IEC与UV测定黄豆芽和绿豆芽中亚硝酸盐含量

苏晓燕，马光路，张海芳（内蒙古化工职业学院，内蒙古呼和浩特010070）



IEC与UV测定黄豆芽和绿豆芽中亚硝酸盐含量

苏晓燕，马光路，张海芳
（内蒙古化工职业学院，内蒙古呼和浩特010070）

摘要：对市场上豆芽进行亚硝酸盐含量测定。采用离子色谱法和分光光度法比较测定样品中的亚硝酸盐含量。黄豆芽和绿豆芽中亚硝酸盐含量各不相同。离子色谱作为一种新型的色谱分离技术，比分光光度法更适合于亚硝酸盐的检测，具有快速、简便、灵敏、选择性强等特点。

关键词：离子色谱法；分光光度法；豆芽；亚硝酸盐

豆芽是老百姓餐桌上不可或缺的一种蔬菜，近年来“问题”豆芽的出现，使人们对豆芽望而却步。豆芽中6-腺基嘌呤，尿素，亚硝酸盐和硝酸盐成了关注的焦点。亚硝酸盐能引起组织缺氧，而且是剧毒物质，成人摄入0.2 g～0.5 g即可引起中毒，3 g即可致死，同时还是一种致癌物质[1-9]。

本文采用离子色谱法和分光光度法比较测定黄豆芽和绿豆芽中的亚硝酸盐含量，方法参考GB 5009.33-2010《食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》，并对其中的一些方法及用量进行了改进，结果表明离子色谱作为一种新型的色谱分离技术，比分光光度法更适合于亚硝酸盐的检测，具有快速、简便、灵敏、选择性强等特点。

1　试剂和材料

1.1试剂

纯化水，乙酸，氢氧化钾，亚硝酸根离子标准溶液（100 mg/L），亚铁氰化钾，乙酸锌，硼酸钠，盐酸萘乙二胺，对氨基苯磺酸，亚硝酸钠（均为分析纯）：天津大茂化学试剂厂。

农贸市场采购的黄豆芽、绿豆芽，共60个样品（均为新鲜样品）。

1.2仪器

ICS-1600型离子色谱仪：美国戴安公司；JYL-C010型多功能料理机：九阳股份有限公司；PS-1001型超声波清洗机：合肥攀升超声波科技有限公司；FA2004N型电子天平：上海菁海仪器有限公司生产；TD5M型台式离心机：上海卢湘仪离心机仪器有限公司；T6S紫外可见分光光度计：北京普析通用仪器有限责任公司。

1.2试样预处理及溶液的配制

将豆芽样品用去离子水洗净，晾干后，去根切碎混匀。将切碎的豆芽样品用食物粉碎机制成匀浆备用。

乙酸溶液（3 %）：取乙酸3 mL于100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。

亚硝酸盐标准使用液（供离子色谱使用）：准确移取亚硝酸根离子的标准溶液1.0 mL于100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度。

亚铁氰化钾溶液（106 g/L）：称取106.0 g亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至1 000 mL。

乙酸锌溶液（220 g/L）：称取220.0 g乙酸锌，先加30 mL冰醋酸溶解，用水稀释至1 000 mL。

饱和硼砂溶液（50 g/L）：称取5.0 g硼酸钠，溶于100 mL热水中，冷却后备用。

盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L）：称取0.2 g盐酸萘乙二胺，溶于100 mL水中，混匀后，置棕色瓶中，避光保存。

对氨基苯磺酸溶液（4 g/L）：称取0.4 g对氨基苯磺酸，溶于100 mL 20 %（体积分数）盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。

亚硝酸盐标准使用液（供分光光度法使用）：吸取亚硝酸盐标准使用液（供离子色谱使用）1 mL，于500 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀备用。

2　试验与方法[10]

2.1离子色谱法

2.1.1提取

称取豆芽试样匀浆5 g，加入50 mL，到入100 mL试剂瓶中，用超声波超声提取30min。在80℃水浴中放置5min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤取部分溶液于10 000r/min离心机上离心20min，取上清液备用。

