紫丁香苷对大鼠肝缺血再灌注损伤保护作用的初步研究

姜月红,王燕颖

(1. 黑龙江省医院 检验科，黑龙江 哈尔滨150036;2.上海市东方医院 消化内科，上海200120)



紫丁香苷对大鼠肝缺血再灌注损伤保护作用的初步研究

姜月红1,王燕颖2*

(1. 黑龙江省医院 检验科，黑龙江 哈尔滨150036;2.上海市东方医院 消化内科，上海200120)

摘要：目的初步研究紫丁香苷对肝缺血再灌注损伤(Hepatic ischemia repefusion injury,HIRI)的保护作用。方法Wistar雄性大鼠随机分为假手术组(对照组)、缺血再灌注组(模型组)、紫丁香苷高、中、低剂量组，术后取血测定谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBiL)、肿瘤坏死因子a(TNF-a)、白细胞介素10(IL-10)含量；术后制备肝匀浆测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)含量。结果紫丁香苷高剂量组在1 h、3 h、6 h、24 h可以显著降低HIRI大鼠血清中ALT和TBiL水平。紫丁香苷高、中剂量组可以升高血清中SOD值；高、中、低剂量组可以显著降低血清中MDA值；中、低剂量组可以降低血清中MPO值，高剂量组可以显著降低血清中MPO值；中、高剂量组可以抑制iNOS活性。紫丁香苷高剂量组显著抑制血清中TNF-a含量升高，紫丁香苷高剂量组可以促进血清中IL-10含量升高。结论紫丁香苷对大鼠肝缺血再灌注损伤有保护作用，具体机制有待于进一步研究。

关键词：紫丁香苷；肝缺血再灌注损伤

(ChinJLabDiagn,2016,20:0359)

紫丁香苷 ( Syringin ) 为木脂素类天然产物，可以从木犀科植物紫丁香叶和五加科植物刺五加中分离得到。已有的药理试验结果表明，紫丁香苷具有抑制肝脏脂质过氧化的作用[1]，而氧化自由基增多，膜脂质过氧化增强正是肝缺血再灌注损伤(Hepatic ischemia repefusion injury,HIRI)的主要原因之一[2]。为了证实紫丁香苷对HIRI的保护作用，本实验选取大鼠HIRI模型，对其作用机制进行了探讨。

1材料与方法

1.1实验动物

健康Wistar雄性大鼠(清洁级)，体重(250±20) g，由哈尔滨医科大学实验动物中心提供。

1.2药品与试剂

紫丁香苷标准品( 批号11574-201201) 由中国药品生物制品检定所提供；ALT、TBiL试剂盒由哈尔滨世阳生物试剂有限公司提供；SOD、MDA、MPO、NO、iNOS试剂盒购自南京建成生物工程研究所；TNF-a 和IL-10 ELISA试剂盒由哈尔滨世阳生物试剂有限公司提供。

1.3实验动物分组和给药方法

将wistar雄性大鼠随机分为5组，每组8只。假手术组(对照组):只做手术而不用血管夹夹闭肝蒂;缺血再灌注组(模型组);紫丁香苷小剂量注射组(25 mg/kg);紫丁香苷中剂量注射组(50 mg/kg);紫丁香苷大剂量注射组(100 mg/kg)。药物组中每只大鼠均于给予肝素2 min后、缺血前30 min给药，正常组与模型组按体重计算给予等量生理盐水。

