和营安心方对衰老大鼠血清和脑组织白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α的影响

陈玺龙,陈晓春,李永民

(1.河北北方学院附属第一医院神经内科，河北 张家口 075000;2.河北北方学院中医学院，河北 张家口 075000)

和营安心方对衰老大鼠血清和脑组织白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α的影响

陈玺龙1,陈晓春1,李永民2

(1.河北北方学院附属第一医院神经内科，河北 张家口 075000;2.河北北方学院中医学院，河北 张家口 075000)

目的 观察和营安心方对衰老大鼠血清和脑组织白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响，探讨和营安心方对脑组织的保护作用。方法 48只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、维生素E组及和营安心方高、中、低剂量组。除正常组外，其他组颈背部皮下注射D-半乳糖125 mg·kg-1·d-1制备大鼠衰老模型，各组给予相应药物灌胃，正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃，连续8周。酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清和脑组织中IL-6和TNF-α含量。结果 与正常组比较，模型组血清和脑组织中IL-6和TNF-α含量增高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，各给药组血清和脑组织中IL-6和TNF-α含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)，和营安心方高剂量组作用最为显著。结论 和营安心方可下调血清和脑组织中IL-6和TNF-α的含量，通过减轻炎症反应，对脑组织起到保护的作用。

和营安心方；白细胞介素-6；肿瘤坏死因子-α；D-半乳糖；衰老

致衰老的因素包括自由基损伤、炎症介导、细胞凋亡、基因调节[1]等，且各因素间甚至各因素与环境之间相互作用从而促进衰老的发生发展。D-半乳糖所致衰老大鼠模型近于自然衰老，是近年来国内应用最多的衰老造模方法。本研究基于炎症反应这一因素，采用颈背部皮下注射D-半乳糖建立大鼠衰老模型，观察和营安心方对D-半乳糖致衰老大鼠血清和脑组织白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响，探讨其对衰老大鼠脑组织的保护作用。

1 材料与方法

1.1 动物及试剂

1.1.1 动物

SPF级Wistar大鼠48只，健康雄性，3月龄，体质量180～220g，由河北省实验动物中心提供，合格证号：SCXK-(军)-2012-0004。

1.1.2 药品和试剂

和营安心方组方：桂枝15 g，白芍30 g，丹参20 g，玉竹15 g，茯苓15 g，西洋参6 g，购自张家口市北京同仁堂药房。D-半乳糖(上海研谨生物科技有限公司，批号G0625)，维生素E(天津市中央药业有限公司，批号130901)，TNF-α及IL-6 ELISA试剂盒购自武汉基因美生物科技有限公司，生产批号分别为DRE20040、DRE20113。

1.1.3 主要仪器

酶标仪(上海塞默尔仕尔仪器有限公司，MULTISKAN MK3)，高速冷冻离心机(美国，Sigma 3k30)，FS-2A可调高速匀浆机。

1.2 方法

48只3月龄Wistar雄性大鼠适应性饲养1周后随机分为正常组、模型组、维生素E组及和营安心方高、中、低剂量组，每组8只。除正常组外其他各组大鼠给予颈背部皮下注射D-半乳糖125 mg·kg-1·d-1[2]连续8周，制备大鼠衰老模型。以人与大鼠体表面积等效剂量比折算量为和营安心方中剂量组给药，扩大2倍为大剂量组，缩小2倍为小剂量组，中剂量组水煎浓缩为1∶1煎液(每毫升含生药1 g)，大剂量组浓缩为1∶2煎液(每毫升含生药2 g)，小剂量组浓缩为2∶1煎液(每毫升含生药0.5 g)，每次灌胃8 mL·kg-1，每天一次；正常组、模型组每次灌胃8 mL·kg-1生理盐水，每天一次；维生素E组每次灌胃30 mg·kg-1维生素E。连续给药8周，实验期间每周称大鼠体质量一次，并根据大鼠体质量变化调整灌胃剂量和注射剂量。

