鼻咽癌组织MTDH、MMP-9表达及意义

陈应超，李泽文，周洁，肖兰，刘汉忠

(孝感市中心医院，湖北孝感 432100)

鼻咽癌组织MTDH、MMP-9表达及意义

陈应超，李泽文，周洁，肖兰，刘汉忠

(孝感市中心医院，湖北孝感 432100)

目的 观察鼻咽癌组织异黏蛋白(MTDH)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达变化，探讨其意义。方法 采用免疫组化法检测60例份鼻咽癌组织(观察组)、26例份慢性鼻咽炎组织(对照组)中MTDH及MMP-9蛋白表达，并分析MTDH及MMP-9与鼻咽癌患者临床病理参数的关系，及二者表达的相关性。结果 观察组与对照组MTDH阳性表达率分别为53.3%(32/60)、11.5%(3/26)，二者比较P<0.01；MMP-9阳性表达率分别为71.7%(43/60)、34.6%(9/26)，二者比较P<0.01。MTDH阳性表达与鼻咽癌淋巴结转移及临床分期有关(P均<0.05)，MMP-9阳性表达与鼻咽癌淋巴结转移有关(P<0.05)。鼻咽癌组织MTDH表达与MMP-9表达呈正相关(r=0.376，P<0.01)。结论 鼻咽癌组织中MTDH、MMP-9表达均升高，MTDH及MMP-9高表达可能在鼻咽癌的发生及转移过程中发挥重要作用。

鼻咽癌；异黏蛋白；基质金属蛋白酶9

鼻咽癌是我国发病率较高的恶性肿瘤之一，且具有高转移性的特征。异黏蛋白(MTDH)又称AEG-1、LYRIC、3D3，是近年来发现的一个癌基因，在多种人类肿瘤组织中高表达，被认为与肿瘤的侵袭、转移及预后不良有关[1]。基质金属蛋白酶9(MMP-9)是一种重要的蛋白水解酶，通过降解细胞外基质(ECM)及基底膜的重要成分参与肿瘤的侵袭和转移过程[2]。MTDH可通过调控MMP-9，在ECM降解、细胞侵袭及转移过程中发挥重要作用[3,4]。目前在鼻咽癌组织中MTDH、MMP-9的相关研究鲜见报道。本研究观察鼻咽癌组织中MTDH、MMP-9的表达变化，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2010～2013年孝感市中心医院收治的鼻咽癌患者60例，男37例、女23例，年龄27～74(57.0±16.7)岁。均经病理学检查证实，术前均未行放、化疗。根据2002年美国联合委员会(AJCC)标准进行分期：T1、T2期26例，T3、T4期34例；无淋巴结转移24例，有淋巴结转移36例；临床分期Ⅰ期+Ⅱ期27例、Ⅲ期+Ⅳ期33例；60例活检标本均为低分化鳞状细胞癌。手术留取鼻咽癌组织60例份为观察组，另取同期慢性鼻咽炎组织26例份为对照组。对照组男15例、女11例，年龄22～72 (57.0±16.2)岁。两组性别比、年龄具有可比性。

1.2 MTDH、MMP-9表达检测 采用免疫组化SP法。MTDH兔抗人多克隆抗体(ZA-0346)、MMP-9兔抗人多克隆抗体(ZA-0336)、免疫组化试剂盒(SP-9000)、DAB显色试剂盒均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。常规脱蜡、水化，4 μm连续切片；抗原修复：采用枸橼酸缓冲液(pH 6.0)高压下修复10 min，室温下3% H2O2封闭10 min；滴加MTDH抗体(1∶100)及MMP-9抗体(即用型) 4 ℃孵育过夜，滴加二抗，DAB显色、苏木精复染后脱水封片。染色结果判断：MTDH及MMP-9均以细胞质染色为主，以细胞质染成棕黄色或棕褐色为阳性。采用双盲法，结合阳性细胞率及显色程度进行半定量处理。阳性细胞率评分：阳性细胞率≤10%、>10%～50%、>50%～80%、>80%分别记0、1、2、3分。显色程度评分：无显色为0分、浅黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分。以上两项评分之积<3分为阴性，≥3分为阳性[5]。分析鼻咽癌组织MTDH、MMP-9阴性表达与患者临床病理参数的关系，及二者表达的相关性。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

