口腔粘膜上皮组织中未出现Survivin阳性表达；OSF癌变患者的Survivin表达阳性率(94.4%)明显高于OSF患者(47.1%)(P<0.05)；OSF患者早期、中期、晚期的Survivin表达阳性率呈升高趋势，但差异无统计学意义(P>0.05)。结论Survivin水平对于诊断口腔粘膜下纤维性癌变具有重要意义，可作为患者早期的诊断标志物。

【关键词】Survivin；口腔粘膜下纤维性变；癌变；表达；临床意义

口腔粘膜下纤维性变(OSF)是一种慢性疾病，能对口腔粘膜的任一部位进行侵袭，最终导致口腔功能障碍，甚至发展成口腔粘膜下纤维性癌,癌变率为7%～13%[1，2]，故OSF也属于癌前状态。咀嚼摈榔是OSF的主要病因，据相关资料统计，在咀嚼槟榔人群中大约有30%均有口腔粘膜下纤维性变[3-5]。Survivin属于凋亡抑制因子，主要参与机体的有丝分裂、抗凋亡等生物学过程，它具有肿瘤特异性，在正常的组织中并不表达，只在胚胎组织及恶性肿瘤组织中表达，并且和肿瘤细胞的分化、增殖、浸润、转移等紧密相关[6,7]。目前，关于OSF和OSF癌变组织中Survivin的表达情况临床研究较少，为探究Survivin在口腔粘膜下纤维性变癌变中的表达及临床意义，本文进行了针对性研究，以期为临床治疗OSF癌变提供更加有效的诊断及治疗思路，现将结果报告如下。

1资料与方法

1.1临床资料选取2011年8月～2014年8月在我院口腔科接受治疗的OSF患者17例，均经病理学检查予以确诊和排除其他系统性疾病患者，17例OSF患者中男性7例，女性10例，年龄18～65岁，平均年龄(46.3±3.8)岁，其中包括5例早期，8例中期，4例晚期患者。另选取OSF癌变患者18例，均先表现为OSF症状，其后演变为癌变，排除合并其他口腔黏膜疾病患者，18例OSF癌变患者中男性8例，女性10例，年龄32～68岁，平均年龄(44.8±4.2)岁，其中包括11例舌癌，4例颊癌，2例牙龈癌，1例口底癌。同时选取同期进行口腔健康检查的健康人群20例作对照，均无吸烟、酗酒、嗜好咀嚼槟郎习惯，亦无其他口腔黏膜疾病，20例健康人群中男性11例，女性9例，年龄21～64岁，平均年龄(43.9±4.9)岁。三组人群均未接受过放化疗治疗，且均同意进行病理研究。对比分析三组人群的年龄、性别等一般资料，无明显统计学差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1检查仪器与试剂仪器：病理切片机(QPJ-I型，购自天津航空机电设备厂)、电热鼓风干燥箱(101C-III型，购自上海实验仪器总厂)、离心机(80-1型，购自上海手术器械厂)、微波炉(WD800T型，购自顺德格兰仕电器有限公司)、显微镜(Ys100型，购自日本NiKon公司)。试剂：鼠抗人Survivin、DAB试剂盒、SP试剂盒、EDTA修复液、磷酸盐缓冲液，均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2.2检测方法本组患者均经免疫组化SP法进行检测，检测步骤应严格按照试剂说明书操作。首先采集三组人群的颊粘膜组织，使用40g/L的中性甲醛溶液进行标本固定，石蜡包埋后进行常规切片，普通载玻片及经多聚赖氨酸处理后的载玻片切片厚度均为4μm。对普通载玻片行HE染色，病理医师很据自身经验及病理学分期标准，对选取的OSF组织的分期及癌变进行判断。对经多聚赖氨酸处理过的载玻片置入烤箱中>24h,烤箱温度设置为60℃，目的为使获取的组织与切片紧密粘附，利于免疫组化分析。两种切片均需脱蜡处理，分别用蒸馏水及PBS冲洗、浸泡10min、5min，其后将其置入抗原修复液中进行修复，每次煮沸后断电，期间间隔5min，连续进行2次，冷却切片，然后经过冲洗、H2O2孵育等步骤向样本组织中滴加鼠抗人Survivin抗体，空白对照组采用PBS[8]。