取备用的上清液约15 mL，通过0.22 μm水性滤膜针头滤器、C18柱，弃去前面5 mL，收集后面洗脱液待测。

2.1.2色谱条件

色谱柱：氢氧化物选择性，Dionex IonPac AS11-HC，4 mm×250 mm；淋洗液：氢氧化钾溶液，浓度为6 mmol/L～70 mmol/L；洗脱梯度为6 mmol/L、35min，70 mmol/L、5min，6 mmol/L、5min；流速：0.8 mL/min；抑制器：连续自动再生膜阴离子抑制器或等效抑制装置；检测器：电导检测器，检测池温度为35℃；进样体积：50 μL。

2.1.3标准曲线

移取亚硝酸盐标准使用液，加水逐级稀释，制成系列标准溶液，从低到高浓度依次进样，得到上述各浓度标准溶液的色谱图。以亚硝酸根离子的浓度（mg/L）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并计算线性回归方程为y=0.792 4x-0.008，R2=0.999 6。

2.1.4精密度

精密吸取黄豆芽1号和绿豆芽1号的待测液分别进样5次，结果计算RSD范围为0.8 %～1.4 %，均小于5 %。

2.1.5稳定性

将亚硝酸盐标准液与黄豆芽1号和绿豆芽1号的待测液在测试条件下每隔15min检测吸光度值，计算待测成分的含量，RSD范围为2.5 %～3.1 %，均小于5 %，表明各溶液在1 h内测定结果稳定。

2.1.6样品测定

分别吸取空白和试样溶液50 μL，在相同工作条件下，依次注入离子色谱仪中，记录色谱图。

2.1.7回收率

黄豆芽1号和绿豆芽1号的待测液，分别加入高、中、低浓度的亚硝酸盐标液，测定吸光度，并计算样品加标回收率，结果回收率在99.8 %～105.6 %之间。

2.2分光光度法

2.2.1提取

称5 g制成匀浆的豆芽试样于50 mL烧杯中，加12.5 mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀之后用70℃左右的水200 mL将试样洗入500 mL容量瓶中，在沸水浴中加热30min，取出冷却放置至室温。

2.2.2提取液净化

在振荡上述提取液时加入5 mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，并加入5 mL乙酸锌溶液，加水至刻度，摇匀，放置30min，除去上层脂肪，上清液用滤纸过滤，弃去初滤液50 mL，滤液备用。

2.2.3精密度

精密吸取黄豆芽1号和绿豆芽1号的待测液分别进样5次，结果计算RSD范围为1.5 %～2.6 %，均小于5%。

2.2.4稳定性

将亚硝酸盐标准液与黄豆芽1号和绿豆芽1号的待测液在测试条件下每隔15min检测吸光度值，计算待测成分的含量，RSD范围为2.7 %～3.4 %，均小于5 %，表明各溶液在l h内测定结果稳定。

2.2.5测定

吸取40.0 mL上述滤液于50 mL具塞比色管中，另吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50 mL亚硝酸钠标准使用液，分别置于50 mL具塞比色管中。于标准管与试样管中分别加入2 mL对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置大约5min后各加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，摇匀，并静置30min，于波长538 nm处测吸光度，绘制标准曲线，得线性回归方程为y=0.015 7 x+0.018 2，R2=0.999 0。

