2013年长春市儿童医院HFMD患儿病原特点分析

黄艳智，王丽雪，赵艳玲，马　岩，刘　颖，孙利伟，孟婷玉，张晓杰，田玉玲，马英伟 ，贺　岩

(长春市儿童医院，吉林 长春130051)



2013年长春市儿童医院HFMD患儿病原特点分析

黄艳智，王丽雪，赵艳玲，马岩，刘颖，孙利伟*，孟婷玉，张晓杰，田玉玲，马英伟 ，贺岩

(长春市儿童医院，吉林 长春130051)

摘要：目的分析2013年长春市儿童医院住院手足口病(HFMD)患儿病原学特点，了解住院HFMD患儿病原的变化。方法分析2013年长春市儿童医院住院的1111例HFMD患儿一般情况；应用荧光定量PCR方法检出粪便肠道病毒通用型(EV)、新型肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16型(CoxA16)和柯萨奇病毒A6型(CoxA6)核酸；在1111份粪便标本中随机抽取10份进行CoxA6型核酸序列检测及分析。结果2013年长春市儿童医院住院HFMD患儿发病高峰年龄段13-24月龄，流行高峰季节6-8月份。引发HFMD的病原有EV、EV71、CoxA16、CoxA6等，以EV和CoxA6为主，阳性检出率分别为50.21%和46.00%；EV和CoxA6流行的高峰季节6月份，CoxA16在10月现流行高峰，EV71未出现流行高峰季节。随机抽取10份进行测序,有7份序列与CoxA6序列的同源性为96%-98%；CoxA6型系统发生学分析显示：其中4份同源性高，位于基因树的同一分支。结论2013年长春市儿童医院住院HFMD患儿病原流行优势型为CoxA6；HFMD的病原趋于多样性和多种型别共流行的状态。监测HFMD病原的特点对于其预防、临床诊治及预后评估有重要警示作用。

关键词：儿童；手足口病；柯萨奇病毒A6型

(ChinJLabDiagn,2016,20:0431)

手足口病(Hand-foot-mouth disease，HFMD)是由多种肠道病毒引起的常见的丙类传染病，以婴幼儿发病为主。以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要特征。少数患者可并发无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹、呼吸道感染和心肌炎等。不同型别病原所致危重症临床表现各异，早期明确病原诊断及早给予有效治疗非常重要。本研究分析了2013年长春市儿童医院住院HFMD患儿粪便标本肠道病毒通用型(EV)、新型肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16型(CoxA16)和柯萨奇病毒A6型(CoxA6)DNA的检出情况及部分CoxA6阳性DNA的核酸序列。

1对象与方法

1.1对象2013年1-12月长春市儿童医院住院确诊的HFMD患儿1111例，年龄 3月28天-6岁，平均 (23.95±14.31)月龄 ；男 690例，女421 例。

1.2诊断标准参照国家卫计委《HFMD诊疗指南2010年版》[1]。

1.3方法

1.3.1标本采集患儿住院当天留取粪便标本约3-5 ml，立即送检。

1.3.2核酸提取采用离心柱法核酸提取试剂盒(中山大学达安基因股份有限公司产品)，按试剂盒说明书提取粪便标本核酸。

1.3.3实时荧光定量PCR检测试剂为中山大学达安基因股份有限公司的肠道病毒通用型(EV)/肠道病毒71型(EV71)/柯萨奇病毒A16型(Cox 16)和A6型(Cox 6)核酸检测试剂盒，仪器为美国ABI 7500实时荧光定量PCR仪，检测项目为EV/EV71/Cox 16/Cox 6核酸。PCR反应体系、循环参数严格按试剂盒说明书进行。

1.3.4核酸序列检测及分析测序引物由中山大学达安基因股份有限公司设计，一步法RT-PCR，PCR产物核酸序列检测，在线分析。

2结果

2.1HFMD年龄分布

2013年长春市儿童医院住院HFMD患儿中7-48月龄患儿占94.59%，7-24月龄占67.59%,其中13-24月龄占45.09%，为发病高发年龄段，详见表1、图1。

表1　HFMD患儿年龄分布

图1　长春市2013年HFMD患儿发病年龄分布

2.2HFMD季节分布

2013年长春市HFMD一年四季均有发病，高峰季节为6-8月份，见图2。

图2　HFMD患儿发病季节分布

2．32013年长春市HFMD病原特点

2.3.1不同病原的阳性检出率2013年长春市儿童医院住院HFMD患儿1111例，分别进行病原学检查，结果EV和CoxA6阳性检出率分别为50.21%和46%，详见表2；其中临床确诊为手足口病但病原检测非EV/EV71/CoxA16/CoxA6的为451例，占40.59%(451/1111)。

