傣药“雅解沙把”对大鼠慢性酒精性胃黏膜损伤的保护作用

郭沛鑫，李奕融，郑进，陈普，张超

(云南中医学院，昆明650500)

·基础研究·

傣药“雅解沙把”对大鼠慢性酒精性胃黏膜损伤的保护作用

郭沛鑫，李奕融，郑进，陈普，张超

(云南中医学院，昆明650500)

目的 探讨傣药“雅解沙把”对大鼠慢性酒精性胃黏膜损伤的保护作用。方法 选择SD大鼠32只，随机分为空白对照组、模型对照组、“雅解沙把”低剂量组、“雅解沙把”高剂量组，每组8只。除空白对照组外，其余三组采用乙醇灌胃法(连续12周)建立慢性酒精性胃黏膜损伤模型。造模第2周开始,“雅解沙把”低、高剂量组分别给予“雅解沙把”水提液灌胃(含“雅解沙把”生药分别为0.27、2.43 g/kg)，空白对照组及模型对照组等量蒸馏水灌胃，每日1次。末次灌胃2 h，采用毛细管眶内取血，检测血清巨噬细胞趋化蛋白1(MCP-1)。取血后处死大鼠，取胃组织，测量胃溃疡面积，计算溃疡指数；制作胃组织切片，HE染色，光镜下观察胃黏膜组织病理变化。结果 空白对照组无胃溃疡形成。模型对照组及“雅解沙把”低、高剂量组均有胃溃疡形成，模型对照组胃溃疡面积及溃疡指数明显高于“雅解沙把”低、高剂量组(P<0.05或<0.01)，“雅解沙把”低、高剂量组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。组织病理切片观察发现，“雅解沙把”低、高剂量组胃黏膜损伤程度明显轻于模型对照组，“雅解沙把”高剂量组胃黏膜损伤程度低于“雅解沙把”低剂量组，但差别不大。空白对照组血清MCP-1水平为(472.33±96.11)pg/mL，模型对照组为(676.55±157.92)pg/mL，“雅解沙把”低剂量组为(348.58±55.58)pg/mL，“雅解沙把”高剂量组为(350.58±93.77)pg/mL。模型对照组血清MCP-1水平明显高于其余三组(P均<0.01)，“雅解沙把”低、高剂量组及空白对照组两两比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 傣药“雅解沙把”对大鼠慢性酒精性胃黏膜损伤具有保护作用；其作用机制可能与降低血清MCP-1水平有关。

酒精性胃黏膜损伤；傣药；雅解沙把；巨噬细胞趋化蛋白1；大鼠

傣药“雅解沙把”全方由葛根、百样解、傣百解、大黄藤等组成，对乙醇所致的胃脘痛有较好的治疗效果[1，2]。本课题组前期研究发现，“雅解沙把”能延长小鼠醉酒潜伏期、缩短醉酒持续期，降低小鼠重度酒精中毒的病死率[3，4]。但其对胃黏膜损伤是否具有保护作用，目前尚无相关研究。2015年7～10月，我们观察了“雅解沙把”对乙醇所致的大鼠慢性胃黏膜屏障损伤的保护作用。现分析结果，并探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料 SPF级SD大鼠32只，雌雄各半，7～8周龄，体质量180～220 g，由四川医学科学院实验动物研究所提供，动物许可证号：SCXK(川)2013-12；饲养于云南中医学院SPF级动物房。“雅解沙把”(商品名百解胶囊)，云南省西双版纳州傣医医院院内制剂，滇药制字(Z)20082252K，规格：0.2 g/粒。实验前由本实验室提取胶囊内容物(以下称“雅解沙把”水提液)。共提取3次，第1次加3倍水，提取30 min；第2、3次均加2倍水，提取20 min；合并3次提取液，浓缩至含1 g生药/mL，临用前配制至所需浓度。M200 PRO酶标仪，北京博宇腾辉科贸有限公司。无水乙醇，天津市致远化学试剂有限公司；巨噬细胞趋化蛋白1(MCP-1)测试盒，南京建成生物工程研究所。其余试剂均为国产分析纯。

