二至丸对更年期综合征模型大鼠的实验研究

朱志芳　白建民　邓敏贞

1.南阳医学高等专科学校中医系，河南　南阳　473061；2.南阳医学高等专科学校护理系，河南　南阳　473061；

3.广州中医药大学，广东　广州　510405



二至丸对更年期综合征模型大鼠的实验研究

朱志芳1白建民2邓敏贞3

1.南阳医学高等专科学校中医系，河南南阳473061；2.南阳医学高等专科学校护理系，河南南阳473061；

3.广州中医药大学，广东广州510405

【摘要】目的：研究二至丸对更年期模型大鼠的影响。方法：将SPF级雌性SD大鼠60只随机分成假手术对照组、模型对照组、更年欣胶囊组(4mg/kg)、二至丸高(600mg/kg)、中(300mg/kg)、低(150mg/kg)剂量组，各组灌胃给予相应的药物连续30d。除假手术对照组外，给药30d后对其余5组大鼠通过手术将0.2ml无水乙醇注射到卵巢内1次，建立更年期综合征模型大鼠。观察大鼠给药前后体质量的变化，测定血清中雌二醇(E2)、促卵泡成熟激素(FSH)、黄体生成素(LH)、催乳素(PRL)水平，计算子宫系数和阴道上皮细胞角化率，以及测定下丘脑5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的含量。结果：与假手术对照组比较，模型对照组大鼠的体质量缓慢降低，肛温升高(P<0.05)，FSH、LH和PRL水平明显升高(P<0.05) ，E2水平明显减少(P<0.01)；阴道上皮细胞角化率和子宫系数明显下降(P<0.01)；降低下丘脑5-HIAA/5-HT (P<0.05)，增加NE/DA (P<0.05)；与模型对照组相比较，二至丸各剂量组大鼠体质量增长较模型组快，肛温下降(P<0.05)；FSH、LH水平明显降低(P<0.01)；PRL水平明显降低(P<0.05) ，E2水平明显升高(P<0.05)；阴道上皮细胞角化率明显提高(P<0.01)；子宫系数增加(P<0.05)；增加下丘脑5-HIAA/5-HT (P<0.05)，减少NE/DA (P<0.05)。结论：二至丸能既可以改善性激素，又可以增加更年期综合征模型大鼠下丘脑单胺类神经递质含量，从而达到缓解更年期症状的作用。

【关键词】二至丸；绝经综合征；神经递质；性激素；

更年期综合征多因妇女在围绝经前后因卵巢功能逐渐衰退以致雌激素水平下降，引起以植物神经功能紊乱代谢障碍为主的一系列症候群[1]。更年期综合征见于中医古籍的“脏躁”、“郁证”、“崩漏”、“月经不调”等病证中，现代中医将其命名为“绝经前后诸症”[2]。该病表现为五心烦热、烘热汗出、四肢麻木、时冷时热等阴阳失调的症状[2]。西医学一般认为卵巢功能的衰退是引起更年期各种症状的主要原因，应用雌激素替代疗法治疗妇女更年期综合征，虽能缓解部分症状，但是毒副作用较大[2]。二至丸出自清代江昂《医方集解》，具有补腰膝，壮筋骨，益肾阴的功效[4]，临床常用于更年期相关疾病的治疗[5]。本实验采用手术方式制备更年期综合征大鼠模型，观察二至丸对模型大鼠生殖内分泌和神经递质的调节，为临床应用提供实验依据。

1仪器与材料

1.1材料二至丸(批号：990910，苏州雷允上制药厂)；雌二醇(E2)、黄体生成激素(LH)、促卵泡激素(FSH)、催乳素(PRL)放免试剂盒(批号：116408，美国Beckman公司)；5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)标准品(美国Sigma公司)；更年欣胶囊(批号：120702，通化方大药业股份有限公司)。

1.2实验动物SD雌性大鼠，SPF级，体质量220～250g，动物正常饲养5d后用于以下实验，由郑州大学实验动物中心提供。动物合格证号:SCXK(豫)2010-0002。