1.2.3结果判定切片处理完毕后，由两名经验丰富的病理科医师进行阅片，应在高倍镜下对切片进行观察，高倍镜目数为×400，观察时一般选择5个不同的视野，对500个细胞进行计数，阳性细胞的判定标准为：在胞质内见到棕褐色颗粒。根据阳性细胞的染色强度及其所占百分比对其进行分级评分，其中依据染色强度分为4个等级：强(+++)，中等(++)，弱(+)和无(-)，分别记为3分、2分、1分和0分；依据阳性细胞百分比分为5个等级：0分～百分比在5%以下；1分：百分比在5%～24%之间；2分：百分比在25%～49%之间；3分：百分比在50～75%；4分：百分比在75%以上。将上述两项进行叠加，若分值为0分或1分，则记为(-)，若分值为2分或3分，则记为(+)，若分值为4分或5分，则记为(++)，若分值为6分或7分，则记为(+++)[9]。

1.3统计学分析本组研究采用SPSS 15.0统计学软件对所得数据进行分析与处理，其中计数资料的组间比较采用2检验方法，用(n，%)表示，阳性表达率的计算采用Fish确切概率法，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1口腔粘膜上皮组织中Survivin的表达分布Survivin显示为棕褐色颗粒，粗细不一，主要在细胞质内表达。在健康人群中，未在其口腔粘膜上皮组织中发现Survivin阳性染色(见图1)。在OSF患者中，可见Survivin阳性染色，其中早期及中期Survivin的阳性染色比较微弱，只在棘层和基底层细胞质内观察到散在的淡褐色颗粒(见图2，图3)，而在晚期Survivin的阳性染色程度加深，在部分棘层和基底层细胞质内可在密集、均匀的褐色颗粒(见图4)。在OSF癌变患者中，Survivin阳性颗粒呈片状分布，大部分棘层、基底层细胞及癌细胞被染成深褐色，但间质细胞并未着色(见图5)。

图1健康人群口腔粘膜Survivin未表达

Figure 1Survivin was not expressed in healthy population

图2OSF早期Survivin的表达

Figure 2The expression of survivin in early OSF

图3OSF中期Survivin的表达

Figure 3The expression of survivin in middle OSF

图4OSF晚期Survivin的表达

Figure 4The expression of survivin in late OSF

图5OSF癌变Survivin的表达

Figure 5The expression of survivin in OSF canceration

2.2口腔粘膜上皮组织中Survivin的阳性表达率在20例健康人群的口腔粘膜上皮组织中未发现Survivin阳性表达。在17例OSF患者中，有8例呈阳性表达，表达阳性率为47.1%，其中包括1例(5.9%)早期，3例(17.6%)中期，4例(23.5%)晚期。在18例OSF癌变患者中，有17例呈阳性表达，表达阳性率为94.4%。提示在OSF患者中Survivin的阳性表达率明显高于健康人群(2=12.008，P<0.05)，OSF癌变患者中Survivin的阳性表达率明显高于OSF患者(2=9.619，P<0.05)，差异均具有统计学意义。但在OSF早期、中期及晚期患者Survivin的阳性表达率无明显统计学差异(P>0.05)。见表1。

表1三组患者口腔粘膜上皮组织中Survivin的阳性表达率

Table 1The positive expression rate of survivin in oral mucosa epithelium in the three groups

组别nSurvivin阳性表达-++++++表达率(×10-2)正常口腔粘膜组20200000OSF患者组1747.1 OSF早期01005.9 OSF中期021017.6 OSF晚期022023.5OSF癌变组181071094.4

3讨论

Survivin在肿瘤细胞中的表达已经成为临床上研究的热点问题[10]。Survivin又称生存蛋白，属于IAP家族的成员之一，在目前临床发现的凋亡抑制因子中其作用能力最强，最早由耶鲁大学学者于1997年发现[11]。 Survivin主要存在在17q25染色体上，由142个氨基酸构成，分子量仅为16300，是IAP家族中分子量最小的成员[12]。内源性Survivin的亚细胞定位不同，大约有80%定位在细胞质，其余20%定位在细胞核。Survivin在不同组织中表达效果不一，在胚胎组织、恶性肿瘤组织中为高表达，在甲状腺、胸腺、睾丸及成人大肠粘膜中为低表达，在良性肿瘤组织及终末组织中不表达[13,14]。同时，Survivin在细胞内的表达呈严格周期依赖性，在G2/M期表达比较特异，是因为其半衰期只有30分钟，当在G2/M期表达后，其在接下来的G1期表达的蛋白质及mRNA显著下降。

