不同产地柴胡药材质量的对比研究

李卫红，赵红革，郑津英

（山西省医药与生命科学研究院，山西太原030006）

中药制剂工程与技术Engineering and Technology of Chinese Materia Medica Preparation

不同产地柴胡药材质量的对比研究

李卫红，赵红革，郑津英

（山西省医药与生命科学研究院，山西太原030006）

中医药学在世界上首先发现了中药并首创了方剂，医方是“除疾保性命之术”，而剂则有“调百药齐，和之所宜”之功。采用现代药物制剂技术重新研究并升华古典方剂之术，开创未来药物制剂技术和新剂型药物研究的全新思维和方向。

目的：通过测定灰分、挥发油含量以及柴胡皂苷a的含量、薄层色谱鉴别等，对来自湖北、河南、山西、辽宁、内蒙古5个产地的柴胡饮片做质量上的对比。方法：灼烧法测定总灰分及酸不溶性灰分；水蒸气蒸馏法测定挥发油含量；薄层色谱法进行鉴别；高效液相色谱法测定柴胡皂苷a的含量。结果：5个产地柴胡饮片中总灰分的含量分别为9.97%、10.22%、6.9%、9.03%、10.37%，酸不溶性灰分的含量分别分别为3.66%、3.96%、2.24%、3.59%、4.91%，挥发油含量分别为0.043%、0.048%、0.051%、0.056%、0.037%。通过薄层色谱鉴别，5个产地柴胡饮片均与柴胡皂苷a、d、对照药材在同一位置上显相同颜色的斑点，说明均含有柴胡皂苷a、d，与对照药材所含成分相同。HPLC法测定柴胡皂苷a的含量分别为0.487%、0.081%、0.381%、0.4395、0.168%。结论：通过对比性研究，产自内蒙古的柴胡在质量上要好于其他产地。

柴胡饮片；总灰分；挥发油；柴胡皂苷a；质量

中药是中华民族的瑰宝，有几千年的历史。中药材的质量是整个中医药产业的基石，中药材的质量如何，直接影响中医中药的临床疗效，继而关系到中医中药的发展乃至兴亡，中药材及其饮片质量可谓既关乎患者的个体生命安危又牵动着中医药事业的命脉。近年来，由于市场的无序竞争，假药材、伪品种冲击质好价高的道地药材，使得中药材及其饮片质量现况不容乐观，质量失控现象已十分严重［1］。本文以柴胡为例，对山西、河南、内蒙古、湖北、东北等5个产地的柴胡药材进行了质量对比研究。柴胡为伞形科植物柴胡或狭叶柴胡的干燥根，具有和解表里、疏肝、升阳之功效，主治感冒发热、疟疾、胸胀腹痛等病症。其主含皂苷、挥发油及多糖类，柴胡皂苷是柴胡检测柴胡皂苷a的有效成分之一，以柴胡皂苷a、d含量较高。本文通过中灰分、酸不溶性灰分、挥发油含量，对5个产地的柴胡药材做一系统研究，为中药制剂的药材选择提供科学依据。

1 实验材料

1．1 实验仪器

高效液相色谱仪：LC-2010A HT安捷伦；紫外检测器：Waters2487；色谱柱：ODS C1810μm（4.6 mm×200mm）；超声波清洗器：KQ-250E，江苏昆山市超声仪器有限公司；电子分析天平：普利赛斯瑞士；高速多功能粉碎机：SL-1000A浙江永康市松青五金厂；马弗炉：SY-4-10，北京中兴伟业仪器有限公司；水浴锅：HH-S4，北京科伟永兴仪器有限公司；挥发油提取器。

1.2 试剂与药材

柴胡皂苷a对照品：批号110777-200406，中国药品生物制品鉴定所；柴胡皂苷d对照品：批号110778-201208，中国食品药品检定研究院；柴胡对照药材：120992-200504，中国药品生物制品鉴定所；内蒙古、辽宁、河南、湖北产柴胡药材（安徽亳州），山西柴胡药材（山西省药材公司）。

稀盐酸、硝酸银试剂、无灰滤纸，乙腈、甲醇（色谱纯），乙酸乙酯、乙醇（均为分析纯），对二甲氨基苯甲醛、硫酸、浓氨试液。

2 方法与结果

2.1 柴胡灰分测定

2.1.1 总灰分的测定 将柴胡饮片置粉碎机粉碎，使能通过二号筛，混合均匀，取柴胡粉末3 g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量（准确至0.01 g），缓缓升温、炽热，至完全炭化时，逐渐升高温度至600℃，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。每个样品平行做2份，结果取其平均值。结果见表1。

表1 灰分测定结果

2.1.2 酸不溶性灰分的测定 取上项所得的灰分，在坩锅中小心加入稀盐酸约10 mL，用表面皿覆盖坩锅，置水浴上加热10 min，表面皿用热水5 mL冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应（滴加硝酸银试液，不显白色沉淀）为止。滤渣连同滤纸移至同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试品中酸不溶性灰分的含量（%）。每个样品平行做2份，结果取其平均值。

2.1.3 薄层鉴别 取本品粉末0.5 g，置50mL烧杯中，加甲醇20 mL，超声处理10 min，滤过，滤液浓缩至5mL，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。再取柴胡皂苷a对照品、柴胡皂苷d对照品，加甲醇制成每1mL各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（8∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰，分别至日光灯及紫外光灯（365 nm）下检视。结果见图1、图2。