1.3仪器ACCESS型全自动化学发光免疫分析仪(美国BECKMAN COULTER公司)；AE-200型电子分析天平(美国METTLER公司)；2695型高效液相色谱仪(美国Waters公司)。

2方法

2.1造模[6]雌性大鼠用10%水合氯醛(35mg/kg)，腹腔麻醉，腹位固定然后取最末肋骨下、腋中线和距脊柱外侧约2cm交叉处，剪除长毛，常规皮肤消毒，切开皮趺和背肌约1.5～2.0cm，在切口视野中白色发亮的脂肪团中找出卵巢，轻轻夹住脂肪团拉出切口外，模型组用0.5ml的注射器将0.2ml无水乙醇注射到卵巢内，假手术组仅作注射针刺动作而无任何液体，然后顺势将卵巢送回腹腔中，缝合创面，皮肤消毒，腹腔注射青霉素20万单位，连续3d，以防手术感染。

2.2分组与给药取雌性大鼠60只，随机分成假手术组及造模组，假手术组10只，造模组50只。适应性饲养3d后，将造模组大鼠按体质量分5组，分别为模型对照组，更年欣胶囊组(4mg/kg)，二至丸高(600mg/kg)、中(300mg/kg)、低(150mg/kg)剂量组。各组连续灌胃给予相应的药物30d，每天一次。

2.3观察与检测方法

2.3.1一般观察观察雌性大鼠给药前后毛发、舌质的变化，分别于给药前及给药后第5、15、30天测雌性大鼠体质量及直肠温度。

2.3.2阴道上皮细胞角化的检测末次给药2h后，用生理盐水浸湿的棉签轻擦雌性大鼠阴道，取出后作阴道涂片，瑞氏染色后光镜下观察，计算阴道上皮细胞角化率。

2.3.3生殖内分泌激素的测定末次给药后1d，10%水合氯醛(35mg/kg)腹腔麻醉，腹主动脉采动脉血，3500r/min离心10min制备血清，采用放射免疫分析法测定血清中E2、LH、FSH、PRL的含量水平。

2.3.4下丘脑神经递质测定将取血后的雌性大鼠迅速断头取脑，用化学荧光法测定下丘脑神经递质5-HT、NE、DA、5-HIAA含量。色谱条件:色谱柱为依利特 C18(150mm×4mm，5μm)，流动相: 50mmol/l柠檬酸-乙酸钠缓冲液，流速1.0ml/min，波碳电极，检测池电压为0.75V，柱温为(20±2)℃。3,4-二羟苄胺(DHBA)为内标物，样品各主要组分用内标法进行定量。

2.3.5脏器系数的检测雌性大鼠处死后解剖，称取各只大鼠的子宫重量，计算各组雌性大鼠的脏器系数。

2.4统计方法数据采用SPSS 13.0进行统计处理，数据以平均值±标准差表示，P<0.05表示差异有统计学意义。

3结果

3.1对更年期综合征模型大鼠体质量的影响由表1可知，与假手术对照组比较，模型大鼠在第15～30d毛色枯燥不光滑，舌尖色暗红，体质量明显减少(P<0.01)；与模型组对照比较，二至丸中高剂量组治疗后大鼠体质量均有显著增加(P<0.05)。

表1　二至丸对更年期综合征模型大鼠体质量的影响

注:与假手术对照组比较，*P<0.01；与模型对照组比较，∆P<0.05。

3.2对更年期综合征模型大鼠肛温的影响由表2可知，与假手术对照组比较，模型对照组大鼠肛温明显增高(P<0.05)；与模型对照组比较，给予二至丸和更年欣胶囊治疗后，不同时间大鼠升高的肛温均有所降低，给药5d后，二至丸中剂量组大鼠肛温显著降低(P<0.01)；给药15d后，二至丸高、中、低剂量组肛温均明显降低(P<0.05)；其中给药30d后，二至丸中、高剂量组显著降低大鼠肛温(P<0.01)。

表2　二至丸对更年期综合征大鼠肛温的影响　±s)