1.4大鼠HIRI模型制备

雄性wistar大鼠,体重290-350 g,于手术前12 h禁食,3 h禁饮水准确称重后,用10%的乌拉坦腹腔注射以麻醉大鼠待大鼠完全麻醉后,将其四肢固定于手术操作台上,对大鼠右后腿内侧和腹部两个术区进行常规备皮和碘伏消毒，铺无菌手术单在无菌条件下行右股静脉置管以便给药。取腹部剑突下至耻骨联合上正中切口,小心剥离肝胃韧带,暴露第一肝门,在自右股静脉给予肝素200U/只后2 min,用无创伤微血管夹钳夹肝蒂(包括门静脉、肝动脉、胆总管等)造成肝脏缺血，血流被阻断后的肝脏可见肝叶颜色由鲜红色变为暗红色。将肝脏肠管复位,腹壁切口拉拢后以温盐水纱布覆盖，缺血30min后小心取出血管夹，避免将血管撕裂,松动肝门处组织使肝脏血供恢复(即再灌注),然后用丝线缝合切口,关腹,即形成肝缺血再灌注模型[3]。

1.5标本处理和指标测定

血清ALT和TBil测定：缺血再灌1 h、3 h、6 h和24 h股动脉取血，血样离心分离血清。血清ALT和TBil测定按照试剂盒说明书进行。

肝匀浆中MDA、SOD、MPO、iNOS测定：缺血再灌注3 h后放血并迅速取出肝脏，生理盐水制成1∶10肝组织匀浆液，根据试剂盒说明书进行检测。

血清TNF-a和IL-10测定：缺血再灌注后1 h、3 h、6 h和24 h股动脉取血，血样离心分离血清，冻存于-80℃备用。采用双抗体夹心ELISA法测定，测定按照试剂盒说明书进行。

1.6统计学处理

2结果

2.1血清中ALT和TBil测定结果

如图1和图2所示，HIRI大鼠血清中ALT和TBiL水平随再灌注后的时间延长而升高，在3h和6h时达到高峰，24h时恢复至接近对照组水平，紫丁香苷高剂量组在1h、3h、6h、24h可以显著降低HIRI大鼠血清中ALT和TBiL水平。

中、低剂量组在3h是可观察到显著降低HIRI大鼠血清中ALT和TBiL水平，6h后由于HIRI大鼠死亡而无观测值。

##模型组与对照组比较(P<0.01)**与模型组比较(P<0.01)

##模型组与对照组比较 (P<0.01)*与模型组比较(P<0.05)**与模型组比较(P<0.01)

图2紫丁香苷对HIRI大鼠血清TBiL的影响(n=8)

2.2肝匀浆中MDA、SOD、MPO、iNOS测定结果

如表1所示，紫丁香苷高、中剂量组在大鼠HIRI后3h时，可以升高血清中SOD值；高、中、低剂量组可以显著降低血清中MDA值；中、低剂量组可以降低血清中MPO值，高剂量组可以显著降低血清中MPO值；中、高剂量组可以抑制iNOS活性。

2.3血清TNF-a和IL-10测定结果

如图3和图4所示，HIRI大鼠血清中TNF-a水平随再灌注后的时间延长而升高，在24h时达到高峰，紫丁香苷高剂量组显著抑制血清中TNF-a含量升高；血清中IL-10含量在HIRI后1小时达最高，随时间延长升高放缓，24h时接近对照组水平。紫丁香苷高剂量组分别在HIRI后3h、6h促进血清中IL-10含量升高。

表1　各组血清中 SOD、MDA、MPO含量和iNOS活性

#模型组与对照组比较(P<0.05)##模型组与对照组比较(P<0.01)*与模型组比较(P<0.05)**与模型组比较(P<0.01)

##模型组与对照组比较(P<0.01)**与模型组比较(P<0.01)

##模型组与对照组比较(P<0.01)**与模型组比较(P<0.01)

3讨论

HIRI是肝脏外科手术或肝移植过程中常见的病理过程。药物预防是临床常用的方法[4]。HIRI过程中组织缺血缺氧引起线粒体损伤，复氧后多个细胞因子的介入又进一步加重损伤，表现为血清中ALT、TBiL的异常升高。紫丁香苷高剂量组可以抑制ALT、TBiL的异常升高，提示其对HIRI具有保护作用。氧化应激是HIRI的重要机制，肝细胞的缺

