彝药劳伤药抗炎镇痛作用的实验研究

童妍 　罗伦才 　季小平 　李列平 　王利平

【摘 要】 目的：观察劳伤药的抗炎镇痛作用。方法：采用二甲苯致小鼠耳肿胀法、棉球肉芽肿法，醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加法观察劳伤药的抗炎作用，采用小鼠扭体法观察劳伤药的镇痛作用，采用大鼠佐剂性关节炎（AA）模型观察劳伤药对足肿胀的影响。结果：与模型组比较，劳伤药（5g/kg）能抑制二甲苯致小鼠耳肿胀，抑制棉球致小鼠肉芽肿，抑制醋酸引起的毛细血管通透性增加，抑制冰醋酸引起的小鼠扭体反应，能明显减轻AA大鼠原发性和继发性关节肿胀。结论：劳伤药乙醇提取物有明显的抗炎镇痛作用。

【关键词】 彝药；醇提物； 抗炎；镇痛

【中图分类号】R29 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）06-0001-03

类风湿性关节炎的治疗目的以镇痛，消炎，防止或减缓关节变形及损伤，及增加关节活动度为主。到目前为止，西医药治疗本病仍无较为理想的方法。医药界一直致力于研究开发毒副作用小、疗效显著的抗类风湿药物及疗法。劳伤药，即彝药汝无糯鸡，为金粟兰科植物海南草珊瑚的全草[1]。Sarcandra hainanensis （Pei）Swamy et Bailey。《彝药志》：“性平，味苦微麻。清热解毒，活血祛瘀，舒筋止痛，通利关节，治疗流感、乙型脑炎、麻疹、肺炎、风湿性关节炎、劳伤腰痛。”《中华本草》[2]：“苦，辛，平，活血散瘀，祛风止痛。主跌打损伤，骨折，瘀阻肿痛，风湿痹痛，肢体麻木等症。”目前，关于劳伤药的药理作用研究较少，尚未见抗炎镇痛的文献报道，本文首次研究劳伤药的抗炎镇痛活性，为临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂 劳伤药采于凉山，经四川省食品药品学校闵伯清老师鉴定为金粟兰科植物海南草珊瑚Sarcandra hainanensis （Pei）Swamy et Bailey的全草。取药材粉末3kg，95%乙醇渗滤提取，合并提取液，减压浓缩并回收乙醇得总浸膏123.4g，得率4.11%。吲哚美辛，广东华南药业集团有限公司，国药准字H44020701，尼美舒利胶囊，远大医药（中国）有限公司，国药准字H20010751。试验药物临用前用蒸馏水配成相应浓度。依文思蓝，国药集团化学试剂有限公司，批号：20130621，冰醋酸，成都市科龙化工试剂厂，批号： 20140218，，二甲苯，成都市科龙化工试剂厂，批号：20130821，弗氏完全佐剂，美国Sigma公司生产，批号，Lot SLBM2183V。

1.2 动物 昆明种小鼠，体重18g～22g，SD大鼠，体重180g～220g，购于简阳达硕动物科技有限公司，合格证号：SCXK（川）2013-24。

1.3 仪器 TU-1901双光束紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司。

1.4 方法

1.4.1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响[3]将50只雄性KM小鼠随机分成5组：模型组，吲哚美辛组，劳伤药组（5g/kg，2.5g/kg，1.25g/kg），每组10只。劳伤药各剂量组和吲哚美辛组每日灌胃给药1次，连续7d，模型组灌胃同体积蒸馏水。末次给药后1h，在每只小鼠右耳前后两面分别涂抹二甲苯0.02ml，1h后将小鼠处死，沿耳廓剪下两耳，在相同部位用直径为9mm的打孔器，分别凿下相等面积的耳片称重，以左右耳片重量差值为肿胀度，表示药物的抗炎效应，并计算肿胀抑制率，抑制率=（模型组肿胀度-给药组肿胀度）/模型组肿胀度×100%。

1.4.2 对棉球致小鼠肉芽肿的影响[3]分组方法同1.5.1，各组小鼠在乙醚浅麻醉下，将已高温灭菌棉球约5.0mg植入小鼠右侧腋窝下，缝合，第二天开始连续灌胃给药7d，末次给药1h后处死小鼠，取出棉球，在烘箱中干燥后，称质量，减去原棉球质量即为肉芽肿胀质量，计算小鼠肉芽肿胀抑制率。

1.4.3 对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响[4]分组及给药方法同1.5.1，末次给药后lh，按0.1ml/10g（体重）小鼠尾静脉注射5%依文思蓝溶液，立即腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml/只；20min后处死小鼠，用5ml生理盐水冲洗小鼠腹腔，收集冲洗液，3000rpm离心15min，取上清液于分光光度计59Onm处比色，测定吸光度值（A）。

1.4.4 对醋酸致小鼠扭体反应的影响[4]分组及给药方法同1.5.1，末次给药后lh，小鼠腹腔注射0.7%醋酸溶液0.1ml/10g，观察小鼠出现扭体反应的潜伏期及15min内扭体反应的次数，以小鼠腹部凹陷、双后肢伸展为扭体反应指标。