2.2.6回收率

黄豆芽1号和绿豆芽1号的待测液，分别加入高、中、低浓度的亚硝酸盐标液，测定吸光度，并计算样品加标回收率，结果回收率在96.3 %～98.7 %之间。

3　结果与讨论

离子色谱法与紫外分光光度法分别测定豆芽中亚硝酸盐含量结果见表1。

表1　样品中亚硝酸盐含量测定结果Table 1 Samples by nitrite content determination results

从表1中可知，测定30个黄豆芽样品中亚硝酸盐的含量均符合要求，没有超过原农业行业标准NY5317-2006《无公害食品芽类蔬菜》中规定，亚硝酸盐的含量≤4mg/kg。其中离子色谱法测定30个黄豆芽中亚硝酸盐的含量范围为0.146 5 mg/kg～3.732 mg/kg，最高的为17号黄豆芽样品，最低的为11号黄豆芽样品，30个黄豆芽样品中亚硝酸盐含量平均值1.407 mg/kg；分光光度法测定30个黄豆芽中亚硝酸盐的含量范围为0.145 4 mg/kg～3.701 mg/kg，30个黄豆芽样品中亚硝酸盐含量平均值1.348 mg/kg。

从表1中可知，分光光度法测定30个绿豆芽样品中亚硝酸盐的含量均符合要求，没有超标。其中离子色谱法测定30个绿豆芽中亚硝酸盐的含量范围为0.012 36 mg/kg～0.753 9 mg/kg，最高的为25号绿豆芽样品，最低的为5号绿豆芽样品，30个绿豆芽样品中亚硝酸盐含量平均值0.116 8 mg/kg；分光光度法测定30个绿豆芽中亚硝酸盐的含量范围为0.012 31 mg/kg～0.748 6 mg/kg，30个绿豆芽样品中亚硝酸盐含量平均值0.113 5 mg/kg。

整体而言，60个豆芽样品中的亚硝酸盐含量均未超标，符合要求，30个绿豆芽样品中的亚硝酸盐含量明显低于30个黄豆芽中的亚硝酸盐含量。离子色谱法测定的60个豆芽中的亚硝酸盐含量均高于分光光度法测定的亚硝酸盐含量，可知，离子色谱法是一种新型的分析方法，具有快速、敏捷、灵敏度高等特点，比分光光度法更适合离子的分析检测。

4　结论

采用离子色谱法和分光光度法对市场上30个黄豆芽样品和30个绿豆芽样品进行亚硝酸盐检测，样品中亚硝酸盐的含量均符合要求，没有超标，绿豆芽中亚硝酸盐均值含量低于黄豆芽中的亚硝酸盐含量。从试验可以看出，离子色谱法的精密度、稳定性以及回收率结果均高于紫外分光光度法，结果表明离子色谱作为一种新型的色谱分离技术，比分光光度法更适合于亚硝酸盐的检测，具有快速、简便、灵敏、选择性强等特点。仍然建议相关部门应采取有效的预防措施，来保障广大人民群众的菜篮子工程的安全。

参考文献：

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[7]于保霞.食品中亚硝酸盐含量的测定[J].河北化工,2010(3):62-63 [8]杨美玲,朱云德,崔东亚.肉食品中亚硝酸盐含量的测定[J].安徽农业科学,2009,37(36):18149-18150,18155

[9]颜琪.离子色谱法测定蔬菜中亚硝酸盐含量[J].现代仪器,2007 (5):71-72

[10]中华人民共和国卫生部.GB 5009.33-2010食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定[S].北京:中国标准出版社, 2010

Determination of Nitrite Content in Yellow Bean Sprouts and Mung Bean Sprouts by Ion Chromatography and Spectrophotometry

SU Xiao-yan，MA Guang-lu，ZHANG Hai-fang
（Inner Mongolia Vocational College of Chemical Engineering，Hohhot 010070，Inner Mongolia，China）

Abstract：The bean sprouts on the market were determined by nitrite content.The contents of nitrite in the samples were determined by ion chromatography and spectrophotometry.The contents of nitrite in yellow bean sprouts and mung bean sprouts were different.Ion chromatography is a new type of chromatographic separation technology，and it is more suitable for the detection of nitrite，which is characterized by rapid，simple，sensitive and selective.

Key words：ion chromatography；spectrophotometry；bean sprouts；nitrite

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.05.029

作者简介：苏晓燕（1982—），女（汉），讲师，本科，研究方向：食品分析、仪器分析。

收稿日期：2015-10-30