血缺氧造成内源性抗氧化物质SOD的耗竭，同时中性粒、单核、巨噬细胞缺氧刺激后大量释放氧自由基和线粒体损伤产生的氧自由基，一同对细胞产生脂质过氧化损伤，产生脂质过氧化产物MDA，同时MPO作为中性粒细胞嗜天青颗粒产生的氧化应激相关酶，其活性增加意味着中性粒介导的肝损伤的加重。另外，iNOS激活可催化产生大量NO，NO自由基也是肝损伤的因素之一。紫丁香苷低中高剂量组能降低肝匀浆中MDA含量并呈剂量依赖，同时升高SOD含量，降低MPO和iNOS活性，提示紫丁香苷抗HIRI肝损伤源自其抗氧化应激作用。有研究表明[5]，炎症因子TNF-a直接导致肝窦内皮肿胀并激活肝窦内白细胞释放氧自由基造成肝损伤而IL-10能抑制这种炎症因子的产生。紫丁香苷高剂量组可以分别抑制TNF-a含量的升高和促进IL-10的产生，说明紫丁香苷的作用可能与恢复炎症因子与抗炎因子之间的平衡有关。综上所述，紫丁香苷对HIRI所造成的肝损伤具有保护作用，其具体作用机制有待于进一步研究。

参考文献：

[1]汪琢,姜守刚,祖元刚,等.刺五加中紫丁香苷的提取分离及抗肿瘤作用研究[J].时珍国医国药,2010,21(03):752.

[2]郭慕真,刘晓玲,冯志佳,等.肝缺血再灌注损伤与NF-κB[J].胃肠病学和肝病学杂志,2012,21(06):583.

[3]张琳,买买提祖农.买苏尔,袁一木,等.葡萄籽原花青素对大鼠肝缺血再灌注损伤的抗氧化作用研究[J].新疆医科大学学报,2010,33(02):121.

[4]金铃,方剑乔.中药预处理对肝缺血再灌注损伤防护作用的研究进展[J].甘肃中医学院学报,2010,27(01):63-65.

[5]周伟平,孙汉勇.肝缺血再灌注损伤对肿瘤增殖、转移的影响[J].世界华人消化杂志,2010,18(09):861.

Preliminary research on the protective effects of syringin against Hepatic ischemia repefusion injury in rats

JIANGYue-hong,WANGYan-ying.

(DepartmentofLaboratory,HeilongjiangProvincialHospital,Harbin150036,China)

Abstract:ObjectiveTo study of syringin on hepatic ischemia reperfusion injury(Hepatic ischemia repefusion injury,HIRI)protective effect.MethodsWistar male rats were randomly divided into sham operation group(control group),ischemic reperfusion group(model group),syringin high and low dose group.Postoperative serum alanine aminotransferase(ALT),total bilirubin(TBiL),tumor necrosis factor A(TNF-a),interleukin 10(IL-10 the content) and superoxide dismutase(SOD),malondialdehyde(MDA),myeloperoxidase(MPO),inducible nitric oxide synthase(iNOS) content in the postoperative preparation of liver homogenate were determined.ResultsSyringin high dose group in 1 h,3 h,6 h,24 h could significantly reduce HIRI rats serum ALT and TBiL levels.syringin high,middle dose group can be elevated serum SOD value;high,medium,low dose group can significantly decrease the serum MDA value;in low dose group,can decrease the serum MPO value;high dose group can significantly decrease the serum MPO value; high dose group can inhibit the activity of iNOS.High dose of syringin group significantly inhibited the increase of the content of TNF-a in serum,syringin high dose group could promote the increase of the content of IL-10 in serum.ConclusionSyringin has protective effects on hepatic ischemia repefusion injury of rats and the protective mechanism of the effect needs to further study.

Key words:Syringin;Hepatic ischemia repefusion injury

(收稿日期：2015-09-07)

文献标识码：A

中图分类号：R364.1+2

文章编号：1007-4287(2016)03-0359-03

*通讯作者

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