1.3 检测指标

各组大鼠末次给药后禁食不禁水12 h，测体质量后记录，1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，心脏取血4 mL，37 ℃水中放置30 min，3 000 r·min-1离心15 min，分离血清，置4 ℃冰箱保存，以备指标测定。大鼠采血后断头处死，取大脑组织4 ℃生理盐水冲洗，滤纸吸干，将大脑组织置于匀浆器，9倍生理盐水匀浆，3 000 r·min-1离心15 min，取上清液置4 ℃冰箱保存，以备指标测定。按ELISA试剂盒说明书检测IL-6和TNF-α水平。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 和营安心方对大鼠血清IL-6及TNF-α含量的影响。

与正常组比较，模型组血清中IL-6和TNF-α的含量增高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，各给药组血清IL-6和TNF-α含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)，且以和营安心方高剂量组和维生素E组作用最明显；与和营安心方低剂量组比较，和营安心方高剂量组和维生素E组血清IL-6和TNF-α的含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)(见表1)。

表1 和营安心方对衰老大鼠血清IL-6和TNF-α含量的影响

注：与正常组比较▲P<0.05，与模型组比较#P<0.05，与和营安心方低剂量组比较★P<0.05。

2.2 和营安心方对大鼠脑组织IL-6及TNF-α含量的影响。

与正常组比较，模型组脑组织中IL-6和TNF-α含量增高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，各给药组脑组织中IL-6和TNF-α含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)，且以和营安心方高剂量组和维生素E组作用最为显著；与和营安心方低剂量组比较，和营安心方大剂量组和维生素E组脑组织中IL-6和TNF-α含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)(见表2)。

表2 和营安心方对衰老大鼠脑组织中IL-6及TNF-α含量的影响

注：与正常组比较▲P<0.05，与模型组比较#P<0.05，与和营安心方低剂量组比较★P<0.05。

3 讨 论

关于衰老的中医学说主要有“阴阳失调说”、“脏腑虚衰说”、“脾胃虚衰说”、“肾虚衰老说”等。和营安心方由桂枝、白芍、茯苓、玉竹、丹参、西洋参等组成，该方源于《难经》，具有调和营卫、健脾和胃、平衡阴阳等作用。从西医角度讲，桂枝、玉竹等和营安心方组分都有明显抗炎、抗氧化从而延缓衰老的作用[3-4]。

随年龄增长，机体内自由基含量过剩，一方面直接可以产生氧化应激损伤，另一方面间接促使机体炎症反应水平升高，从而导致对机体的损伤。IL-6是一种由免疫细胞产生的具有促进炎症反应、调节免疫及神经内分泌功能的细胞因子，IL-6还与血管性疾病密切相关，可加速老年人认知功能下降[5-6]。在脑梗塞、老年性痴呆、动脉粥样硬化等与年龄相关疾病发生发展时，机体内IL-6含量都会有一定程度的升高，当进行抗炎治疗，IL-6含量不同程度下降后，又会减缓这些疾病的发生发展[7]。TNF-α是一种由巨噬细胞和内皮细胞产生的多功能炎性细胞因子，可促进多种细胞的增殖和凋亡，刺激细胞因子的级联反应导致细胞功能丧失，通过引发过量自由基的产生而促进机体衰老，参与脑梗塞、脑出血等脑血管疾病的发生发展过程[8-9]。IL-6和TNF-α在机体衰老的过程中，发挥着多种生理和病理作用。本研究结果显示，模型组大鼠血清和脑组织内的IL-6和TNF-α含量比正常组明显增高，说明衰老大鼠血清和脑组织内促炎因子IL-6和TNF-α水平升高；和营安心方高剂量组和维生素E组大鼠血清和脑组织内IL-6和TNF-α含量降低水平大体相同(P>0.05)，说明和营安心方和维生素E一样，可降低衰老大鼠的炎症反应水平；和营安心方高、中、低剂量组IL-6和TNF-α含量依次升高，说明和营安心方的作用可能与剂量有关。

本研究表明，和营安心方可降低衰老大鼠血清和脑组织内IL-6和TNF-α水平，通过减轻炎症反应发挥对脑组织的保护作用。

[1]Johnson A,Olsen R H,Merkens L S,et al.Stemer apolipoprotein E-low density lipoprotein receptor interaction affects spatial memory retention and brain apoE levels in an isoform-dependent manner[J].Neurobiol Dis,2014,64:150-162.

