微生物比浊法测定注射用替考拉宁的效价含量

2016-05-04张文杰沈阳医学院附属第二医院药剂科辽宁沈阳110002

中国医院用药评价与分析 2016年3期

张文杰(沈阳医学院附属第二医院药剂科，辽宁沈阳　110002)

张文杰*(沈阳医学院附属第二医院药剂科，辽宁沈阳110002)

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.03.031

摘要目的：建立比浊法测定注射用替考拉宁效价含量的方法，以用于其质量控制。方法：分别采用微生物比浊法和管碟法对注射用替考拉宁的效价进行检定，比较2种方法的效果。结果：替考拉宁线性范围为5.0～15.0 u/ml，浓度的对数与吸光度成良好的线性关系，线性方程为A=1.372-0.792 6l gC(r=0.997)，平均回收率为100.46%，RSD为0.85%。结论：比浊法和管碟法测定注射用替考拉宁效价含量的结果无显著差异。微生物比浊法灵敏、准确、可靠、重现性好，可用于注射用替考拉宁的质量控制。

关键词效价；含量；比浊法；管碟法；替考拉宁

Determination of Content of Teicoplanin for Injection by Microbiological Turbidimetric Method

ZHANG Wenjie (Dept.of Parmacy, the Second Affiliated Hospital of Shenyang Medical College, Liaoning Shenyang 110002, China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish a microbiological turbidimetri method for the determination of content of teicoplanin for injection, so as to control its quality. METHODS: Microbiological turbidimetri method and cup-plate method were respectively adopted to detect and compare the the potency of teicoplanin for injection, and the effects of two methods were compared. RESULTS: The calibration curve was linear with the logarithm of concentration range of 5.0-15.0 (μ/ml) of teicoplanins, the linear equation wasA=1.372-0.792 6l gC(r=0.997), the average recovery was 100.46%,RSDwas 0.85%. CONCLUSIONS: There was no significant difference in the determination of content of teicoplanin for injection between turbidimetric method and cup-plate method. Microbiological turbidimetri method is sensitive, accurate, reliable and reproducible, suitable for quality control of teicoplanin for injection.

KEYWORDSPotency; Content; Turbidimetric method; Teicoplanin

替考拉宁作为一种重要的抗菌药物，临床主要用于多重耐药菌感染的治疗[1]。为了更好的控制药品的质量，保证药品的安全有效，参考相关文献[2-7]，本研究采用微生物比浊法《中国药典》(2005年版)对该制剂含量进行测定，并与该制剂含量测定的现行标准的管碟法进行比较，以评价该制剂的质量控制方法，现报告如下。

1仪器与试药

岛津UV-260型紫外分光光度计(日本岛津公司)；WBS-200多功能微生物比浊法自动测量分析仪与ZY-300微生物管碟效价测定仪(北京先驱威烽技术开发公司生产)。

金黄色葡萄球菌 [CMCC(B)26003]和枯草芽孢杆菌 [CMCC(B)63501] 由中国食品药品检定院提供。替考拉宁标准品(批号130374-201201；效价847 u/mg)由中国食品药品检定院提供。注射用替考拉宁(批号：2012016，2012017，2012018；规格1.0 g)为市场上购买。营养肉汤培养基(批号120509)；抗菌药物检定培养基Ⅱ(pH 6.5，批号120107)由北京三药科技开发公司提供。甲醛、氯化钠、磷酸氢二钾和磷酸二氢钾为分析纯；0.9%氯化钠注射液和磷酸盐缓冲液(pH 6.0)均按《中国药典2部》(2010年版)附录配制。

2方法与结果

2.1管碟法

取装量差异项下的供试品细粉适量，精密称定，用pH 6.0的磷酸盐缓冲液制成每1 ml中约含1 000 u/ml的溶液，按照《中国药典2部》(2010年版)附录Ⅺ A中抗菌药物微生物检定法测定。高、低浓度分别为40 u/ml和20 u/ml，试验菌为枯草芽孢杆菌 [CMCC(B)63501]，培养温度36～37 ℃，培养时间14～16 h。

2.2比浊法

2.2.1菌液及含菌培养基的制备:取金黄色葡萄球菌新鲜斜面培养物一白金耳，接种于营养肉汤培养基100 ml中，摇匀，使其在530 nm波长处的吸光度约为1.0，为含菌培养基。

2.2.2溶液的配制:取替考拉宁标准品，精密称定，加灭菌水稀释至1 000 μ/ml备用；作为标准品溶液；另取装量差异项下的注射用替考拉宁，精密称定，加灭菌水稀释至1 000 μ/ml制成溶液，取样3批，分别制备，作为供试品溶液。

2.2.3测定方法:精密量取供试品溶液1 ml置灭菌试管中，每个浓度9管，分别精密加入菌液培养基9 ml，立刻摇匀，放入比浊法自动测量分析仪中，于37 ℃培养5 h取出，立即加入甲醛溶液(1→5)0.5 ml，充分混匀；标准品溶液测定同上述方法一样。以含9.0 ml菌液培养基、1.0 ml磷酸盐缓冲液和0.5 ml甲醛溶液(1→5)同条件培养的溶液为空白液；分别于紫外分光光度计530 nm波长处测定供试液和空白液试管中金黄色葡萄球菌对数生长期内的不同培养时间吸光度值(A)。

2.2.4线性关系及范围:精密量取标准品溶液适量，分别用磷酸盐缓冲液稀释成浓度分别为5.0、7.0、9.0、11.0、13.0、15.0 u/ml的溶液，作为供试液，照“2.2.3”项下测定方法测得吸收度，以浓度(C)的负对数値为横坐标，吸收度(A)为纵坐标进行线性回归，得线性方程：A=1.372-0.792 1 gC(r=0.997)。结果，替考拉宁在5.0～15.0 μ/ml的浓度范围内与吸光度线性关系良好，并通过t检验可靠性测验结果判定证明回归效果显著。

2.2.5回收率试验:精密量取标准品溶液适量，用磷酸缓冲溶液分别稀释成浓度为5.0、10.0、15.0 μ/ml的溶液各6份，按“2.2.3”项下测定方法测定吸收度，计算回收率和RSD%，见表1。由表1可见，平均回收率为100.46%，RSD为0.85%。