血细胞分析稀释液渗透压对e- CHECK质控检测影响的探讨

林晓燕，张惠林，张忠英

(厦门大学附属中山医院检验科，福建厦门361000)



血细胞分析稀释液渗透压对e- CHECK质控检测影响的探讨

林晓燕，张惠林，张忠英

(厦门大学附属中山医院检验科，福建厦门361000)

摘要:目的探讨SYSMEX自动化血细胞分析仪不同批号稀释液（EPK）试剂渗透压的差异，以及该差异对MCV等红细胞参数产生影响。方法35个批号的EPK试剂分别留取5支样本在中国上海医大FM-8T渗透压仪上进行渗透压检测，统计更换批号前后SYSMEX XE2100血细胞分析仪室内质控中MCV的结果，采用t检验进行显著性分析。结果34次比对结果显示不同批号EPK渗透压并没有显著性差异（P＞0.05）。更换批号EPK前后室内质控三个水平MCV结果（共19次）不存在显著性差异（P＞0.05）。结论SYSMEX XE2100血细胞分析仪不同批号EPK试剂渗透压不存在显著性差异，故一般不会对质控品的红细胞参数（如MCV）产生影响。e-CHECK质控品贮存压力及基质中化学成分的变化，仪器检测循环时间及工作人员操作误差可能是导致室内质控红细胞参数MCV出现漂移的原因。

关键词：EPK渗透压；MCV；显著性差异；e-CHECK

本实验在排除环境条件、温湿度、仪器设备、质控品保存、试剂、操作人员、IQC均值设置等方面原因后，将导致同批号质控品MCV室内质控图出现漂移的可疑因素-EPK(稀释液)的渗透压的改变，进行了比较和验证，探讨在血细胞分析中EPK更换批号是否存在不同批号间试剂渗透压的显著性差异，是否会对室内质控MCV等红细胞参数产生影响等问题，以期改善实验室工作程序和提高实验室日常工作的效率。现报告如下。

1　材料与方法

1.1仪器试剂渗透压检测采用中国上海医大

FM-8T渗透压仪；血细胞分析采用SYSMEX XE2100全自动血细胞分析仪。质控品为SYSMEX XE系列配套质控品e-CHECK；试剂为SYSMEX XE系列稀释液（EPK）。

1.2方法2011年12月开始至2015年1月，本实验室共更换了35次批号的EPK试剂，笔者对前后两次不同批号EPK试剂分装于5支洁净一次性使用试管中，进行渗透压检测，记录检测结果并进行方差齐性和显著性检验，共进行了34次的显著性比较。2011年12月开始至2015年1月，本实验室共更换了20次批号e-CHECK质控品，记录了20次更换EPK批号前、后实验室血常规室内质控中MCV的结果并进行显著性分析，剔除由于更换批号EPK试剂时刚更换批号质控品的情况（即更换批号试剂前后IQC数据记录少于5次的情况）1次，进行了19次的显著性比较。

2　结果

2.1 XE2100血细胞分析仪在用的不同批号EPK的渗透压差异无统计学意义（P＞0.05）。结果记录如表1。

2.2更换批号EPK前后血细胞分析室内质控三个水平L1-L3 MCV结果差异无统计学意义（P＞0.05）。结果记录如表2。

3　讨论

细胞膜、膀胱膜等是半透膜，会让比较小的溶剂分子自由通过，但不会让比较大的溶质分子通过。溶剂从比较稀的溶液通过半透膜而扩散流入较浓溶液(或纯溶剂)的现象，称为渗透；因为渗透而发生的静压力称做溶液的渗透压。渗透及渗透压，与生物的成长有密切的关系。EPK渗透压改变会影响全血标本细胞分析中红细胞参数，如MCV、HCT、MCHC等的结果。使用高渗透压的稀释液时，红细胞胞质内的水分通过细胞膜渗出，细胞脱水，体积缩小，造成一定测量容量内的血细胞过少；而当使用低渗透压的稀释液时，水分通过细胞膜进入胞质内，致使细胞膨胀，体积增大，会形成细胞排队通过传感器的重合缺损，严重影响血液细胞检测的精度，故稀释液的pH值、电导率和渗透压是保证测定结果准确可靠的重要参数[1]。但对于EPK渗透压是否会影响血细胞分析室内质控物的检测结果，却没有相关研究给予支持或说明。曾建明等[2]研究提出Sysmex XE5000全血细胞分析仪的各项检测指标均在1/5 CLIA’88TEa范围内，远远超过1/2 CLIA’88TEa的要求。本实验室XE2100血细胞分析仪的校准，性能验证和室间质评的数据也表明仪器性能良好稳定。SYSMEX血细胞分析室内质控品e－CHECK为SYSMEX原厂生产配套质控品，采用具有稳定定值范围的细胞悬液控制血液分析仪检测结果的方法已经被认可。该质控品由稳定的人类红细胞、人类白细胞、血小板、有核红细胞和防腐剂组成。在2－8℃的贮存条件下，有效期为91d，开瓶后在2－8℃的条件下可稳定7d[3]。本实验记录显示自2011年12月至2015年1月进行的34次更换批号EPK渗透压比对，各批号EPK渗透压并没有存在显著性差异（P＞0.05）。对更换批号EPK前后实验室室内质控中MCV的结果进行统计分析表明：更换EPK前后血常规室内质控中MCV的结果不存在显著性差异（P＞0.05）。这就说明，XE2100血细胞分析仪配套EPK试剂检测室内质控时，不同批号EPK的渗透压不存在显著性差异，血常规室内质控MCV出现漂移的原因并非EPK渗透压的改变。