图1 柴胡皂苷色谱图

图2 紫外灯下柴胡皂苷色谱图

2.2 挥发油的提取

称取500 g柴胡药材粉末，置挥发油提取器中，加入一定量的水，加热提取4 h，读取挥发油毫升数。

2.3 柴胡皂苷a的含量测定

2.3.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为210 nm。理论板数按柴胡皂苷a峰计算应不低于10 000。

表2 HPLC测定柴胡皂苷a含量的流动相梯度洗脱表

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取柴胡皂苷a对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液，摇匀，备用。

2.3.3 供试品溶液的制备 取柴胡粉末（过四号筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入含5%浓氨试液的甲醇溶液25mL，密塞，30℃水温超声处理（功率200W，频率40 kHz）30 min，滤过，用甲醇20 mL分2次洗涤容器及药渣，洗液与滤液合并，回收溶剂至干。残渣加甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.4 标准曲线的绘制 分别精密量取对照品溶液5μL、10μL、20μL、30μL、40μL，按2.3.1项色谱条件进行测定，结果见表3。

表3 线性关系实验结果

以峰面积对进样质量进行回归，得柴胡皂苷a线性回归方程：y=357 790x+10 908，R2=1，线性范围为2.080 0μg～16.640 0μg。结果见图3。

图3 线性关系图

2.3.5 精密度实验 取对照品溶液，按1.2.2.1项下色谱条件进行测定，连续进样6次，每次20μL。结果见表4。

表4 精密度实验结果

2.3.6 重复性试验 精密称取同一产地柴胡药材粉末6份，各约0.5 g，按2.3.3、2.3.1项下进行制备及色谱条件进行分析，进样10μL，测定峰面积，计算含量。结果见表5。

表5 重复性实验结果

2.3.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，在0 h、2 h、4 h、6 h各进样1次，结果见表6。

表6 稳定性实验结果

2.3.8 回收率实验 取6份已知含量的柴胡药材粉末约0.25 g，分别加入柴胡皂苷a对照品约1.2 mg，按2.3.3 项进行制备以及2.3.1色谱条件进行分析，计算样品中柴胡皂苷a的含量，计算回收率。结果见表7。

Y＝（C-A）/B×100%，其中，Y为回收率，A为样品中所含被测成分量，B为加入对照品量，C为实测值。

表7 回收率试验结果

方法学验证结果表明，该含量测定方法准确可靠，能有效控制柴胡药材质量。

2.3.9 含量测定 按2.3.1项下色谱条件及方法进行制备，供试品溶液进样量为20μL，由回归方程计算出不同产地柴胡饮片中柴胡皂苷a的含量。结果见表8。

表8 柴胡皂苷a挥发油及含量测定结果

3 讨论

总灰分和酸不溶性灰分的检查在中药材药品标准中起着至关重要的作用，土壤污染、农药残留等因素都能导致灰分含量升高，甚至超出国家标准。由于样本中山西产柴胡药材来自于野生，其灰分值在正常范围内，而其他5个产地的药材的灰分含量均超出国家标准。由薄层色谱图可以看出，5个产地柴胡饮片均与柴胡皂苷a、d、对照药材在同一位置上显相同颜色的斑点，说明均含有柴胡皂苷a、d，以及与对照药材所含成分相同。

线性关系、精密度、重复性以及回收率结果显示，柴胡皂苷a的含量测定方法可行。受地域影响，种植药材当地的环境不同，柴胡皂苷a的含量存在较大差别。通过对柴胡药材的灰分、挥发油含量及柴胡皂苷a的含量做一系统比较，其结果对柴胡制剂研究时科学选择药材提供依据。

由于受检测条件所限制，柴胡皂苷d的含量未做检测，对柴胡药材质量的研究结果造成一定影响。

［1］张慧燕，麻广霖.浅谈提高中药材及其饮片质量标准对保证中药质量的意义［J］.中国药品标准，2007，8（4）：4-6.

（编辑：翟春涛）

Com parative study on the quality of radix bupleuri from different origin

LiWeihong，Zhao Hongge，Zheng Jinying
（Shanxi Insititute of Medicine and Life Science，Taiyuan Shanxi030006）

Objective：The quality of radix bupleuri from Hubei，Henan，Shanxi，Liaoning and Inner Mongolia was compared by the determination of ash and the content of volatile oil and saikoside a and TLC identification，and so on. Method：The determination of total ash and acid insoluble ash were determined by burningmethod and volatile oil content was determined by water vapor distillation method.The content of saikosaponin a and d was determined by HPLC. Results：The total ash content were 9.97%，10.22%，6.9%，9.03%，10.37%and Acid insoluble ash content were 3.66%，3.96%，2.24%，3.59%，4.91%.Volatile oil contentwere 0.043%，0.048%，0.051%，0.056%，0.037%.By TLC，Radix Bupleuri of five areas，saikosaponin a and d and the control herbs showed the same color spots in the same position，which shows contain saikosaponin a and d in radix bupleuri of five areas，the same as the control herbs in contained ingredients.The contents of saikosaponin by HPLC were 0.487%，0.081%，0.381%，0.4395，0.168%.Conclusion：Through comparative study，radix bupleuri produced in Inner Mongolia is better than any other areas in quality.

radix bupleuri；total ash；volatile oil；saikosaponin a；quality

R285

A

1671-0258（2016）01-0028-04

山西省科技厅攻关项目（2007031088-3）

李卫红，高级工程师，E-mail：2388771265@qq.com