1.2 动物分组及药物处理 随机将SD大鼠分为空白对照组、模型对照组、“雅解沙把”低剂量组(含“雅解沙把”生药0.27 g/kg)、“雅解沙把”高剂量组(含“雅解沙把”生药2.43 g/kg)，每组8只。参照文献[5，6]方法，除空白对照组外，其余三组给予乙醇灌胃造模，1次/d，共12周。第1～4周每日灌胃40%乙醇10.00 mL/kg，第5～8周每日灌胃50%乙醇11.25 mL/kg，第9～12周每日灌胃50%乙醇12.50 mL/kg。造模第2周开始，“雅解沙把”低、高剂量组分别给予“雅解沙把”水提液灌胃，生药含量分别为0.27、2.43 g/kg；空白对照组和模型对照组等量蒸馏水灌胃；均每日1次。末次给药后，眶内取血2 mL，保存备检；取血后，颈椎脱臼处死大鼠，取胃组织。

1.3 相关指标观察

1.3.1 胃黏膜损伤情况 取各组胃组织，以游标卡尺测量胃溃疡面积，计算溃疡指数；按Guth标准进行胃黏膜损伤评分[7]：正常胃黏膜为0分，点状损伤计1分，病损<1 mm计2分，病损≥1～<2 mm计3分，病损≥2～<4 mm计4分，病损≥4 mm计5分。损伤宽度>2 mm，损伤指数计分×2。溃疡指数即全胃各病灶计分的总和。

1.3.2 胃黏膜组织病理观察 取各组胃组织，沿胃小弯至胃大弯切取1条胃黏膜组织(宽约10 mm)，10%甲醛固定，石蜡包埋，5 μm厚切片，HE染色，光镜下观察胃黏膜组织病理改变。

1.3.3 血清MCP-1检测 取眶内血2 mL，3 000 r/min离心10 min，分离血清。采用ELISA法检测血清MCP-1。

2 结果

2.1 各组胃黏膜损伤情况比较 空白对照组无胃溃疡形成。模型对照组及“雅解沙把”低、高剂量组均有胃溃疡形成；模型对照组胃溃疡面积及溃疡指数明显高于“雅解沙把”低、高剂量组(P<0.05或<0.01)，而“雅解沙把”低、高剂量组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。各组胃溃疡面积及溃疡指数比较见表1。

表1 各组胃溃疡面积及溃疡指数比较

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.2 各组胃黏膜组织病理观察 空白对照组胃黏膜光滑，黏膜上皮完整，腺体排列整齐，未见出血、糜烂、溃疡，皱襞光整，未见明显隆起。模型对照组胃黏膜明显充血、水肿，有新鲜出血附着，可见点灶状糜烂及条线状溃疡，黏膜变白，皱襞隆起；黏膜结构排列紊乱失去完整性及连续性，可见黏膜上皮脱落，黏膜下层血管扩张充血，大量炎性细胞浸润。“雅解沙把”低剂量组有少量点状及线状溃疡，充血水肿较轻，有黏膜上皮脱落，可见炎性细胞浸润。“雅解沙把”高剂量组胃黏膜上皮细胞清晰，充血水肿较轻，可见少量黏膜上皮脱落及中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞浸润。模型对照组胃黏膜损伤情况明显重于“雅解沙把”低、高剂量组。“雅解沙把”高剂量组胃黏膜损伤程度低于“雅解沙把”低剂量组，但差别不大。见插页Ⅱ图4。

2.3 各组血清MCP-1水平比较 空白对照组血清MCP-1水平为(472.33±96.11)pg/mL，模型对照组为(676.55±157.92)pg/mL，“雅解沙把”低剂量组为(348.58±55.58)pg/mL，“雅解沙把”高剂量组为(350.58±93.77)pg/mL。模型对照组血清MCP-1水平明显高于其余三组(P均<0.01)，“雅解沙把”低、高剂量组及空白对照组两两比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。

3 讨论

胃脘痛是指上腹胃脘部近心窝处经常发生疼痛为主症的病证，可伴脘腹胀满，嗳腐吞酸，恶心呕吐，不思食，大便或结或溏等脾胃症状，以及神倦乏力、面黄消瘦、浮肿等全身症状。胃溃疡、急慢性胃炎、胃黏膜脱垂等均可出现胃脘痛，其主要原因为胃黏膜屏障损伤[8，9]。目前多数学者认为，胃黏膜屏障受损与胃黏膜攻击因子和防御因子的平衡失调有关[10，11]。攻击因子主要包括胃酸、胃蛋白酶、幽门螺杆菌、酒精、炎症等，防御因子主要包括黏膜屏障、碳酸氢盐屏障及黏膜下血流屏障等。减弱攻击因子或增强防御因子均能达到保护胃黏膜屏障的作用[12，13]。