Survivin能参与细胞的有丝分裂及增殖，并促进血管的形成。在G2/M期，Survivin的过度表达能增加细胞逃逸，进而致使细胞出现异常增殖。同时，Survivin还能协同血管内皮生长因子促进肿瘤的浸润转移及血管内生成，由此可见，Survivin在肿瘤的发生及进展中起到十分重要的作用[15,16]。在Survivin高表达肿瘤患者中化疗效果不理想，其总体生存期较短，肿瘤易复发，对于预测肿瘤的发生和发展具有重要意义。OSF属于慢性、进展性口腔黏膜疾病，其具有癌变倾向，主要的临床特征为口干、灼痛、吞咽困难、进食疼痛、张口困难等。OSF在国外较常见，尤其是东南亚及印度等国家，我国则集中在台湾及湖南等地区，目前，其病因尚不明确，可能和咀嚼槟郎、营养因素、遗传因素、免疫因素、进食因素等有关，其已被WHO列为癌前状态[17]。近年来，关于Survivin在口腔粘膜下纤维性变癌变中的表达研究日渐增多，证明了Survivin与口腔癌症的发生、进展、转移及预后紧密相关[13]。有学者[18]利用免疫组化方法对正常口腔粘膜、口腔白斑及口腔鳞癌中的Survivin表达进行检测，结果显示：在正常口腔粘膜中未出现Survivin阳性表达；在口腔白斑中发现随着异常程度的加重，Survivin的阳性表达率逐渐升高；在口腔鳞癌中发现随着癌细胞分化程度的降低，Survivin的阳性表达率逐渐升高，这充分说明了Survivin的阳性表达和细胞的增殖分化程度相关，可作为口腔恶性肿瘤的诊断标志物[19]。本次研究也对上述观点予以证实，本文采用免疫组化检测方法对口腔黏膜中的Survivin表达情况进行观察研究，结果显示健康人群口腔粘膜上皮组织中未出现Survivin阳性表达；OSF患者出现少量Survivin阳性表达，OSF癌变患者出现大量Survivin阳性表达，三组之间具有明显统计学差异，这说明Survivin的表达可能与OSF的癌变具有一定关系，对其进行检测能帮助早期诊断OSF癌变。

4结论

本研究表明，Survivin蛋白在OSF和OSF癌变组织中均存在不同程度的阳性表达，OSF癌变组织中其阳性表达率较OSF组织更为明显，提示Survivin和OSF癌变的发生具有一定关系，可将其作为OSF癌变的早期诊断标志物。

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The expression and clinical significance of survivin in oral submucous fibrosis and cancer

ZHANG Dagong，WEI Qian，XIA Jinsheng

(DepartmentofStomatology,CentralHospitalofShanghaiFengxian，Shanghai201400,China)

【Abstract】ObjectiveTo analyze the expression and clinical significance of survivin in oral submucous fibrosis (OSF) and cancer. Methods17 patients with OSF and 18 patients with malignant transformation of OSF were controlled with 20 healthy people. The expression of surviving was observed.ResultsSurvivin positive expression does not appear health human oral mucosa epithelial tissue. The originating from OSF patients survivin expression positive rate (94.4%) was significantly higher than that of OSF patients (47.1%) (P<0.05). OSF patients early, middle and late stage of survivin expression positive rate showed an increasing trend, but the difference was not statistically significant (P>0.05).ConclusionThe level of survivin has important significance for diagnosis of oral submucous fibrosis carcinogenesis, which be used as the early diagnostic marker.

【Key words】Survivin；Oral submucous fibrosis; Cancerous; Express; Clinical significance

(收稿日期：2015-08-03； 编辑： 陈舟贵)

【中图分类号】R 739.85

【文献标志码】A

doi：10.3969/j.issn.1672-3511.2016.04.007

基金项目：上海市教委科研基金项目(SJY02014)