大蒜、生姜、苦瓜混合提取液对平菇病原真菌的抑制作用及对平菇生长的影响

段奥其　杨亚苓　汤慧盟　吕祚森　国淑梅　周军　牛贞福

摘要：采用抑菌圈法研究了大蒜、生姜、苦瓜混合提取液对平菇（Pieurotus ostreatus）病原真菌的抑制作用，用出菇试验法测定了混合提取液对平菇菌丝体和子实体生长的影响。结果表明，在pH9时，大蒜、生姜、苦瓜4.5：4.5：1.0质量比例的混合提取液抑制平菇病原真菌效果最好，与对照相比增产31.40%，缩短了采菇间隔。大蒜、生姜、苦瓜以4.5：4.5：1.0质量比例提取12h，pH为8、9时混合提取液抑菌效果最好，加入提取12h混合提取液的菌袋增产35.84%，缩短了采菇间隔，增大了盖柄比，提高了商品性。

关键词：混合提取液；平菇（Pieurotus ostreatus）；病原真菌；抑制作用

中图分类号：S646.1⁺4 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）09-2283-04

平菇（Pleuyotus ostreatus）属侧耳科侧耳属，是中国栽培最为广泛的食用菌之一。目前平菇生产以农户分散栽培为主，栽培管理不规范，生产过程中易受细菌、真菌为害，菇农常用多菌灵、百菌清等化学药剂进行防治，给食用菌产品带来一定的安全隐患。

研究表明，大蒜、生姜、苦瓜等的提取液对细菌、真菌具有一定的抑制作用。为此。本试验以大蒜、生姜、苦瓜的混合提取液对平菇生产中的主要病原真菌进行室内抑菌测定和平菇生产试验，以期为相关生物农药的开发应用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

大蒜为脱毒品种，苦瓜为航天九号（F₁），均取自山东农业工程学院校内实习基地：生姜为山东绵姜，山东莱芜生产。

真菌为青霉（Penicillium）、木霉（T.viride）、拟青霉（Paecilomyces）、枝孢霉（Cladosporium）。

平菇为德丰5号，由禹城市清香园蔬菜种植专业合作社提供。

1.2 方法

1.2.1 大蒜、生姜、苦瓜混合提取液的制备 用食品加工机将大蒜（鲜）、生姜（鲜）、苦瓜片（干）按照一定比例匀浆或粉碎。与乙酸乙酯（AR）按照质液比（m/V）1：1的比例置于28℃下恒温振荡一定时间，转速120r/min。其中大蒜、生姜、苦瓜质量比例分别为4：4：2、5：4：1、4：5：1、4，5：4，5：1.0，提取时间为24h；大蒜、生姜、苦瓜比例为4.5：4.5：1.0的提取时间为4、6、12、24、36、48h；不加乙酸乙酯的为空白对照（CK）：用乙酸乙酯浸泡的滤片为对照（CK1）。最后用抽滤装置抽滤得大蒜、生姜、苦瓜混合提取液，置于4℃冰箱内保存备用。

1.2.2 真菌菌悬液的制备 将上述真菌菌株分别经PDA培养基纯化、活化培养后。用无菌生理盐水进行梯度稀释，菌体浓度为10⁵-10⁶cfu/mL，置于4℃冰箱内保存备用。

1.2.3 不同DH平板的制备 PDA培养基高压灭菌后，在45℃左右用NaOH调pH至7、8、9，无菌条件下倒入直径90mm的培养皿中即可。

1.2.4 大蒜、生姜、苦瓜混合提取液抑菌效果测定 ①用移液枪取0，01mL“1.2.2”中制备的菌悬液于平板上。用无菌涂布棒涂布均匀：⑦用无菌镊子将灭菌后的滤纸片（直径6mm，用大蒜、生姜、苦瓜混合提取液充分浸泡20min再晾干）贴入涂菌的平板内：③将平板倒置在24℃生化培养箱中培养48h。采用十字交叉法测量抑菌圉直径。3次重复。

1.2.5 大蒜、生姜、苦瓜混合提取液对平菇生长的影响 ①平菇栽培料配方：棉子壳90%，麦麸5%，石灰3%，石膏2%，料水比1.0：1.2：培养料中分别加入培养基含水量1%的大蒜、生姜、苦瓜不同质量比例（提取24h）的混合提取液、不同提取时间（大蒜、生姜、苦瓜质量比4.5：4.5：1.0）的混合提取液，不加混合提取液的为对照（CK2）：各处理水分（包括对照）调节一致后拌匀。⑦按4层菌种3层料的方式把平菇菌种接至17cm×45cm×0，04cm的聚乙烯塑料袋中。③测定混合提取液对平菇菌丝及子实体生长的影响。5次重复。

1.3 分析方法

试验数据用DPS统计软件进行分析。

2 结果与分析

2.1 大蒜、生姜、苦瓜混合提取液对平菇病原真菌的抑制作用

2.1.1 不同比例大蒜、生姜、苦瓜混合提取液对平菇病原真菌的抑制作用 从表1可以看出，提取溶剂乙酸乙酯和CK对4种病原真菌均无抑菌效果：大蒜、生姜、苦瓜不同质量比例的混合提取液对4种病原真菌都有抑制作用，不同处理的抑菌效果有一定差异。4.5：4.5：1.0质量比例的混合提取液抑制效果较好，其次为比例4：5：1。

