绵茵陈中绿原酸的提取工艺及纯化工艺优选

刘丽清，李美艳，王爱武△

1 山东中医药大学，山东 济南 250000；2 山东大学附属省立医院；3 山东宏济堂制药集团有限公司

绵茵陈中绿原酸的提取工艺及纯化工艺优选

刘丽清1，2，李美艳3，王爱武3△

1 山东中医药大学，山东 济南 250000；2 山东大学附属省立医院；3 山东宏济堂制药集团有限公司

目的：优选绵茵陈的提取工艺及纯化工艺。方法：以绿原酸含量为指标，采用高效液相色谱法测定绿原酸含量，以加水量、提取时间、提取次数为考察因素，采用正交实验法优选绵茵陈的提取工艺；采用不同乙醇浓度沉淀绵茵陈水提取液中绿原酸的含量。结果：最佳提取工艺为用12倍量水提取3次，1 h/次；最佳纯化工艺为70%乙醇沉淀绵茵陈水提液中绿原酸。结论：最佳提取工艺对绵茵陈中绿原酸有较高提取率，水提醇沉纯化绵茵陈中绿原酸的含量采用70%乙醇。

绵茵陈；绿原酸；提取工艺；纯化工艺

绵茵陈为菊科植物滨蒿Artemisia scoparia Waldst.et Kit.或茵陈蒿Artemisiacapillaris Thunb.的干燥地上部分，是临床常用中药之一。其味苦、辛，微寒，归脾、胃、肝、胆经，具有清利湿热、利胆退黄之功效［1］，临床主要应用于治疗黄疸、胆囊炎、肝内胆汁淤积症、阴道炎、湿热型湿疹等病症［2-3］。绿原酸是其主要活性成分之一。本研究采用传统水提取法优化绵茵陈的提取工艺，水提醇沉法优化其纯化工艺［4-5］，以期为绵茵陈中绿原酸的获得提供一种最经济、稳定的提取纯化工艺。

1 仪器与试药

1.2 试药试验中茵陈药材购于山东省立医院药剂科中草药房，经本院药剂科王爱武主任药师鉴定，符合2010年版《中国药典》相关项下要求；绿原酸对照品购于中国食品药品检定研究院(批号：110753-201415)；乙腈、磷酸为色谱纯；水为重蒸水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 含量测定

2.1.1 色谱条件 按2010年版《中国药典》茵陈药材项下方法，HPLC测定茵陈药材及各样品中绿原酸的含量。色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙睛-0.05%磷酸溶液(10：90)；流速1 mL/min；检测波长327 nm；柱温35 ℃；进样量20 μL。

2.1.2 线性关系考察 精密称取绿原酸对照品适量，置棕色瓶中，用50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配成浓度为0.44 mg/mL的储备液。分别精密吸取储备液溶液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 mL置10 mL容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，按“2.1.1”项下色谱条件进样，记录峰面积；以对照品峰面积为纵坐标，对照品质量浓度为横坐标，得回归方程Y=22 290 X+17 724(r=0.999 3)，结果表明绿原酸在4.4～39.6 μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.2 提取工艺优选

2.2.1 正交实验设计 根据绵茵陈中主要成分绿原酸的化学性质，选用经济的水提取。对提取工艺条件进行正交筛选实验，筛选条件包括加水量、提取时间、提取次数，以绿原酸含量为测定指标采用L9(34)正交实验，见表1。

表1 绵茵陈正交实验因素水平

2.2.2 样品的制备 根据表1正交实验因素水平设计实验，准确称取茵陈药材9份，每份50 g，水提取，提取液合并，滤过，滤液减压浓缩，得干膏，研细备用。

优点：优秀的显示效果及操控布局，配备光学防抖系统的等效28-140mm镜头。缺点：较为一般的画质表现。

2.2.3 供试品的制备 取干膏粉末约0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密量取上清液5 mL，置25 mL棕色瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按照“2.1.1”项下色谱条件进样测定，见表2—3。

表2 绵茵陈优选正交实验安排

表3 绵茵陈正交实验方差分析

由直观分析可知，3个因素对提取工艺的影响顺序为C＞A＞B。方差分析结果表明C因素对提取工艺结果有显著性影响，其他因素则无显著性差异。综合考虑确定最佳提取工艺为A3B1C3，即用12倍量水提取3次，1 h/次。