表1　不同批号EPK渗透压比对记录表

图1　血常规MCV出现漂移的室内质控图

本实验室MCV质控图出现整体向上漂移1～2 SD范围（具体见图1），整体漂移现象明显。由于仪器法在测定HCT时，是根据平均红细胞压积(MCV)及红细胞数量得出的计算值，因此凡是能影响质量控制及平均红细胞压积测定的影响因素，均影响红细胞压积的测定[4]。e－CHECK为SYSMEX原厂生产配套质控品，由稳定的人类红细胞、人类白细胞、血小板、有核红细胞和防腐剂组成。植物甾醇的结合强烈地影响分子间的相互作用，导致红细胞膜的热力学不稳定性[5]。虽然含有防腐剂，但若持续存在影响红细胞体积的因素，如由负压变为正压，那么质控品基质就会发生变化。首先，就是贮存压力变化对质控品中红细胞体积的影响。质控品在未开启的情况下，瓶内压力为负压；本实验室采用手动进样的质控模式，故需要开启质控品方能完成质控检测。这就不可避免的会因为开盖而改变质控品的管内压力，使管内压力由负压转变为正压直接导致红细胞体积的变化。虽然质控品经过防腐处理，但其基质为人类血细胞悬液，随着开瓶后贮存压力由负压变为正压，MCV会增大，本研究考虑出现MCV检测结果整体漂移是质控品贮存压力改变导致，而且压力改变导致的MCV变化是当压力达到某个点时候才会对MCV造成影响。其次，在稀释-过滤系统中，细胞体积在每个去除低温保护剂的循环过程中都会经历周期性的收缩与膨胀。在血细胞分析仪中具有固定的稀释液流速，如果前一个循环中平衡时间不够长导致细胞传质不够充分（即细胞没有到达平衡状态就进入下一个循环），细胞体积的膨胀程度就会积累起来，导致细胞体积变化的最大值与细胞遭受的渗透性损伤增加。事实上，每次循环中周期性的收缩与膨胀也会使细胞遭受非渗透性损伤，如钾渗漏[6，7]、细胞骨架损伤与磷脂膜重组[8]等，这些均会导致细胞MCV的改变。再者，仪器及质控品操作手册说明：e－CHECK从冰箱拿出平衡室温（18～30℃），并在室温下保持15min再使用；质控品混匀应直到所有红细胞都完全浮起来为止（大约需要颠倒20次），然后再检测；质控品若在打开状态下使用，应在取样后重新装好瓶盖之前，使用干净的无毛纸或布将瓶和盖上的螺纹均擦拭干净。及时将瓶盖盖紧，送回冰箱储存[9]。质控品基质为人类血液，虽有保存液存在，但仍存在对葡萄糖、尿素等生化物质的反应性变化。有研究表明随着尿素浓度的增加，测定的MCV值也会增加，体内、体外实验均如此，而且尿素浓度越大，对MCV测定产生的干扰也越大[10]。而陈彤和史小波的研究指出，血细胞计数仪所测红细胞MCV值随着渗透压浓度的增大而呈现假性增高趋势；而血尿素、血糖及钠离子是构成渗透压的三种重要物质，由于这三种物质含量的改变从而导致渗透压的改变[11]。当然，并非所有批次e－CHECK质控品均出现漂移，本研究不能排除某一批质控品存在同批号质控品各瓶间的差异问题，人员操作不当未将质控品螺旋帽旋紧也是影响压力值的因素。此外，在质控品运输过程的某个环节没做到位，也会导致质控品的性质发生变化。

表2　更换批号EPK前后血细胞分析室内质控三个水平L1- L3的MCV结果比对记录表

综上所述，本研究发现XE2100配套EPK试剂不同批号间渗透压不存在显著性差异，在使用仪器配套EPK检测室内质控时，一般不会出现室内质控MCV出现漂移的情况。e－CHECK质控品的压力及基质中化学成分的变化可能是导致室内质控MCV出现漂移的主要原因；至于MCV的变化是渐进性改变还是当贮存压力达到某个点时才会改变还有待进一步研究。另外，仪器检测时的循环检测时间也是影响因素之一，我们不能一味认定仪器检测性能的完好无误。此外，一些未尽的外在因素及人员操作不当或许也是原因之一。对于血细胞分析室内质控，我们应该全面认识全血质控物法的局限性[12]。浮动均值法（Bull法）和全血质控物法都是属于全血细胞分析的室内质控方法，可以从不同侧面反映仪器、试剂和标本状态。在常规应用全血质控物法时，可结合Bull法使用，以确保整个分析过程检验质量的可靠性[13]。

参考文献

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[2]曾建明，龙一飞，李沫，等.应用Wes tgard方法评价决定图判断Sysmex XE5000全血细胞分析仪性能[J].实验与检验医学，2012，30(3)：225－226，264.

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[9]SYSMEX公司. XE2100全自动血液分析仪主机操作手册[M]. 1999.

[10]马双双.血尿素升高对红细胞平均体积测定的影响[J].重庆医学，2006，35(20)：1888－1889.

[11]陈彤，史小波，刘培慧，等.血浆渗透压增高患者血细胞分析仪MCV的变化[J].临床检验杂志，2000，18(4)：242－243.

[12]杨文念，钟金清，孟明，等.浮动均值法在血液分析中的应用探讨[J].实验与检验医学，2011，29(4)：445－447.

[13]何文军，吴新忠，黄宪章，等.浮动均值法在血液分析室内质控中的应用[J].国际医药卫生导报，2007，13(16)：115－118.

·质量控制·

(收稿日期2015－07－27；修回日期2016－02－03)

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.02.019

中图分类号：R446.11

文献标识码：A

文章编号：1674-1129(2016)02-0185-04