DH对大蒜、生姜、苦瓜不同比例混合提取液的抑菌效果也有一定影响，从表1可以看出，pH为9时对平菇病原真菌抑制效果最好。

2.1.2 不同提取时间的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液对平菇病原真菌的抑制作用 表1结果表明，4.5：4.5：1.0质量比例的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液抑菌效果最好，故选用此比例进行不同提取时间的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液的抑菌试验。从表2可以看出，提取溶剂乙酸乙酯对平菇病原真菌无抑菌效果；大蒜、生姜、苦瓜不同提取时间的混合提取液对4种真菌都有抑制作用，其中以提取12h的抑菌效果较好。

pH对不同提取时间的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液的抑菌效果也有一定影响，混合提取液pH为8时，对青霉、枝孢霉抑菌效果较好，pH为9时对木霉、拟青霉抑制效果较好。

2.2 大蒜、生姜、苦瓜混合提取液对平菇生长的影响

2.2.1 不同质量比例的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液对平菇生长的影响

1）对菌丝生长的影响。从图1可以看出，不同质量比例的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液对平菇菌丝的生长均有影响，其中比例为4：5：1时平菇菌丝生长速度最快，其次是CK2，再依次为比例5：4：1、4.5：4.5：1.0、4：4：2；但各处理的菌丝生长与CK2相比没有明显差异。

2）对平菇子实体的影响。从表3可以看出，大蒜、生姜、苦瓜混合提取液对平菇的颜色无影响；但不同比例的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液对平菇产量有较大影响，其中比例为5：4：1和4，5：4.5：1.0的混合提取液具有明显的增产效果，与CK2相比分别增产39.89%和31.40%：比例为4：5：1和4：4：2的混合提取液则表现出一定的减产，与CK2相比分别减产26.75%和43.20%。

大蒜、生姜、苦瓜混合提取液对平菇的现蕾时间和采菇间隔有所影响，与CK2相比，比例为4.5：4.5：1，0的处理现蕾晚11d。但采菇间隔缩短27d：大蒜、生姜、苦瓜混合提取液对平菇的形态有所改变，比例为5：4：1和4.5：4.5：1，0的混合提取液处理的平菇，与CK2相比盖柄比分别增加7.17%、7.60%。

2.2.2 不同提取时间的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液对平菇生长的影响

1）对菌丝生长的影响。从图2可以看出。不同提取时间的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液一定程度上减缓了平菇菌丝的生长速度，但总体上与CK2没有明显差异。

2）对子实体的影响。从表4可以看出。大蒜、生姜、苦瓜混合提取液对平菇的颜色无影响：但不同提取时间的混合提取液对平菇产量的影响较为明显，与CK2相比，提取时间为6、12、24h的混合提取液处理分别增产33.76%、35.84%和31.40%；提取时间为4、36、48h的处理分别减产31.94%、63.47%和65.41%。

大蒜、生姜、苦瓜4.5：4.5：1.0比例的混合提取液。其不同提取时间处理的平菇现蕾时间、采菇间隔和盖柄比均有差异。与CK2相比，除提取6、12h的处理外，其他处理的现蕾时间均延长，以提取36、4h的处理延长最多，分别为22、12d；采菇间隔与CK2相比均缩短，以提取24、36h的处理缩短最多，分别缩短27、25d；平菇盖柄比除提取4h的处理外，其他处理均增加，以提取48、36h的处理增加最大，分别增加34.60%、50.74%。

3 小结与讨论

试验结果表明，大蒜、生姜、苦瓜4.5：4.5：1.0质量比例的混合提取液对平菇生产中的病原真菌抑制效果较好，不同比例的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液pH为9时抑菌效果较好；大蒜、生姜、苦瓜混合提取液对平菇菌丝生长有一定影响，但与CK2相比差异不显著；大蒜、生姜、苦瓜5：4：1和4，5：4.5：1.0比例的混合提取液具有明显的增产效果。与CK2相比，分别增产39.89%和31.40%。总之，大蒜、生姜、苦瓜4.5：4.5：1.0质量比例的混合提取液抑菌效果最好，表现出增产效果。缩短了采菇间隔。增大了盖柄比。

大蒜、生姜、苦瓜4.5：4.5：1.0质量比例提取12h的混合提取液抑菌效果最好：pH为8、9时抑菌效果较好。平菇菌丝生长与CK2相比无显著差异。与CK2相比，提取时间为6-24h的混合提取液增产31.40%-35.84%，并缩短了采菇间隔，增大了盖柄比。

大蒜、生姜、苦瓜混合提取液改善了单一提取液在中性偏碱条件下抑菌效果下降的缺点，并且在5：4：1和4.5：4.5：1.0的比例下分别增产39.89%和31.40%。研究还表明，4.5：4.5：1.0质量比例提取时间为12h的混合提取液抑菌效果较好，增产35.84%，盖柄比提高5.877%；大蒜、生姜、苦瓜混合提取液在一定程度上延长了平菇的现蕾时间，在生产时提前15d种菇，不会影响产品上市：出菇期菇潮间隔缩短8-10d，可缩短平菇的生产周期，减少人力、物力的投入。

大蒜、生姜、苦瓜混合提取液的增产机理、延长平菇的现蕾时间和缩短菇潮间隔的原因，其理化性质如何等有待进一步研究。