CMTM3在结直肠癌组织中的表达及意义

宋文韬，孙燕来，徐忠法

(济南大学·山东省医学科学院生命与科学学院·山东省肿瘤医院，济南250000)

CMTM3在结直肠癌组织中的表达及意义

宋文韬，孙燕来，徐忠法

(济南大学·山东省医学科学院生命与科学学院·山东省肿瘤医院，济南250000)

目的 探讨趋化素样因子样MRVEL跨膜结构域超家族成员3(CMTM3)在结直肠癌发生、发展中的作用。方法 采用免疫组化法检测104例份结直肠癌组织及其配对癌旁正常组织中CMTM3表达，分析结直肠癌组织中CMTM3表达与患者临床病理参数的关系。结果 CMTM3在结直肠癌组织及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为15.4%(16/104)、100%(104/104)，二者比较P<0.01。结直肠癌组织CMTM3阳性表达与肿瘤直径、组织分化程度、NCCN分期及肿瘤类型有关(P均<0.05)，与患者性别、年龄、肿瘤部位、淋巴结转移、合并肠道多发息肉及便血无关(P均>0.05)。结论 结直肠癌组织中CMTM3表达降低，其表达降低可促进结直肠癌的发生、发展。

结直肠癌；趋化素样因子样MRVEL跨膜结构域超家族成员3；免疫组化

目前尚无可准确预测结直肠癌复发和转移的分子标记物。趋化素样因子(CKLF)样MRVEL跨膜结构域超家族(CMTM)是2003年北京大学发现的一个新基因家族，该家族包括9个基因，即CKLF和CMTM 1～8。CKLF和CMTM 1～4在人类染色体16q22上形成一个基因簇，CMTM 6～8在3q22形成一个基因簇，CMTM5独立定位与14q11.2。因肿瘤患者上述染色体区域常缺失，故该区域被认为是富含抑癌基因的区域。CMTM3定位于抑癌基因富集区，在正常组织中高表达，在肿瘤组织中表达下调或缺失，其启动子区的CpG岛存在甲基化修饰，在肿瘤细胞中恢复其表达，可抑制肿瘤细胞增殖、迁移，甚至启动细胞凋亡。研究发现，CMTM3在多种肿瘤(如胃癌、乳腺癌等)组织中表达被抑制甚至缺失[1]。但其在结直肠癌组织中的表达情况鲜见报道。本研究观察CMTM3在结直肠癌组织中的表达情况，探讨其在结直肠癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2014年10月～2015年10月在山东省肿瘤医院行结直肠癌根治性切除术患者104例，男62例、女42例，年龄<50岁者18例、≥50岁者86例。所有患者经术后组织病理检查明确诊断。肿瘤部位：左半结肠癌20例，右半结肠癌18例，直肠癌66例；肿瘤类型：溃疡型79例，菜花型7例，隆起型18例；肿瘤直径：<5 cm者60例，≥5 cm者44例；肿瘤组织分化程度：高分化者72例，低分化者32例； NCCN分期：Ⅰ、Ⅱ期48例，Ⅲ、Ⅳ期56例；有淋巴结转移者57例，合并肠道多发息肉者14例，有便血者59例。所有患者排除结直肠腺瘤、家族性腺瘤性息肉病相关结直肠癌、遗传性非息肉性结直肠癌等，以及术前行新辅助化疗者。

1.2 结直肠癌组织及癌旁正常组织CMTM3表达检测 采用免疫组化法。取结直肠癌组织及其配对癌旁正常组织，10%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚切片；切片置于60 ℃烘箱烤片2 h，二甲苯脱蜡、乙醇水化、3%过氧化氢阻断15 min。枸橼酸盐缓冲液热修复，水浴煮沸20 min，自然冷却至室温。5% BSA或TBST-5% NGS消除非特异性染色。CMTM3用鼠抗人CMTM3单抗，阴性对照用PBS缓冲液作为一抗。一抗稀释倍数为1∶200。4 ℃湿盒中孵育过夜。滴加适量二抗，室温孵育20 min，PBS漂洗3次、每次5 min。辣根酶标记工作液，DAB镜下控制显色，苏木素复染，梯度乙醇脱水，中性树胶封片。显微镜下拍照观察。结果判定：采用半定量法评估染色强度和阳性细胞百分比。染色强度-、+、++、+++分别计0～3分；阳性细胞百分比<5%、≥5%～<25%、≥25%～<50%、≥50%分别计0～3分。染色强度评分×阳性细胞百分比评分≥3为CMTM3阳性表达。

1.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验或Fisher精确概率检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

结直肠癌组织及癌旁正常组织CMTM3阳性表达率分别为15.4%(16/104)、100%(104/104)，二者比较差异有统计学意义(χ2=17.33，P<0.01)。CMTM3阳性表达与结直肠癌患者临床病理参数的关系见表1。

表1 结直肠癌组织CMTM3阳性表达与患者临床病理参数的关系

3 讨论

近年来随着我国人口老龄化、生活水平提高、饮食习惯和结构改变，结直肠癌的发病率和病死率呈明显上升趋势，特别是青年群体的发病率明显升高[1～8]。目前，根治性切除术是结直肠癌的主要治疗手段，但术后一旦出现复发和转移，其5年生存率明显下降。CEA、CA19-9等为临床判断肿瘤复发及转移的常用生物标记物，但在结直肠癌中的敏感性和特异性较低[9]。结直肠镜定期复查配合可疑病变标本检测虽然可直观准确地判断局部复发情况，但成本高，患者痛苦大、依从性差。CMTM是一个新的CKLF超家族[10]，CMTM3是其家族成员之一，定位于16q22.1。CMTM3在正常人体组织中广泛表达，但在多种肿瘤组织中表达被抑制甚至缺失；恢复肿瘤细胞CMTM3表达可抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡[1]。启动子区CpG甲基化导致基因沉默是CMTM3表达下调的主要机制，而CpG甲基化导致肿瘤的抑癌基因功能丧失被认为是肿瘤形成、发展的重要环节和表观遗传学改变[11～14]。

本研究结果显示，在结直肠癌组织中CMTM3阳性表达率明显低于癌旁正常组织。表明CMTM3在结直肠癌组织中表达下调甚至缺失。这与CMTM3在大多数肿瘤组织中的表达结果基本一致[1]。本研究还发现，CMTM3阳性表达与肿瘤直径、组织分化程度、NCCN分期、淋巴结转移以及肿瘤类型有关，而与患者性别、年龄、肿瘤部位、合并肠多发息肉及便血无关。而结直肠癌肿瘤直径、组织分化程度、NCCN分期、淋巴结转移及肿瘤类型等是影响结直肠癌患者预后的危险因素，说明结直肠癌组织中CMTM3表达降低可作为判断患者预后不良的指标。

综上所述，结直肠癌组织中CMTM3表达下调甚至缺失，其表达降低与肿瘤直径、组织分化程度、NCCN分期等有关，有可能成为新的判断结直肠癌预后的分子标记物。

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山东省医药卫生科技发展计划项目(2015WS0149)。

徐忠法(E-mail： xzfa2216@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.24.015

R735.3

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1002-266X(2016)24-0045-03

2016-02-29)