表2　2013年长春市HFMD粪便标本EV/EV71/

2.3.2不同季节各种病原的阳性检出率2013年长春市儿童医院住院HFMD患儿EV阳性检出率6、7、8月为高峰季节；EV71阳性检出率全年均不高，最高月份为9月，仅为10.42%；CoxA 16阳性检出率，6、7、8、9月在1.25%-3.45%，10月份突然增至44.44%；CoxA 6仅在8、9、10月进行检测，阳性检出率分别为55.56%、35.14%和33.33%，见图3。

图3　HFMD病原的季节分布

2.4CoxA 6型VP1区核酸序列分析

本研究共对10例荧光PCR检测浓度较低的样本进行了测序，结果显示有7例(5号、10号、14号、19号、22号、23号、24号)核酸序列与COXA6核酸序列的同源性为96%-98%，证实为COXA6型病毒。

2.5CoxA 6型系统发生学分析

在GeneBank 中选取部分CoxA6的VP1序列做系统发生学分析，结果14号、19号、22号、23号与广东、上海和温州等地流行株同源性高，位于基因树的同一分支；5号位于基因树的另一支，与湖南株同源性最高。

3讨论

HFMD是全球性传染病，世界大部分地区均有此病流行的报道。1957年新西兰首次报道，1959年提出HFMD 命名。我国自1980年在广东始见本病[2]，以后上海、北京、河北、天津、福建、吉林、山东、湖北、西宁等十几个省市均有报道，HFMD已经成为全球性的重要公共卫生问题。2006年世界卫生组织公布该病在须申报疾病(法定染病)的发病率中居第四位。我国2008年5月2日卫生部将HFMD列入《中华人民共和国法定传染病防治法》规定的丙类传染病[3]。

本文分析了2013年长春市儿童医院住院HFMD患儿共计1111例，发病高峰年龄段为13-24月龄;6月以内患儿占4.5%,大于4岁患儿仅为0.9%,6-48月龄患儿占94.59%。发病率的年龄差异与国内外报道接近[4-6]。HFMD人群普遍易感，成人和少年儿童感染后多不发病，可获得保护性抗体。由于生后6月内婴儿体内有较高母传抗体水平，6月以后这种抗体逐渐减少，到13-24月龄母传抗体水平最低，故为发病高峰年龄段。

在长春地区HFMD一年四季均可发病，但存在明显的季节性， 6-8月份为高峰季节。长春市地处中国东北平原腹地，地势平坦开阔，属北温带大陆性季风气候区，在全国干湿气候分区中，介于东部山地湿润与西部平原半干旱区之间的过渡带,属温带大陆性半湿润类型，6-8月为最炎热的季节，利于肠道病毒的繁殖，有研究显示HFMD发病率随温度和湿度增加而增加[7]。

引发HFMD的病原均为微小核糖核酸科，人肠道病毒属。这些病毒均来源于人体，能引起人体肠道暂时性感染；可由人体消化道和鼻咽部分离出病毒。本研究采集HFMD患儿粪便标本进行病原检测，能够代表HFMD的病原。HFMD可由多种肠道病毒引起，以往EV71和CoxA 16为常见病原，2013年长春市儿童医院住院HFMD患儿EV71和CoxA 16阳性检出率明显低于EV和CoxA6。说明2013年HFMD病原，CoxA6取代EV71与CoxA 16成为感染优势型。CoxA6作为HFMD的病原2010年在台湾曾经爆发流行[8]；2013年湖南省郴州市HFMD病原CoxA6占41.55%[9]；2013年北京市昌平区HFMD咽拭子中CoxA6阳性检出率为44.68%[10]；沈阳市报道2013年HFMD患儿粪便标本CoxA6核酸阳性检出率16.2%[11]。本文对CoxA6核酸序列分析显示：2013年长春市儿童医院住院HFMD优势病原CoxA6核酸序列在基因进化树上分居在2枝上。14号、19号、22号、23号同源性高，与广东、上海和温州等地流行株位于基因树的同一分支；5号位于基因树的另一支，与湖南株同源性最高。近年来流行于世界各地的COXA6新变种同源性较高,而与原型株进化距离较远。CoxA6在HFMD中的流行情况还应继续监测并进行基因的朔源分析，将有重要意义。

HFMD的病原出现了肠道病毒型别不断变化，趋于多样性和多种型别共流行的状态。而HFMD病原不同，其临床表现轻重不同，研究显示EV71 感染临床多表现为重型[12，13]，CoxA6引发HFMD多为轻型[14，15]。监测HFMD病原的特点对于其预防及预后评估有重要警示作用。本研究还有40.59%为确诊手足口病病例，但病原非EV/EV71/CoxA16/CoxA6，提示还有部分病原可以引发HFMD样临床表现，有待人们进一步研究证实。

参考文献：

[1]中华人民共和国卫生部．HFMD诊疗指南(2010年版)[J]．国际呼吸杂志，2010，30(24):1473．

[2]王宗发，刘自付.手足口病一例报告[J].第一军医大学学报，1983，3(2):147.

