中药复方对咳嗽变异性哮喘模型大鼠血清IgE和IL-2水平的影响*

杨志华，吴尚华，沈玉鹏，魏桂梅

1 甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050；2 甘肃省中医药研究院；3 甘肃省中医院白银分院

中药复方对咳嗽变异性哮喘模型大鼠血清IgE和IL-2水平的影响*

杨志华1，2，吴尚华3，沈玉鹏1，魏桂梅3

1 甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050；2 甘肃省中医药研究院；3 甘肃省中医院白银分院

目的：通过测定和分析实验大鼠外周血IgE和IL-2的含量，观察中药复方对咳嗽变异性哮喘(CAV)大鼠免疫功能的影响，探讨本方对咳嗽变异性哮喘机体的免疫调节机制。方法：采用氢氧化铝和卵蛋白激发实验，使大鼠形成致敏状态，同时应用卵蛋白单一激发实验方法，造模形成稳定的咳嗽变异性哮喘模型大鼠，并随机分为6组，各组间予相应治疗3周后腹主动脉取血，检测各组实验鼠咳嗽次数、血清IgE及IL-2水平。结果：中药复方能缓解各实验组大鼠咳嗽症状，减少咳嗽频次，同时降低模型大鼠血清IgE的水平，提升血清IL-2的水平。结论：中药复方能调节IgE及IL-2水平，减少实验大鼠咳嗽次数，具有调节机体免疫力作用，这可能是中药复方治疗CVA的机制之一。

咳嗽变异性哮喘；免疫调节作用；中药复方

咳嗽变异性哮喘(CVA)是近年来小儿常见的慢性呼吸系统疾病，本病以春秋冬季明显，以刺激性干咳、突发性、阵发性咳嗽等症状为主要表现，是一种以慢性气道炎症及气道高反应、高敏感性为主要病变特点的特殊类型的哮喘表现形式，可因各种诱发因素而发病。其本质是细胞因子参与调节的慢性气道炎症［1］，IL-4是IgE合成促进因

子；LI-2是一种B细胞生长因子和嗜酸细胞分化因子，这两类细胞因子表达失常与Th1/Th2细胞功能的失衡有关［2-3］。有研究［4］发现咳嗽变异性哮喘患者黏膜水肿、上皮细胞脱落、部分基底膜增厚，与典型哮喘相似，IgE介导的Ⅰ型变态反应在咳嗽变异型哮喘的病理方面起重要作用，体内IgE水平的增高可以反映支气管哮喘患者的特应征的存在［5］。因此，Th1细胞释放的细胞因子和Th2细胞释放的细胞因子之间的失衡是目前哮喘免疫治疗的关键点。调节血清中Th1及Th2释放的细胞因子水平，可抑制或阻断气道慢性炎症，这可能是治疗咳嗽变异性哮喘的关键环节。常见的IL-2和IgE两种细胞因子是此种气道炎症的主要效应细胞。因此，本研究通过测定大鼠外周血IgE和IL-2的含量，探讨中药复方对咳嗽变异性哮喘的免疫调节机制。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂

1.1.1 中药复方 中药复方由蜜麻黄、射干、黄芩、五味子、半夏、僵蚕、蝉蜕等药物组成(甘肃省中医院药剂科提供)。以中剂量0.380 g/mL为等效剂量，按照1∶2∶4比例配置(分别为小、中、高剂量)，并将配置好的溶液置于4℃冰箱保存待用。1.1.2 小葵花肺热咳喘口服液(阳性对照组) 小葵花肺热咳喘口服液(海南新中正制药有限公司生产，国药准字号Z20140506)由石膏、连翘、鱼腥草、麻黄等药物组成，按照人与动物药物换算等效剂量为0.95 mg/kg，配置药液在4℃冰箱保存。

1.1.3 试剂 大鼠IgE、IL-2定量夹心ELISA检测试剂盒均购自上海西唐生物有限公司。

1.2 实验动物选用健康4周龄清洁级Wistar大鼠60只，雌雄各半，体质量(100±20)g，由兰州大学医学院动物实验中心提供，实验动物合格证号：2014-11-006。

1.3 实验动物分组将60只清洁级大鼠随机分为6组，A组(空白对照组)、B组(模型对照组)、C组(阳性对照组)、D组(中药复方小剂量组)、E组(中药复方中剂量组)、F组(中药复方高剂量组)，每组10只。