注: 与假手术对照组比较，*P<0.01；与模型对照组比较，∆P<0.05，#P<0.01。

3.3对更年期综合征大鼠脏器系数及阴道上皮细胞角化程度的影响由表3可知，与假手术对照组比较，模型对照大鼠子宫系数和阴道上皮细胞角化程度明显降低(P<0.01)；与模型对照组比较，二至丸中、高剂量组能明显增加模型大鼠子宫系数(P<0.05)，阴道上皮细胞角化程度明显增加(P<0.01)。

3.4对更年期综合征大鼠阴道上皮细胞角化程度的影响由图1可知，与假手术组比较，模型对照组的角化细胞较少。与模型对照组比较，更年欣胶囊组合二至丸各剂量组的角化细胞都有一定程度增加。

3.5对更年期综合征模型大鼠血清生殖内分泌激素的影响由表4可知，与假手术对照组比较，模型对照组的血清E2水平明显降低，FSH、LH、PRL水平明显升高；与模型对照组比较，二至丸高、中、低剂量组均能明显增加模型大鼠E2水平(P<0.05或P<0.01)，中高剂量组能明显降低模型大鼠血清FSH、LH水平(P<0.01)，二至丸各剂量组明显降低大鼠血清中PRL水平(P<0.05或P<0.01)。

表3　二至丸对更年期综合征模型大鼠子宫系数及

注: 与假手术对照组比较，*P<0.01；与模型对照组比较，∆P<0.05，#P<0.01。

表4　二至丸对更年期综合征模型大鼠血清E2、LH、FSH、PRL的影响

组别剂量/mg/kgE2/pg/mlLH/mIU/mlFSH/mIU/mlPRL/μg/l假手术对照-6.36±2.053.52±0.851.53±0.485.65±0.81模型对照-3.10±1.24*4.97±1.16*2.86±0.72*16.40±1.11*更年欣胶囊4.004.78±1.85##4.26±0.94·2.36±0.80*#14.31±1.41*#二至丸600.005.21±1.72·#3.90±0.73·#2.14±0.57#15.52±0.85*300.004.60±1.44*#4.14±0.88·2.37±0.63*14.56±1.74*150.004.48±1.33*4.65±1.03*2.53±0.80*10.71±3.89*#

注:与假手术对照组比较·P<0.05，*P<0.01；与模型对照组比较，∆P<0.05，#P<0.01。

3.6对更年期综合征模型大鼠下丘脑神经递质的影响由表5可知，与假手术对照组比较，模型大鼠下丘脑5-HIAA/5-HT明显升高(P<0.05)，NE/DA含量明显降低(P<0.01)；与模型对照组比较，二至丸中高剂量组能明显降低模型大鼠下丘脑5-HIAA/5-HT含量(P<0.05)，增加NE/DA含量(P<0.05)。

表5　二至丸对更年期综合征模型大鼠下丘脑NE/DA和

注:与假手术对照组比较，#P<0.05；*P<0.01；与模型对照组比较，∆P<0.05。

4讨论

更年期综合征的表现多见于阴虚内热，阴虚内热症状是由于肾气虚，天癸竭，冲任脉虚，气血脏腑功能失调，阴阳失衡所致[7]。肾脏元气为先天之本，五脏之根，生命之门，人的生、长、壮、老、已均由肾中精气的盛衰来决定。妇女至绝经前后，精血衰少，冲任虚损，故易使体内阴阳失调、脏腑气血功能紊乱而发病[8]。大多以肝肾阴虚和火旺为主，故应滋补其阴和清虚火、宁心安神。更年期妇女由于卵巢功能衰退和紊乱，雌激素分泌减少，反馈性引起垂体分泌功能亢进，促性腺激素分泌过多，使下丘脑-垂体-卵巢性腺轴调节功能紊乱，内分泌失调，进而出现植物神经、心血管系统功能紊乱、新陈代谢失常的一系列症候群[9]。造模方法模拟更年期发生的过程，发现与文献报道绝经期妇女LH、FSH升高相吻合[10-11]。