[3]卫生部关于将手足口病纳入法定传染病管理的通知[J].中华医学信息导报,2008,(10)：6.

[4]O Eng-Eong,P Meng-Chee,I Baharudin,et al.Seroepidemiology of human enterovirus 71 Singapore[J].Emerg Infect Dis,2002,8(9):995.

[5]Chang LY,King CC,Hsu KH,et al.Risk factors of enterovirus 71 infection and associated hand,foot,and mouth disease/herpang in a in children during an epidemic in Taiwan[J].Pediatrics,2002,109(6):E88.

[6]许国璋，倪红霞，易波，等.浙江省宁波市2008-2011年HFMD流行病学及病原学特征分析[J].中华流行病学杂志，2013,34(4)：361.

[7]Onozuka D,Hashizume M.The influence of temperature and humidity on the incidence of hand,foot,and mouth disease in Japan[J].Sci Total Environ,2011,410(411):119.

[8]Wei SH，Huang YP,Liu MC，et al.An outbreak of coxsackievirus A6 hand,foot,and mouth disease associated with cnychomadesis in Taiwan,2010[J].BMC Infect Dis，2011，11:346.

[9]谢群,刘爱平,谭徽,等.2013年湖南省郴州市手足口病病原学及柯萨奇A6和A10基因特征分析[J].中国卫生检验杂志,2015,25(14)：2370.

[10]金文军,赵炳岩,蔡旭,等.2013年北京市昌平区手足口病病原监测及临床特征分析[J].职业与健康,2014,(18)：2601.

[11]刘建敏,董雪,刘蕴博,等.沈阳市328例手足口病临床标本的病原学分析[J].海峡预防医学杂志,2014,(6):72.

[12]黄艳智，李丽红，王长青，等.肠道病毒感染危重患儿呼吸机治疗77例临床分析[J].中国小儿急救医学，2012，19(6)：635.

[13]李丽红，张晓杰，孙利伟，等.长春市小儿HFMD临床特点及病原学分析[J].中国小儿急救医学，2011，18(6)：515.

[14]马岩,李丽红,孙利伟.对2013年长春市柯萨奇病毒A6型手足口病的临床分析[J].当代医药论丛,2014,(11)：26.

[15]马富生,刘国栋,赖伟权.手足口病的流行病学与临床特征分析[J].临床医学工程,2015,22(6)：721.

Etiology Characteristics of Children with Hand-foot-mouth Disease in Changchun Children’s Hospital during 2013

HUANGYan-zhi,WANGLi-xue,ZHAOYan-ling,etal.

(ChangchunChildren’sHospital,Changchun130051,China)

Abstract:ObjectiveInvestigated the etiology characteristics of the inpatients with hand-foot-mouth disease in Changchun children’s hospital during 2013.MethodsThe statuses of 1111 children with HFMD were retrospectively analyzed.The genes of EV,EV71,CAV16 and CVA6 were detected by the method of fluorescent quantitative polymerase chain reaction.10 positive samples from 1111 fecal specimens were sequenced.ResultsMain onset ages of the inpatients with HFMD from Changchun children’s hospital were 13-24 months in 2013.Summer (6-8 month ) was the high incidence season.EV and CAV6 were major pathogens.The detection rates of the EV and CAV6 were 50.21% and 46.00%.The peak months of EV and CAV6 were 6 month.CAV16 was 10 month.The was no peak month of EV71.7 sequences had high identities to the CAV6.The homology in the VP1 region was 96%-98%.Number 14,19,22 and 23 which had the high homology located in the same branch on phylogenetic tree.Number 5 located in another branch.ConclusionCAV6 was the dominant genotype of HFMD in Changchun children’s hospital during 2013.There were different genotypes circulated among children.Monitoring Etiology characteristics of HFMD was important for early prevention,diagnosis,treatment,and prognosis.

Key words:children；HFMD；CoxA6

(收稿日期：2015-04-09)

文献标识码：A

中图分类号：R725.1

文章编号：1007-4287(2016)03-0431-04

*通讯作者