观察组与对照组MTDH阳性表达率分别为53.3%(32/60)、11.5%(3/26)，两组比较P<0.01；MMP-9阳性表达率分别为71.7%(43/60)、34.6%(9/26)，两组比较P<0.01。MTDH阳性表达与鼻咽癌患者淋巴结转移及临床分期有关(P均<0.05)，MMP-9阳性表达与鼻咽癌淋巴结转移有关(P<0.05)。鼻咽癌组织MTDH及MMP-9表达与患者临床病理参数的关系见表1。

相关性分析显示， 鼻咽癌组织MTDH表达与MMP-9表达呈正相关(r=0.376，P<0.01)。

表1 鼻咽癌组织MTDH及MMP-9表达与患者临床病理参数的关系

3 讨论

MTDH基因定位于8q22染色体，包含12个外显子和11个内含子，总长度85 482 bp；通过PI3K/Akt、NF-κB、Wnt/β-catenin等信号通路促进肿瘤的发生、发展，包括启动肿瘤细胞的增殖与凋亡、增强肿瘤细胞的侵袭与转移、提高肿瘤细胞对化疗药物及放射线的耐受性等[1]。MTDH在正常组织中不表达或低表达，但在多种肿瘤如结肠腺癌[5]、食管鳞癌[6]、舌鳞癌[7]、胰腺癌[8]等组织中过表达。本研究观察组MTDH阳性表达率显著高于对照组，提示MTDH过表达与鼻咽癌的发生有关。MTDH的致癌活性与其对细胞增殖、凋亡的异常调节有关。研究发现，MTDH通过AKT/FOX03a信号通路影响细胞周期，上调CyclinD表达、下调p27表达，加速细胞的恶性增殖[6]；MTDH通过PI3K/Akt信号通路，下调促凋亡蛋白BAD与p21表达、上调MDM2表达，导致抑癌基因p53失活，抑制细胞凋亡[9]。本研究显示，MTDH过表达与鼻咽癌淋巴结转移及临床分期有关，提示MTDH可作为评估鼻咽癌恶性程度及转移的分子指标之一。在食管鳞癌[6]、舌鳞癌[7]中亦发现，MTDH高表达与肿瘤的分化程度、TNM分期相关，是患者预后的独立影响因素。MTDH促进肿瘤恶性发展及转移的可能机制包括：①下调E-cadherin表达，促进上皮-间质转化(EMT)，进而促进转移[8,10,11]；②诱导MMPs表达，加速ECM降解[3～5]；③促进新生血管形成[8,12]。

ECM及基底膜是阻碍肿瘤细胞侵袭和转移的主要屏障。MMP-9是降解基底膜及ECM的重要水解酶之一，通过降解其主要成分(如Ⅳ、Ⅴ型胶原和明胶等)参与肿瘤的侵袭和转移[2]。本研究观察组MMP-9阳性表达率显著高于对照组，且MMP-9阳性表达与淋巴结转移有关，证实了MMP-9在鼻咽癌发生及转移中的作用，与其他研究结果相似[13,14]。研究表明，过表达的MTDH可作用于MMP-9的启动子并激活MMP-9表达，抑制内源性MMP-9表达，显著降低MTDH对肿瘤细胞所产生的侵袭性影响[3]。在MTDH基因沉默的子宫颈癌细胞中，其瘤细胞的侵袭能力明显降低；下调MTDH表达后，MMP-9表达亦减少[4]。张伟等[5]应用免疫组化法检测了结肠腺癌中MTDH和MMP-9蛋白的表达，发现两者的表达呈正相关，认为两者可能协同促进结肠腺癌的发展。本研究鼻咽癌组织中MTDH与MMP-9的表达呈正相关，推测鼻咽癌组织MTDH过表达可能通过上调MMP-9表达为癌细胞向ECM侵袭提供前提条件。

总之，鼻咽癌组织中MTDH及MMP-9表达增加，二者高表达可能在鼻咽癌的发生及转移中发挥重要作用，但其具体调控机制有待进一步的研究。

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孝感市中心医院院内基金资助项目(201211)。

周洁(E-mail: cycpcy2001@sina.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.28.022

R739.6

B

1002-266X(2016)28-0063-03

2015-11-27)