[2]徐智,吴国明,钱桂生,等.大鼠衰老模型的初步建立[J].第三军医大学学报,2003,25(4):312.

[3]张建荣,潘强等.复方桂枝茯苓丸对脑缺血再灌注损伤大鼠TNF-α、ET的影响[J].中国中医急症,2013,22(11):1841-1843.

[4]陈双,张娜,等.玉竹糖蛋白体内抗氧化作用研究[J].食品与药品，2012,14(7):250-253.

[5]Jenny M S,French B,Arnold A M,et al.Long-term assessment of inflammation and healthy aging in late life:The cardiovascular health sdudy all stars[J].J Gerontol A Biol Sci Med Sci,2012,67(9):970-976.

[6]Mooijaart S P,Sattar N Trompet S,et al.Circulating interleukin-6 concentration and cognitive decline in old age:The PROSPER study[J].J Intern Med,2013,274(1):77-85.

[7]韩易，拓西平.老年大鼠总抗氧化能力与白介素-6及诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的相关性研究[J].上海医学.2003,26(5):341-343.

[8]王咏龙，邹晓辉,党利华.急性脑梗死患者血清TNF-α和IL-6的表达及疏血通干预的临床意义[J].云南中医学院学报,2013,36(2):70-72.

[9]Musumeci M,Sotgiu S,Persichilli S,et al.Role of SH levels and markers of immune response in the stroke[J].Dis Markers,2013,35(3):141-147.

[责任编辑：李蓟龙 英文编辑：刘彦哲]

Effects of He Ying An Xin Fang on IL-6 and TNF-α in Serum and Brain of Aging Rats

CHEN Xi-long1,CHEN Xiao-chun2,LI Yong-min1

(1.Department of Neurology,The First Affiliated Hospital of Hebei North University,Zhangjiakou,Hebei 0750002,China;2.School of Traditional Chinese Medicine,Hebei North University,Zhangjiakou,Hebei 075000,China)

Objective To observe effects of He Ying An Xin Fang on IL-6 and TNF-α in Serum and brain of aging rats and explore its protective effects on brain.Methods 48 Wistar male rats were randomly divided into normal group,model group,He Ying An Xin Fang high-dose group,He Ying An Xin Fang mid-dose group,He Ying An Xin Fang low-dose group and Vitamin E group.Except the normal group,the other groups were injected with D-galactose at 125 mg(kg·d)in the back of the neck to prepare the rat model of aging.All groups were given the corresponding doses,while normal and model group everyday received gavage by giving the same amount of saline for 8 weeks.Then the IL-6 and TNF-α in serum and brain were detected with ELISA.Results Compared with normal group,IL-6 and TNF-α levels in serum and brain tissue in model groups were increased with statistical significance(P<0.05).Compared with model group,levels of IL-6 and TNF-α in other groups were decreased with statistical significance(P<0.05).And among all the groups,the He Ying An Xin Fang high-dose group has the most obvious effect.Conclusion He Ying An Xin Fang could down-regulate the level of IL-6 and TNF-α in serum and brain tissue.By reducing level of pro-inflammatory factors,He Ying An Xin Fang could have protective effect on brain tissue.

He Ying An Xin Fang;IL-6;TNF-α;D-galactose;aging

河北北方学院创新人才培育基金课题(No.CXRC1319)

陈玺龙(1988-)，男，河北曲阳人，硕士研究生，研究方向：神经药理学。

陈晓春(1970-)，男，河北万全人，教授，硕士，硕士生导师，研究方向：神经电生理学。李永民(1970-)，男，河北万全人，教授，博士，硕士生导师，研究方向：中药药理学。

R 285.5

A

10.3969/j.issn.1673-1492.2016.12.001

来稿日期：2015-12-14