胃癌组织Hp检测、SOX2蛋白表达变化及意义

李多，赵文月，齐维娟，高会斌，白文元

(1河北北方学院附属第一医院，河北张家口075000；2 河北医科大学附属第二医院)

胃癌组织Hp检测、SOX2蛋白表达变化及意义

李多1，赵文月1，齐维娟1，高会斌1，白文元2

(1河北北方学院附属第一医院，河北张家口075000；2 河北医科大学附属第二医院)

目的 探讨幽门螺旋杆菌(Hp)感染和性别决定相关基因簇2(SOX2)在胃癌发生、发展中的作用。方法 选择慢性萎缩性胃炎患者40例(慢性萎缩性胃炎组)、萎缩性胃炎伴肠化生或不典型增生患者40例(不典型增生组)、胃癌患者50例(胃癌组)，采用13C呼气试验和吉姆萨染色法检测各组Hp感染情况，采用免疫组化法检测各组SOX2蛋白表达情况，分析Hp感染及SOX2蛋白表达与胃癌患者临床病理参数的关系。结果 胃癌组、不典型增生组Hp阳性例数明显高于慢性萎缩性胃炎组(P均<0.05)，SOX2阳性表达例数明显低于慢性萎缩性胃炎组(P均<0.05)，且胃癌组SOX2阳性表达例数低于不典型增生组(P<0.05)，胃癌组、不典型增生组Hp阳性例数比较P>0.05。Hp阳性与胃癌患者肿瘤浸润深度有关(P<0.05)，与患者性别、年龄、肿瘤直径、临床分期、组织分化程度均无关(P均>0.05)；SOX2阳性表达与胃癌临床分期、浸润深度、组织分化程度有关(P均<0.05)，与患者性别、年龄、肿瘤直径无关(P均>0.05)。胃癌组织Hp感染与SOX2阳性表达呈负相关(r=-0.811，P<0.01)。结论 Hp感染和SOX2阳性表达增加均与胃癌的发生、发展有关。

胃癌；幽门螺旋杆菌；性别决定相关基因簇2

文献报道，胃癌发病原因与幽门螺旋杆菌(Hp)感染、遗传、环境、饮食等有关，其发病过程为正常胃黏膜→慢性萎缩性胃炎→胃黏膜不典型增生→胃癌[2，3]。干细胞转录调控因子性别决定相关基因簇2(SOX2)是SRY-related HMG-box (SOX)家族的成员之一，参与胚胎发育的调节；在人类胃上皮细胞中可见SOX2表达，主要位于胃底和幽门黏膜，在结肠中不表达，故亦被称为胃特异性转录因子[4]，控制胃蛋白酶和胃黏膜上皮细胞表型标志物MUC5AC的表达。由于SOX2在胃的胚胎发育、分化和维持正常胃表型和功能中具有重要作用，因此推测它可能与胃癌的发生、发展有关，但目前关于二者关系的报道较少[5]。为此，本研究观察胃癌组织Hp感染情况及SOX2表达情况，并探讨二者与胃癌发生、发展的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2014年1月～2015年1月河北北方学院附属第一医院收治的慢性萎缩性胃炎患者40例(萎缩性胃炎组)、萎缩性胃炎伴肠化生或不典型增生患者40例(不典型增生组)、胃癌患者50例(胃癌组)，三组均经胃镜活检和术后组织病理检查明确诊断。其中萎缩性胃炎组男24例、女16例，年龄(60.32±9.73)岁；不典型增生组男19例、女21例，年龄(59.07±10.56)岁；胃癌组男32例、女18例，年龄(57.62±8.69)岁，肿瘤直径≤5 cm 21例、>5 cm 29例，组织分化程度为高中分化14例、低分化36例，参照2001年国际抗癌联合会修订的分期标准，T1+T2期20例、T3+T4期30例。所有患者胃镜检查前4周均无抗Hp治疗及服用非甾体抗炎药物史。

1.2 Hp检测 ①13C呼气试验。各组空腹6 h以上，收集呼出气100 mL；口服13C-尿素，收集呼出气100 mL；连接13C红外线能谱仪检测孔，自动检测。以测量值与基准值的差值>2.5为阳性。②改良Giemsa染色。取活检标本经10%甲醛固定，梯度乙醇脱水，石蜡包埋，4 μm厚切片，常规脱蜡，Giemsa染色30 min，纯乙醇内脱水，二甲苯透明，树胶封固。在1 000倍油镜下观察Hp感染情况，Giemsa染色后Hp为红色，呈“S”状，分布在胃小凹和腺腔中。13C呼气试验、改良Giemsa染色法同时阳性判定为Hp阳性，否则为阴性。