1.4 模型复制参照咳嗽变异性哮喘豚鼠模型复制方法［3］，采用卵蛋白和氢氧化铝激发致敏并用卵蛋白激发的方法复制大鼠CVA模型。各实验组大鼠正常饲养1周，待其适应环境后开始实验，除空白对照组外，其余实验组均在第1、8天每只大鼠腹腔注射10%卵蛋白和Al(OH)3混合溶液1 mL致敏。从第2周起，B、C、D、E、F 组大鼠置于密闭有机玻璃罩内，给予含1%OVA溶液的生理盐水超声雾化激发20分钟，每日早晨8时进行超声雾化，连续10日，激发前30分钟，C、D、E、F 组分别灌胃给药治疗(C组予小葵花肺热咳喘口服液灌胃1 mL；D、E、F组分别予中药复方灌胃0.95、1.90、2.85 mL)。第3周记录实验组大鼠咳嗽频次，并于腹主动脉取血，分离血清进行IL-2、IgE细胞因子水平的测定。

1.5 模型评估进行激发实验时，观察各组大鼠反应，若有阵发性咳嗽、呛咳、毛发耸立，呼吸困难或憋气，呼吸频率增快，烦躁多动等症状两种或两种以上者，或抽搐、虚脱现象之一者，均提示造模成功。

1.6 统计学方法数据采用SPSS 15.0软件包分析，计量资料以(±s)表示，采用单因素方差分析，组间多重比较采用SNK-q检验，检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 体征观察空白对照组大鼠体质量稳定增长，毛色光亮，反应灵活，行动便捷，呼吸频率正常，节律整齐。各实验组大鼠在激发前呼吸平稳，无特殊异常症状。激发实验后出现阵发性咳嗽，呛咳，或打喷嚏，流清涕，鼻痒，呼吸急促，烦躁多动等症状。

2.2 大鼠咳嗽频次测定与空白对照组比较，模型对照组咳嗽频次增加；与模型对照组相比，阳性对照组及中药复方小、中剂量组咳嗽频次明显减少；与阳性对照组比较，中药复方小、中剂量组咳嗽频次相对减少，见表1。

表1 各组大鼠咳嗽频次比较

2.3 血清IL-2检测结果与空白对照组比较，模型对照组血清IgE值升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与模型对照组相比，阳性对照组、中药复方各剂量组血清IgE降低，差异有统计学意义(P＜0.05)；与高剂量组相比，小剂量组血清IgE升高，其差异有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

2.4 血清IgE检测结果与空白对照组比较，模型对照组血清IL-2 值降低，其差异具有统计学意义(P＜0.05)；与模型对照组比较，阳性对照组、中药复方各剂量组血清IL-2升高，差异具有统计学意义(P＜0.01)；中药复方组间比较，高剂量组与低剂量组之间差异有统计学意义(P＜0.05)，与中剂量组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表3。

表2 各组大鼠血清IL-2含量(±s)

表2 各组大鼠血清IL-2含量(±s)

注：▲表示与空白对照组比较，P＜0.05；#表示与模型对照组比较，P＜0.01；★表示与高剂量组比较，P＜0.05。

组别 只数 IL-2/(pg·mL-1)空白对照组 10 26.73±2.56模型对照组 10 15.68±2.12▲阳性对照组 10 22.07±1.61#中药复方小剂量组 10 21.43±2.46#★中药复方中剂量组 10 23.26±1.36#中药复方高剂量组 10 25.56±1.67#

表3 各组大鼠血清IgE含量(±s)

表3 各组大鼠血清IgE含量(±s)

注：▲表示与空白对照组比较，P＜0.01；#表示与模型对照组比较，P＜0.05；★表示与高剂量组相比，P＜0.05。

组别 只数 IgE/(IU·mL-1)空白对照组 10 102.56±19.32模型对照组 10 169.34±20.28▲阳性对照组 10 98.33±11.13#中药复方小剂量组 10 117.81±12.19#★中药复方中剂量组 10 107.63±11.63#中药复方高剂量组 10 96.06±12.55#