胃黏膜屏障损伤过程往往伴随炎症反应的发生。在此过程中，胃黏膜肥大细胞释放出5-羟色胺、白介素、血管活性肠肽、一氧化氮等炎性介质，使毛细血管通透性增加，大量蛋白渗漏，胃黏膜血流减少，导致胃黏膜微循环障碍，同时炎症介质可介导淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞的聚集、黏附、浸润，导致胃黏膜损伤[14，15]。另外，胃黏膜肥大细胞可释放组胺与胃黏膜壁细胞H2受体结合，刺激胃酸分泌，加重胃黏膜损伤[16，17]。MCP-1属于趋化因子家族成员之一。以往研究认为，MCP-1由单核细胞、巨噬细胞和成纤维细胞分泌[18]。近年研究发现，胃黏膜肥大细胞颗粒中纤维蛋白溶酶可促进人内皮细胞MCP-1表达增加[19，20]。MCP-1可通过不同的跨膜信号转导通路，激活与细胞运动、侵袭和存活等相关的各种基因的转录；通过趋化作用，趋化白细胞亚群的召集和运输；调控树突状细胞和淋巴细胞的发育成熟，与炎症过程和免疫调节有关[21]。胃癌的发生、发展常伴随着MCP-1高表达[22，23]。MCP-1对单核细胞、T细胞和NK细胞均有趋化作用，可诱导单核细胞、内皮细胞表达黏附分子，使各种炎性细胞尤其是单核细胞向病变部位聚集[24，25]。因此，血清MCP-1水平对评价药物效果、病情发展和预后具有重要意义。

胃脘痛属傣医“拢接崩”的范畴，傣医认为，该病的发生是由于体内“四塔”(风、火、水、土)、“五蕴”(色、识、受、想、行)功能失调(尤其是风、水、土失调)及“五蕴”受损引起。“雅解沙把”为傣药复方制剂，全方由葛根、百样解、傣百解、大黄藤等组成。该制剂通过调平“四塔”、“五蕴”，行气破瘀，消食消胀，理气止痛，对酒精性胃脘痛有较好的治疗作用。因酒精性胃脘痛与胃黏膜屏障损伤及炎症因子侵袭密切相关。因此推测，通过降低炎症因子的表达、消除炎症反应可保护胃黏膜屏障。本研究结果显示，模型对照组及“雅解沙把”低、高剂量组均有胃溃疡形成；其中，模型对照组胃溃疡面积及溃疡指数明显高于“雅解沙把”低、高剂量组，但“雅解沙把”低、高剂量组比较差异无统计学意义；胃黏膜组织病理显示，“雅解沙把”低、高剂量组胃黏膜损伤均轻于模型对照组，“雅解沙把”高剂量组胃黏膜损伤程度低于“雅解沙把”低剂量组，但差别不大；模型对照组血清MCP-1水平明显高于空白对照组和“雅解沙把”低、高剂量组，“雅解沙把”低、高剂量组及空白对照组两两比较差异均无统计学意义。证实“雅解沙把”对乙醇导致的胃黏膜损伤具有保护作用。

综上所述，“雅解沙把”对大鼠慢性酒精性胃黏膜损伤具有保护作用；其机制可能是通过降低血清MCP-1水平，继而减少胃黏膜屏障的攻击因子。

[1] 曾君，曾湘荣.傣药雅解沙把(百解胶囊)的研究概况[J].中国民族民间医药，2009，18(21)：23-24.

[2] 吕显荣，张闯，陈眉，等.傣医“雅解”理论及其方药的研究进展[J].云南中医学院学报，2009，32(2)：23-26.

[3] 李相融，代蓉，王辉，等.傣医解药“雅解沙把”防醉、解酒作用的实验研究[J].中国民族医药杂志，2012，21(11)：60-63.

