UPLC-MS/MS法测定动物源性食品中硝基呋喃代谢物残留量

2016-05-02廖妍俨龙四红

现代食品 2016年16期

◎廖妍俨，龙四红，孙棣，陈洪

（1.贵州省产品质量监督检验院，贵州贵阳 550016；2.贵阳市疾病预防控制中心，贵州贵阳 550002）

硝基呋喃类药物是一种广谱抗生素，对大多数真菌和原虫等病原体具有杀灭作用。此类药物主要作用于微生物酶系统，抑制微生物体内乙酰辅酶A的生成、干扰其糖类的合成代谢，从而起到抑制病原菌生长的作用[1]。研究表明，硝基呋喃类药物在动物体内迅速分解产生代谢物，在弱酸性条件下，这些结合态代谢物可从蛋白质中释放出来，对人体造成危害[2,3]。因此，通过检测动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物，能起到对此类药物使用情况的监控作用。

目前国内外对于硝基呋喃代谢物类药物及其代谢物的检测方法主要有高效液相色谱法[4]、酶联免疫法[5]和液相色谱-串联质谱法等，使用最多的是液相色谱-质谱联用法。本研究旨在建立动物源性食品中4种硝基呋喃代谢物的超高效液相色谱-串联质谱检测方法，并对样品前处理方法、色谱条件、质谱条件等进行优化。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

甲醇、乙腈（色谱纯、MERCK）；甲酸、冰醋酸（色谱纯、Fisher Chemicals）；2-硝基苯甲醛（2-NBA、梯希爱）；二甲亚砜（DMSO、慧颖生物科技有限公司）；盐酸（重庆川东化工集团有限公司）；乙酸铵（天津市科密欧化学试剂有限公司）；乙酸乙酯（上海申博化工有限公司）；磷酸氢二钾（成都金山化学试剂有限公司）。

1.2 仪器与设备

ACCELA液相色谱仪（美国 Thermo）；TSQ QUANTUM ULTRA质谱仪（美国Thermo)；自动恒温震荡器（昆山市仪器有限公司）；固相萃取装置W-SPE 24（莱伯泰科仪股份有限公司）；Allegra X-22系列多功能台式高速离心机（美国贝克曼库尔特公司）。

1.3 方法

1.3.1 色谱和质谱条件

Thermo Aquasil C18色谱柱（150 mm×2.1 mm×1.7μm）；流动相A为含0.1%甲酸的乙腈，B为含0.1%甲酸水溶液；梯度洗脱程序：0～2 min，7%A；2.1～7 min，7%～85%A；7.1～10 min，7%A；流速：300μL/min；进样量：10μL；柱温：常温。

采用电喷雾离子源（ESI）；正离子扫描；扫描模式：选择反应监测模式（SRM）；喷雾电压（IS）：3 000 V；离子源温度：350 ℃；离子传输毛细管温度：250 ℃；鞘气压力40 Arb，辅助气流量10 Arb。

1.3.2 样品前处理方法

精确称取待测样品2.00 g于50 mL离心管中，加入10 mL甲醇∶水混合溶液（2∶1，V/V），均质器12 000 r/min均质1 min，弃去上清液。再向离心管中加入5 ng混合内标标准溶液，使4种硝基呋喃代谢物内标物最终测定浓度为2.0 ng/mL。样品溶液中加入10 mL 0.2 mol/L HCl，再加入200 μL衍生化试剂2-硝基苯甲醛（2-NBA）溶液，置于37 ℃恒温水浴中振荡16 h。样品溶液取出后静置至室温，加入5 mL 0.1 mol/L磷酸氢二钾溶液，经离心机8 000 r/min离心5 min后，滤纸过滤，取滤液过固相萃取柱（HLB），样品溶液全部通过固相萃取柱后用10 mL水洗涤，用5 mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液于50 ℃下用氮气吹干，用10%的乙腈溶液溶解并定容至1.0 mL，混匀后过0.2 μm有机相滤膜，待测。