1.3 SOX2表达检测 采用免疫组化法。取各组织石蜡切片，60 ℃烤片80 min，二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱蜡，浸于柠檬酸盐配制的修复液高温高压10 min进行组织抗原修复，3%双氧水阻断内源性过氧化物酶；滴加20 μL兔抗人SOX2多克隆抗体(1∶200)，将切片置于湿盒内，4 ℃过夜，PBS冲洗3次；滴加生物素标记的二抗50 μL，37 ℃孵育30 min，PBS冲洗；滴加链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液50 μL，37 ℃孵育30 min，PBS冲洗；加入DAB 100 μL显色，最后经过苏木素染色和盐酸酒精分化后脱水封片，倒置显微镜下(200倍)拍照观察。SOX2染色结果判定：SOX2阳性颗粒定位于细胞核，呈棕黄色颗粒。随机观察5～10个高倍镜视野，记数100个肿瘤细胞，阳性细胞百分比<5%记为0分，≥5%～<25%记为1分，≥25%～<50%记为2分，≥50%记为3分；着色呈淡黄色记为1分，黄色记为2分，棕黄色记为3分。阳性细胞百分比及着色强度评分乘积为0分记为阴性，1～3分记为弱阳性，4～6分记为中度阳性，7～9分记为强阳性；弱阳性、中度阳性、强阳性均记为阳性。

1.4 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验。相关性分析采用Person列联系数法。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组Hp感染及胃组织SOX2表达比较 见表1。

表1 各组Hp感染及胃组织SOX2表达比较(例)

注：与萎缩性胃炎组比较，*P<0.05；与不典型增生组比较，#P<0.05。

2.2 Hp感染、SOX2阳性表达与胃癌患者临床病理参数的关系 Hp感染与肿瘤浸润深度有关(P<0.05)，与患者性别、年龄、肿瘤直径、临床分期、组织分化程度均无关(P均>0.05)。SOX2阳性表达与胃癌临床分期、浸润深度、组织分化程度均有关(P均<0.05)，与患者性别、年龄、肿瘤直径均无关(P均>0.05)。见表2。

2.3 胃癌组织Hp感染与SOX2表达的关系 胃癌患者Hp阳性者SOX2阳性表达2例(5.56%)，Hp阴性者SOX2阳性5例(35.71%)。经过Person列联系数法分析，胃癌组织Hp感染与SOX2阳性表达呈负相关(r=-0.811，P<0.01)。

3 讨论

胃癌是我国最常见的消化系统恶性肿瘤之一，其发病涉及多个因素，如Hp感染、遗传因素和环境因素等。 在慢性胃炎发展为胃癌的过程中， 众多致病因子可能作用于胃癌的不同时期。国内外研究表明，Hp感染与胃癌的发病有关，但其机制尚未完全明确。Hp感染后引起胃黏膜急慢性炎性反应，细胞凋亡与增殖平衡紊乱，胃癌相关基因突变，引起端粒酶活性增加，诱导胃黏膜上皮细胞线粒体基因突变，促进胃癌的发生[6]。

流行病学调查显示，普通人群Hp感染率为40%～60%，Hp感染难以清除，多造成终身感染。有文献报道，在慢性浅表性胃炎患者如伴发Hp感染可使泌酸腺萎缩，引起慢性萎缩性胃炎；感染持续存在可加重胃黏膜炎症，引发溃疡，最终可能导致胃癌的发生[7]。Hp感染引起胃黏膜炎症，使细胞异常增殖[8]，并导致细胞周期调控蛋白异常表达[9]，可能是其导致癌变的机制。研究发现，胃黏膜中可以产生多种细菌毒力因子[10]。本研究发现，萎缩性胃炎组、不典型增生组和胃癌组Hp感染率逐渐升高，说明Hp感染在慢性非萎缩性胃炎→萎缩性胃炎伴肠化生或不典型增生→胃癌演变过程中起重要作用。相关分析发现，Hp感染仅与胃癌患者肿瘤浸润深度有关，与患者年龄、性别、肿瘤直径、临床分期及分化程度等因素无关，表明Hp感染可能促使慢性胃炎向胃癌的演变，但其具体机制尚不清楚，需进一步探索。

SOX基因是一类功能性很强的基因，位于染色体3q26.3-27，其编码蛋白质由317个氨基酸残基构成，其氨基酸序列高度保守，在许多物种的睾丸和其他组织分化和发育过程中发挥重要作用[11]。SOX基因参与胚胎早期发育，其中B族的SOX2基因报道较多[12]，其表达于早期神经板和神经管中，可作为神经系统发育的标志[13]，定点打靶产生的SOX2缺失纯合子在胚胎植入前就会死亡[14]。此外，SOX2是决定胃黏膜上皮分化的重要转录因子，控制胃黏膜上皮细胞的分化，调控胃分化标志物的表达[15]。本研究结果显示，胃癌组SOX2阳性表达明显低于非萎缩性胃炎和不典型增生组，而且在萎缩性胃炎伴肠化生或不典型增生组织中的阳性表达低于慢性非萎缩性胃炎组织。此外，SOX2阳性表达与胃癌患者临床分期、浸润深度、组织分化程度有关，与患者性别、年龄、肿瘤直径无关。SOX2表达情况可作为胃癌诊断和判断预后的指标。

本研究还发现，胃癌组织Hp感染与SOX2阳性表达呈负相关关系。推测Hp感染胃黏膜后通过氧化损伤产生大量细胞因子如白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子等诱发SOX2甲基化，使SOX2表达减少，部分胃组织出现不典型增生。

综上所述，Hp感染以及SOX2阳性表达与胃癌的发生、发展有关，检测二者可为胃癌的诊断、治疗和临床监测提供依据。

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