[4] 代蓉，李相融，李松梅，等.傣药“雅解沙把”对醉酒小鼠平衡失调的影响[J].云南中医学院学报，2012，35(2)：8-10.

[5] 王炳元，吴作艳，曹艳雪，等.慢性乙醇摄取对胃黏膜损害的实验研究[J].中国药科大学学报，2003，32(1)：13-14.

[6] Wang BY, Liu DP, Fu BY, et al. Relationship between establishment of experimental alcoholic liver fibrosis and serum fibrosis marks[J]. J Gastroenterol Hepatol, 2000,15(Suppl):1218.

[7] 高会军，黄裕新，王胜智，等.应激对大鼠胃黏膜VCL和海马NMDAR2表达的影响[J].山西医科大学学报，2012，43(10)：727-730.

[8] 丁全祥，丁全茂.手法治疗胃脘痛临床研究进展[J].中医药导报，2014，20(7)：97-98.

[9] 郭新雪，朱先康.中医治疗小儿胃脘痛研究进展[J].辽宁中医药大学学报，2013，15(1)：212-214.

[10] 王莹，丁世兰，齐学洁，等.应激性胃溃疡发病机制与中医药治疗的研究进展[J].天津中医药，2013，30(3)：186-189.

[11] 梅杰，李芳，陈建敏，等.胃黏膜屏障与胃溃疡的研究进展[J].实用医学杂志，2009，25(6)：841-843.

[12] 陈建章，陈文，喻菁，等.半四左方对胃溃疡大鼠表皮细胞生长因子和转化生长因子的影响[J].时珍国医国药，2014，25(2)：313-314.

[13] 陆再英，钟南山.内科学[M].北京：人民卫生出版社，2008：387.

[14] 罗丹，向未，肖国辉，等.胃黏膜屏障功能及其中医外治法的研究进展[J].光明中医，2014，29(1)：202-204.

[15] 沈贵芳，赵伟春，张文诗.胃黏膜损伤防御机制的研究进展[J].世界中西医结合杂志，2011，6(3)：257-260.

[16] Kong W, Wang J, Ping X, et al. Biomarkers for assessing mucosal barrier dysfunction induced by chemotherapy: identifying a rapid and simple biomarker[J]. Clin Lab, 2015,61(3-4):371-378.

[17] Yuan XG, Xie C, Chen J, et al. Seasonal changes in gastric mucosal factors associated with peptic ulcer bleeding[J]. Exp Ther Med, 2015,9(1):125-130.

[18] 曾钧.单核细胞趋化蛋白-1与炎性疾病的研究现状[J].第一军医大学学报，2001，21(12)：84-87.

[19] 郭海平，高桦，邱明才.吡格列酮对糖尿病大鼠胃黏膜肥大细胞和单核细胞趋化蛋白-1表达的影响[J].实用医学杂志，2010，26(17)：3112-3114.

[20] 沈艳婷，阙任烨，陶智会，等.纳达合剂对胆汁反流性胃炎大鼠胃黏膜TNF-α、IL-8、ICAM-1及MCP-1的影响[J].上海中医药大学学报，2015，29(6)：55-59，69.

[21] 张哲，王艳红.单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1/CCL2)与肿瘤关系的研究进展[J].中国临床医学，2008，15(5)：735-737.

[22] 陈海涛，张文俊.单核细胞趋化蛋白-1与胃癌关系的研究进展[J].国际消化病杂志，2014，34(3)：198-200.

[23] 宋军民，刘明华，李岩.MCP-1诱导人胃癌细胞NF-κB-p65的表达和核移位[J].胃肠病学和肝病学杂志，2013，22(9)：841-843.

[24] Deng B, Fang F, Yang T, et al. Ghrelin inhibits AngⅡ-induced expression of TNF-α, IL-8, MCP-1 in human umbilical vein endothelial cells[J]. Int J Clin Exp Med, 2015,8(1):579-588.

[25] Li S, Wang W, Zhang N, et al. IL-1β mediates MCP-1 induction by Wnt5a in gastric cancer cells[J]. BMC Cancer, 2014(14):480.

国家自然科学基金资助项目(81160555)。

张超(E-mail： zhangc19@21cn.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.24.008

R573.3

A

1002-266X(2016)24-0026-03

2015-11-15)