卵巢癌组织CXCL12、MMP-9、integrin β1表达及意义

刘静，张柳，杨勇，李春燕，郭华雄

(荆州市中心医院，湖北荆州434020)

卵巢癌组织CXCL12、MMP-9、integrin β1表达及意义

刘静，张柳，杨勇，李春燕，郭华雄

(荆州市中心医院，湖北荆州434020)

目的 探讨趋化因子CXCL12、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及整合素β1(integrin β1)在卵巢癌发生、发展中的作用。方法 选取60例份卵巢癌组织、20例份卵巢交界性肿瘤组织及10例份卵巢良性肿瘤组织，采用免疫组化Envision法检测CXCL12、MMP-9及integrin β1阳性表达率，分析CXCL12、MMP-9及integrin β1阳性表达与卵巢癌患者临床病理参数的关系及卵巢癌组织中CXCL12、MMP-9、integrin β1表达的关系。结果 卵巢癌组织中CXCL12、MMP-9及integrin β1阳性表达率均高于卵巢交界性肿瘤组织及卵巢良性肿瘤组织(P均<0.01)。CXCL12阳性表达与卵巢癌临床分期、淋巴结转移及腹水有关(P<0.05或<0.01)，MMP-9及integrin β1表达均与卵巢癌组织学分级、TNM分期、淋巴结转移及腹水有关(P<0.05或<0.01)。卵巢癌组织中CXCL12表达与MMP-9及integrin β1表达均呈正相关(r分别为0.328、0.332，P均为0.001)，MMP-9表达与integrin β1表达呈正相关(r=0.447，P=0.000)。结论 卵巢癌组织CXCL12、MMP-9及integein β1均高表达，三者协同作用，共同促进卵巢癌的发生、发展。

卵巢肿瘤；趋化因子CXCL12；基质金属蛋白酶9；整合素β1

卵巢癌是妇科三大恶性肿瘤之一，病死率高，导致患者死亡的主要原因是种植转移。趋化因子CXCL12是由骨髓基质细胞产生的前B淋巴细胞活化因子，介导炎症反应，被认为是炎症趋化因子。研究发现，CXCL12与其特异性受体CXCR4结合构成CXCL12/CXCR4生物轴，对肿瘤的发生、发展具有重要的调控作用[1]。基质金属蛋白酶9(MMP-9)是一种能降解细胞外基质成分的重要蛋白水解酶，参与多种恶性肿瘤的侵袭转移过程。整合素β1(integrin β1)主要与细胞和间质黏附有关，与细胞基质成分相结合，激活整合素下游相关基因，在肿瘤侵袭转移中发挥重要作用。本研究检测卵巢癌组织CXCL12、MMP-9及integrin β1蛋白表达，探讨其在卵巢癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 60例卵巢癌患者于2007～2013年于荆州市中心医院行手术治疗，患者年龄28～69岁、平均52.4岁，>50岁36例、≤50岁24例。术前均未行放化疗，术后均留取卵巢癌组织(卵巢癌组)，均经病理检查证实诊断。组织学分型：浆液性癌45例，黏液性癌15例；参照女性生殖系统肿瘤WHO(2003年版)标准：高分化(G1)15例，中分化(G2)25例，低分化(G3)20例；根据国际妇产科联盟FIGO分期标准：Ⅰ 期10例，Ⅱ 期18例，Ⅲ 期27例，Ⅳ 期5例；伴有淋巴结转移28例；伴腹水且找到癌细胞32例(腹水阳性)，无腹水或腹水未找到癌细胞28例(腹水阴性)。另外选取卵巢交界性肿瘤组织20例份(交界性肿瘤组)、卵巢良性肿瘤组织10例份(良性肿瘤组)作为对照。三组患者年龄具有可比性。

1.2 CXCL12、MMP-9及integrin β1表达检测 三组标本均经10%中性甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，行4 μm连续切片，采用Envision法进行免疫组织化学染色，以PBS代替一抗作为阴性对照，以已知阳性片作为阳性对照。具体操作步骤参照试剂盒说明书。结果判定标准：以细胞膜和细胞质呈黄色或棕黄色为CXCL12、MMP-9及integrin β1阳性表达。采用半定量-积分法对染色强度及阳性细胞数进行评分[2]。染色强度：阴性记0分，淡黄色记1分，棕黄色记2分，棕褐色记3分；阳性细胞数：无阳性细胞记0分，阳性细胞≤10%记1分，11%～50%记2分，51%～75%记3分，>75%记4分；染色强度评分和阳性细胞数评分乘积≥3判定为阳性。分析CXCL12、MMP-9及integrin β1表达与卵巢癌患者临床病理参数的关系及CXCL12、MMP-9、integrin β1表达之间的关系。