3 讨论

咳嗽变异性哮喘以持续咳嗽或咳嗽反复发作为主要临床表现，本病属中医“咳嗽”“百日咳”“哮喘”等范畴。传统医学认为宿痰留伏是本病发生的溯源，如《丹溪心法》提出“哮喘专主于痰”，风邪其性宣发开泻，且属阳邪，易侵袭上焦肺卫，肺失宣肃，肺气不利，引动伏痰，风气与痰涎交阻气道，出现咳嗽、喘息、呼吸困难、喉中痰鸣等症状。中医认为小儿发育未臻，肺脏娇嫩，外感邪气，郁闭于肺，肺管不利，气道痉挛，是本病发生的本质。风邪与痰液是本病发生的病理因素。发病的性质与小儿素体相关，阳虚、寒痰内伏者，易发为寒性哮喘，感受风热之邪者，易表现热性哮喘，但小儿体禀“纯阳”，又为稚阴稚阳之体，多从阳化热、化火，故多以痰热互结，壅塞气道，搏击气道，发为本病。故喻嘉言云：“咳者，肺之本病也。”汪昂亦言：“肺主气，又属金，主声，故咳必由于肺也。”现代医学认为本病多发生于冬春季，主要表现为刺激性干咳，晨起及夜间咳嗽为主，天气骤变或接触过敏原后症状更突出，且具有反复发作、突发性等特点，追溯其病理生理基础是持续的气道炎症和气道高反应性，与中医学中“风为阳邪，其性开泄，风性主动，风善行而数变”的致病特点极为相似［6］。

现代医学多以抗过敏、缓解支气管痉挛、缓解气道高反应为基本治疗方案，但存在恢复期抵抗力低下，具有反复发作性及突发性表现，而中药复方制剂具有多靶点、毒副作用小等特点，能对患儿机体综合调理、提高全身免疫力，减少重复性发作症状。本实验中药复方由蜜麻黄、半夏、五味子、僵蚕、蝉蜕、射干等药物组成，其中麻黄辛散，疏风宣肺，散寒平喘，以驱邪外出；五味子酸敛，二者一收一散，调节气机，预防肺气宣发太过；半夏为燥湿化痰，温化寒痰之要药，尤善治脏腑之湿痰；蝉蜕甘咸，散风热、宣肺、定痉；僵蚕辛咸，祛风解痉，化痰散结。本方在宣肺止咳的同时，应用疏风通络、解痉药物，尤其是虫类药物如僵蚕、蝉蜕等的应用，疏利上焦以散风邪，透邪外出，舒张气道，解痉止咳。诸药合用，共奏宣肺止咳，祛风解痉之功效［7］。现代药理研究［8］证实不少风药具有提高细胞免疫功能，减轻机体对过敏因素的应激反应，拮抗组胺，抗过敏性炎症，可使肺之小气道由痉挛变为舒张，气道通顺。

本研究结果表明中药复方可缓解各实验组大鼠咳嗽症状，减少咳嗽次数；降低哮喘模型大鼠血清IgE的水平，提升血清IL-2的水平，而IgE及IL-2是引起CVA的主要细胞因子，通过调节二者血清含量，抑制或阻断气道慢性炎症，达到调节机体免疫功能紊乱的目的，这可能是中药复方制剂治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制之一，为开发新药奠定了实验基础，也是目前治疗小儿咳嗽变异性哮喘发生的关键所在。

［1］ 陈芳瑜，陈红梅.中药超声雾化治疗咳嗽变异性哮喘［J］.福建中医药，1996，27(5)：34-35.

［2］ 许建中，吴银根，李明华.中西医结合哮喘病学［M］.北京：人民卫生出版社，2001：368.

［3］ 高士宗.黄帝素问直解［M］.2版.北京：科学技术文献出版社，1982：25-623.

［4］ 黄少丹，钟南山.咳嗽变异型哮喘的支气管炎症及变态反应特征［J］.中华结核和呼吸杂志，1997，20(5)：283-286.

［5］ 陆为华.中药治疗小儿咳嗽变异型哮喘120例［J］.上海中医药杂志，1999(7)：24-25.

［6］ 梁丽娜，李江全.论风邪在小儿过敏性咳嗽发病机制中的重要作用［J］.中国中医急症，2011，20(8)：1355-1356.

［7］ 康妍萌.肃肺平肝养阴汤治疗小儿咳嗽变异性哮喘的临床研究［M］.济南：山东中医药大学，2005：57.

［8］ 王强，孙增涛.祛风解痉法治疗咳嗽变异性哮喘［J］.吉林中医药，2007，27(10)：23-24.

Effects of Chinese Herbal Compound on Serum IgE and IL-2 Levels in Cough Variant Asthma Model Rats

YANG Zhihua1,2,WU Shanghua3,SHEN Yupeng1,WEI Guimei3
1 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730050,China;
2 Gansu Provincial Academy of traditional Chinese Medicine;
3 Baiyin Branch of Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

R256.12

A

1004-6852(2016)11-0015-03

2015-10-25

甘肃省中医药管理局课题(编号GZK-2014-30)。

杨志华(1983—)，女，在读博士研究生，主治医师。研究方向：儿科常见病、多发病的中医诊治及中医儿科教学和科研。