2.2.4 验证实验 准确称取茵陈药材3份，每份50 g，按照上述优选提取工艺进行3次验证实验，结果显示验证结果与实验结果基本一致，见表4。

表4 绵茵陈提取验证结果

2.3 纯化工艺优选

2.3.1 样品制备 取茵陈2 500 g，加12倍量水提取3次，1 h/次，过滤，滤液浓缩至300 mL清膏，均分为5份，分别加入95%乙醇36.4、55.6、85.7、140、266.7 mL，使药液含乙醇浓度分别为40%、50%、60%、70%、80%，静置24小时，过滤，回收乙醇，减压浓缩得干膏，研细备用。按照“2.2.3”项制备供试品溶液，按照“2.1.1”项下色谱条件进样测定。

2.3.2 沉淀产物和干膏得率测定 取上述过滤所得沉淀，置干燥至恒重的蒸发皿中，于105℃干燥3小时至恒重后取出，置干燥器中冷却30分钟后称重，40%、50%、60%、70%、80%乙醇沉淀物分别为32.84、45.27、55.27、64.18、68.66 mg/g生药。取上述干膏适量，相当于原药材10 g，按照沉淀产物测定方法计算干膏得率，结果见图1、表5。

图1 绵茵陈水提醇沉结果

表5 绵茵陈水提醇沉结果

由图1、表5可知，水提醇沉结果随着乙醇浓度的增加，绿原酸转移率也增加，但到80%乙醇时和70%乙醇基本趋于平衡，考虑实际经济因素，选择70%乙醇沉淀为精制茵陈绿原酸的有效方法。2.3.3 验证实验 准确称取茵陈药材3份，每份50 g，按照上述优选提取工艺和纯化工艺进行3次验证实验，结果显示验证结果与实验结果基本一致，见表6。

表6 绵茵陈提取验证结果

3 讨论

绿原酸是含有羟基和邻苯二酚的有机酸，可溶于水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯和丙酮等溶剂，为优选最经济实用的提取纯化工艺，本实验采用水提取绵茵陈中绿原酸的含量，以醇沉法纯化水提取液。结果表明水提醇沉法精制绵茵陈中绿原酸的效果较好。

通过正交实验分析可知，影响绵茵陈绿原酸提取率因素的程度由大到小依次为：提取次数、加水量、提取时间。通过方差分析，实验确定的水提取最佳工艺参数为：用12倍量水提取3次，1 h/次。通过不同乙醇浓度精制茵陈水提液中绿原酸的含量，最佳纯化工艺为70%乙醇沉淀，绿原酸转移率为78.94%。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：223-224.

［2］ 孙远南，冯健.茵陈蒿的化学成分与药理作用研究进展［J］.中国现代医生，2011，49(21)：12-14.

［3］ 董岩，王新芳，崔长军，等.茵陈蒿的化学成分和药理作用研究进展［J］.时珍国医国药，2008，19(4)：874-876.

［4］ 徐建国，田呈瑞，胡青平，等.绵菌陈中绿原酸的提取工艺研究［J］.中国农学通报，2007，23(9)：162-165.

［5］ 雷昌，夏新华，黄玛莎，等.二种纯化工艺对茵陈水提液的影响研究［J］.中成药，2013，35(12)：2626-2630.

文后参考文献著录格式示例（一）

连续出版物（期刊，含外文期刊）

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示例：

1）期刊分卷

［1］ 罗侃，罗畅，剡雄.从循证医学与中医辨证论治谈中西医结合的前景［J］.中国中西医结合急救杂志，

2002，9（6）：311-313.

［2］ Guilbert TW，Norgan WJ，Zeiger RS，et al.Long-term inhaled corticosteroids in preschool

children at high risk for asthma［J］. N Engl J Med，2006，354（19）：1985-1997.

2）期刊不分卷

［3］ Turan I，Wredmark T，Fellander-Tsai L. Arthroscopic ankle arthrodesis in rheumatoid arthritis［J］.Clin Orthop，1995(320)：110-114.

3）期刊无卷和期

［4］ Browell DA，Lennard TW.Imunologic status of the cancer patients and the effects of blood transfusion on antitumor responses［J］.Curr Opin Gen Surg，1993：325-333.

Optimization of Extraction Process and Purification Process of Chlorogenic Acid from MianYinChen

LIU Liqing1,2,LI Meiyan3,WANG Aiwu3△
1 Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Jinan 250000,China;
2 Provincial Hospital Affiliated to Shandong University;
3 Shandong HongJitang Pharmaceutical Group CO.LTD

A

1004-6852(2016)11-0018-03

2015-09-27

刘丽清(1989—)，女，在读硕士研究生。研究方向：医院新制剂开发及临床药学。

△通讯作者：王爱武(1966—)，女，主任药师。研究方向：医院新制剂开发及临床药学。