1.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。计数资料组间比较采用χ2检验；相关性分析采用Spearman等级相关性分析法。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组CXCL12、MMP-9及integrin β1表达 见表1。

表1 三组CXCL12、MMP-9及integrin β1表达比较

注：与良性肿瘤组比较，*P<0.01；与交界性肿瘤组比较，△P<0.01。

2.2 卵巢癌组织中CXCL12、MMP-9及integrin β1阳性表达与患者临床病理参数的关系 见表2。

表2 卵巢癌组织中CXCL12、MMP-9及integrin β1表达与患者临床病理参数的关系

2.3 卵巢癌组织CXCL12、MMP-9、integrin β1表达之间的关系 卵巢癌组织中CXCL12表达与MMP-9及integrin β1表达均呈正相关(r分别为0.328、0.332，P均为0.001)，MMP-9表达与integrin β1表达呈正相关(r=0.447，P=0.000)。

3 讨论

肿瘤的发生、侵袭、转移是一个主动的、有规律的过程，趋化因子在其中发挥重要作用[3]。趋化因子CXCL12是由68个氨基酸组成，属于CXC趋化因子家族成员。近年来研究发现，CXCL12除趋化作用外还可通过与其特异性受体结合形成生物轴，激活G蛋白介导的信号传导通路，从而促进肿瘤的发生、发展[4]。CXCR4特异性抑制剂AMD3100可阻断CXCL12诱导的信号传导通路[5]。Zhao等[6]研究显示，CXCL12在肿瘤的发生、发展过程中表现为双向调节作用，一方面通过促进细胞外基质的降解，促进肿瘤生长及发生浸润转移；另一方面通过趋化、活化免疫细胞捕获迁移中的肿瘤细胞或直接通过抑制血管增殖，发挥抗肿瘤作用。对胰腺癌的研究发现，CXCL12抑制胰腺导管癌的发生及发展[7]。本研究结果显示，CXCL12高表达促进卵巢癌的发生、发展，与Ghanem等[8]对肝癌的研究结果一致；其机制可能为CXCL12与其特异性受体CXCR4结合，激活G蛋白，使PI3K磷酸化，激活局部黏着酶(FAK)，启动一系列信号传导通路[9]。整合素(integrins)是一类位于细胞表面的黏附分子，可介导细胞与细胞、细胞与基质间的反应，参与细胞信号传导、黏附及迁移，并调控细胞分化及增殖等多个生理过程[10]。本研究结果显示，integrin β1高表达参与卵巢癌的发生、发展，激活、调节癌细胞的黏附与迁移可能是其作用机制[11]。MMP-9在多种恶性肿瘤中高表达，通过降解基底膜中的Ⅳ型胶原和凝胶，促进肿瘤细胞发生侵袭转移[12]。本研究中卵巢癌组织MMP-9高表达促进卵巢癌的发生、发展，其机制可能为卵巢癌中MMP-9过表达破坏基底膜，进而促进卵巢癌细胞浸润转移。

本研究卵巢癌组织中CXCL12、integrin β1、MMP-9表达均呈正相关，提示三者之间具有协同作用，共同促进卵巢癌的发生、发展。CXCL12与其受体CXCR4结合后可激活细胞表面integrin β1，增强肿瘤细胞与细胞外基质之间的黏附，调节肿瘤细胞的运动与迁移，促进侵袭转移[13，14]。Laird等[15]研究发现，CXCL12可通过CXCR4/ERK/NF-κB信号传导促进MMP-9表达，或直接诱导肿瘤细胞分泌MMP-9，从而破坏肿瘤血管壁的基底膜，进而重塑血管、诱导新生血管生长，促进肿瘤发生浸润转移[15,16]。

综上所述，卵巢癌组织中CXCL12、MMP-9及integein β1表达均增加，三者之间协同作用，共同参与卵巢癌的发生、发展。

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荆州市科技发展计划项目(2009-13-15)。

郭华雄(E-mail: ghx8361@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.28.017

R737.31

B

1002-266X(2016)28-0050-03

2015-11-05)