二至丸的女贞子甘苦凉，滋肾养肝，《神农本草经》记载：“女贞子主补中，安五脏，养精神，除百病”；旱莲草甘酸寒，养阴益精，凉血止血，二药合用补益肝肾，减少更年期妇女肾气渐衰，肾阴亏虚引起的头晕耳鸣、腰膝酸软的症状。该方两药合用共奏养血清热、滋补肝肾之功[12]。由于更年期综合征患者常因平素性情抑郁，或因病而致心情更为紧张，导致肝郁气滞，或因肾阴虚而不足以养肝而致肝郁不疏，或脾病及肝，肝病及脾，心脾两虚而生诸症，用二至丸对此症也有治疗作用。

研究表明，二至丸对更年期综合征模型大鼠能降低肛温(P<0.05或P<0.01)，增加血清E2水平(P<0.05或

P<0.01)，降低血清FSH、LH、PRL水平(P<0.05或P<0.01)，降低下丘脑5-HIAA/5-HT (P<0.05)，增加NE/DA (P<0.05)，增加子宫系数(P<0.05)，阴道上皮细胞角化程度明显增加(P<0.01)，为二至丸在临床上治疗绝经综合征提供了实验依据。且叶雪清研究[13]认为下丘脑神经递质含量与比值的改变，可能是性腺轴系统老化的始动因素。因此，从治疗更年期综合征的效果而论，二至丸有一定的调整内分泌失调及植物神经功能紊乱的作用。

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The Effect of Model Rats about the Menopausal Syndrome by Er Zhi Wan

ZHU Zhifang1BAI Jianmin2DENG Minzhen3

1. Traditional Chinese Medicine Department of Nanyang Medical College，Nanyang 473061，China；

2. Nursing Department of Nanyang Medical College，Nanyang 473061，China；

3.Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510405，China

Abstract:Objective To observe the effect of Er Zhi Wan for the treatment of menopausal disorders．Methods Special-pathogen free Sprague Dawley (SD) female rats were used as the experimental animal．Rat models of Menopausal were induced by removal of bilateral ovaries, which were injected 0.2ml anhydrous ethanol once after dosing. SD rats were randomized into sham group，model group，positive group by Gengnianxin Capsule(4mg/kg) and treatment group (600mg/kg，300mg/kg，150mg/kg)．All rats were given intragastric once a day for 30 days. To observe the changes of rats’ body weight before and after administration，Serum levels of estradiol(E2)，luteinizing hormone(LH)，follicle-stimulating hormone(FSH)，prolactin(PRL) and calculate the Uterine factor and the rate of keratinocytes Vaginal epithelial cells and levels of 5-hydroxytryptamine(5-HT)，norepinephrine(NE)，dopamine(DA)，5-hydroxyindole acetic acid(5-HIAA) in rats＇ hypothalamic.Results After treatment，compare with sham group, the rats＇ weight reduced and the temperature of anus was rised and the level of FSH，LH，PRL and the ratio of NE/DA were increased(P<0.05)，but the level of E2 and the ratio of 5-HIAA/5-HT was decreased(P<0.05)．The rate of keratinocyte vaginal epithelial cells and the uterine factor was decreased too (P<0.01)．Compare with model group, the rats＇ weight gained and the temperature of anus was declined and the level of FSH，LH，PRL and the ratio of NE/DA were decreased(P<0.05)，but the level of E2 and the ratio of 5-HIAA/5-HT was increased(P<0.05)．The rate of keratinocyte vaginal epithelial cells and the uterine factor was increased too (P<0.01)．Conclusion Er Zhi Wan Decoction has an effect for rat models＇ treatment，which is about the menopausal syndrome．

Key words:Er Zhi Wan；menopause；neurotransmitter；sex hormone；

(收稿日期：2016.01.04)

【中图分类号】R285.5

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2016)06-0034-04

作者简介：朱志芳(1972-)，女，讲师，主要从事妇科乳腺病与月经病的中药治疗。