1.4.5 对AA大鼠关节肿胀的影响将50只SD雄性大鼠随机分成5组：模型组，尼美舒利组，劳伤药组高、中、低剂量组，每组10只。于每只大鼠右后足趾皮内注射0.lml弗氏完全佐剂（每毫升佐剂含l0mg灭活结核杆菌），建立佐剂性关节炎大鼠模型。致炎后，各组大鼠按照设定剂量连续给药30d，模型组大鼠给予等体积蒸馏水。于致炎后6、12、24、36、48、72h测量致炎足周长，以致炎前后差值表示其肿胀度，观察劳伤药对AA大鼠急性原发性炎症的影响。于致炎后第12、18、24、30天测定非致炎足（左足）的足周长变化，以观察劳伤药对AA大鼠继发性关节肿胀的影响。

1.4.6 统计学方法 实验结果均以x±s表示，采用SPSS13.0统计软件进行处理，用One-Way ANOVA进行分析，P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 劳伤药对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响

与模型组比较，劳伤药组的耳肿胀度均明显减轻（P<0.05）。

2.2 劳伤药对棉球致小鼠肉芽肿的影响 与模型组比较，劳伤药组的棉球肉芽肿降低（P<0.01）。

2.3 劳伤药对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响

与模型组比较，劳伤药组能抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加（P<0.01）。

2.4 劳伤药对醋酸致小鼠扭体反应的影响

与模型组比较，劳伤药组扭体反应潜伏期均有一定的延长，且扭体次数有明显减少（P<0.05或P<0.01）。

2.5 劳伤药对佐剂性关节炎所致大鼠原发性足肿胀的影响

模型组大鼠右后足明显肿胀，在致炎后12～36h肿胀度达到峰值；与模型组比较，劳伤药能明显减轻AA大鼠原发性关节肿胀（P<0.05）。

2.6 劳伤药对佐剂性关节炎所致大鼠继发性足肿胀的影响

模型组大鼠发生继发性足肿胀，且随着致炎时间延长继发性足肿胀越明显。与模型组比较，劳伤药能明显抑制佐剂性关节炎大鼠继发性足肿胀（P<0.05）。

3 讨论

彝药劳伤药，彝族民间临床主要用于治疗风湿性关节炎。炎症是机体对各种损伤所发生的以防御为主的反应，是最基本的病理过程。通常药理学研究中所采用的炎症模型就是根据炎症发生、发展过程中这 3 个不同时相的性质而设计的，所以炎症模型可归纳为 3 种类型：渗出和肿胀模型，白细胞游走模型，肉芽肿增生模型[5]。二甲苯致小鼠耳肿胀模型是急性炎症模型，棉球肉芽肿模型是亚急性（慢性）炎症模型，非特异性炎症反应的急性时相反应以局部血管扩张和毛细血管通透性增高为特征[6]，实验结果表明劳伤药乙醇提取物高剂量组小鼠的耳廓肿胀度较模型组显著降低，棉球肉芽重降低，醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性降低；醋酸扭体法比较适合外周镇痛作用机制药物的筛选，本实验结果表明劳伤药明显减少小鼠扭体次数，说明劳伤药对腹腔注射化学刺激物质引发的小鼠痛疼具有镇痛作用。佐剂性关节炎（AA）是目前广泛应用的类风湿关节炎（RA）模型之一，AA大鼠与人类RA在发病机制、临床表现等方面有着十分相似的特点，较好地再现了RA的发病及早期病变。完全弗氏佐剂作为一种免疫激发剂，可促使大鼠产生免疫性炎症反应，释放大量致炎致痛物质，使大鼠产生长期稳定且敏感的关节疼痛，致炎后大鼠一般呈现出原发性炎症反应相和继发性炎症反应相两个反应时相，表现出典型早期及慢性炎症反应。劳伤药能明显减轻AA大鼠原发性和继发性关节肿胀，减轻或减缓AA大鼠炎症反应，减轻关节肿胀作用，有效缓解RA早期及慢性症状。关于劳伤药抗炎镇痛作用机制还有待进一步研究。

参考文献

[1] 云南省楚雄州彝族自治州卫生中药检所.彝药志[M].成都： 四川人民出版社，1983：82-83.

[2] 国家中医药管理局.中华本草[M].上海：上海科学技术出版社，1999：2061.

[3] 周劲帆，覃富景，冯洁，等.两面针根挥发油的抗炎镇痛作用研究[J].时珍国医国药，2012，23（1）：19-20.

[4] 陈艳芬，陶曙红，余结贞，等.牛白藤抗炎镇痛作用有效部位的筛选[J].中药新药与临床药理，2012，23（1）：17-19.

[5] 陈奇. 中药药理研究方法学[M]. 北京： 人民卫生出版社，1993：305.

[6] 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2002：906.

（收稿日期：2016.01.06）