C-erBb-2，VEGF和MMP-9在大肠癌中的表达及其相关意义

吴福红　詹其林　李雪华

201500 上海市第六人民医院金山分院



C-erBb-2，VEGF和MMP-9在大肠癌中的表达及其相关意义

吴福红詹其林李雪华

201500 上海市第六人民医院金山分院

【摘要】目的探讨大肠癌中血管内皮生长因子(VEGF)、C-erBb-2和基质金属蛋白酶(MMP-9)的表达及其与临床病理特征的关系。方法选择大肠癌组织60例和远癌大肠黏膜20例；采用免疫组织化学方法检测VEGF，C-erBb-2和MMP-9的阳性表达，并对其表达与大肠癌的临床病理特征的关系以及三者间的相关性进行分析。结果在大肠癌组织中，C-erbB-2、VEGF和MMP-9的阳性表达率分别为50%、60%、60%，明显高于远癌肠组织(P<0.01)。大肠癌组织C-erBb-2、VEGF和MMP-9阳性表达与年龄、性别和分化程度无关(P>0.05)，而与肿瘤侵袭深度、淋巴结转移和病理分期密切相关(P<0.05)。C-erBb-2，VEGF和MMP-9在大肠癌中的表达均呈正相关；VEGF和C-erbB-2间的等级相关系数为0.461；MMP-9和VEGF间的等级相关系数为0.483，C-erbB-2和MMP-9间的等级相关系数为0.427。结论C-erBb-2，VEGF和MMP-9的表达与大肠癌组织浸润、淋巴结转移和临床分期有关；提示可作为判定大肠癌发生、发展以及预后的指标。

【关键词】大肠癌；C-erBb-2；血管内皮生长因子；基质金属蛋白酶

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:526～529)

大肠癌是消化系统常见恶性肿瘤，具有易种植、高转移和易复发等特点。随着饮食结构和生活习惯的改变，大肠癌的发病率正逐年升高[1]；大肠癌在发病早期多无症状，随着肿瘤的增大和病情的发展，其临床症状才逐渐表现；而在临床上已有症状的患者，其局部病变往往处于严重阶段，或已是大肠癌的晚期；因此，早期发现是提高患者生存率的重要环节[2]。

现代医学认为，肿瘤血管生成在肿瘤组织的生长、侵袭和转移中发挥了重要作用，其中VEGF是目前被认为作用最强的促进血管生成因子，可诱导肿瘤新生血管生成并增加血管通透性[3]；癌基因(C-erBb-2)与癌发生、转移密切相关[4]；基质金属蛋白酶-9(MMP-9)是基质金属蛋白酶(MMPs)家族成员之一，可以有效地降解肿瘤表面的基质和基膜的构成蛋白[5]。本研究采用免疫组织化学方法检测大肠癌肿瘤组织中C-erBb-2、VEGF和MMP-9的表达及三者与临床病理指标的关系，分析其在大肠癌发生发展中的作用及相互关系，为大肠癌的诊断及预后判断提供客观的参考指标。

1材料与方法

1.1一般资料

本组研究共选择大肠癌组织60例，均为2012年1月至2014年2月间经我院病理科确诊的大肠癌组织标本，其中女性18例，男性42例；年龄29～81岁，平均(56.7±7.6)岁；病理分期：参照Dukes分期标准制定，其中A期8例，B期18例，C期25例，D期9例；高分化12例，中分化33例，低分化15例；淋巴结转移阴性28例，阳性32例。研究组织中远癌大肠黏膜组织20例，均为大肠癌行肠切除后的远侧断端肠黏膜组织，所有断端黏膜组织距癌组织均在10 cm以上，所有组织标本均经检查显示为正常肠黏膜。诊断标准：所有大肠癌组织标本均经病理检查确诊，大肠癌临床分期、分化程度和淋巴结浸润参照2002年国际抗癌联盟(UICC)标准制定[6]。大肠癌病例入选标准：①符合大肠癌诊断标准；②所有患者术前均未接受放化疗等治疗；③患者家属均知情；病例排除标准：①合并其他原发性肿瘤者；②合并其他疾病引起的C-erBb-2，VEGF和MMP-9升高或降低者；③在研究过程中资料遗失影响结果判断者。

1.2免疫组化染色

试剂：浓缩型MMP-9兔抗人单克隆抗体、即用型C-erbB-2鼠抗人单克隆抗体，即用型VEGF鼠抗人单克隆抗体，DAB显色试剂盒、即用型SP试剂盒均购自武汉博士德生物科技有限公司；所有组织标本均采取10% 的多聚甲醛固定，再行包蜡打理，组织切片，片厚4 μm，然后进行VEGF、C-erbB-2和MMP-9的免疫组化染色和HE 染色；实验具体操作方法严格根据SP试剂盒相关说明进行；PBS代替一抗作为阴性对照，已知阳性染色结果为阳性对照。

1.3结果判断

根据文献标准[7]要求进行；阳性细胞均为棕色或黄色颗粒，C-erBb-2阳性颗粒定位于细胞膜，VEGF及MMP-9阳性染色位于细胞质，随机选取10 个高倍镜下视野；细胞呈阳性数<10%为阴性结果，细胞呈阳性数≥10% 为阳性结果。

1.4分析指标

分析C-erBb-2、MMP-9和VEGF的阳性表达与患者的性别、年龄、癌组织分化程度、肿瘤组织浸润程度、临床分期和淋巴转移等临床病理特点间的关系。

1.5统计学方法

应用SPSS17.0软件包对数据进行分析，计数资料分析应用χ2检验，等级资料分析应用Spearman分析法，采取P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1大肠癌肿瘤组织中VEGF，C-erbB-2和MMP-9的表达

MMP-9 和VEGF的阳性染色位于大肠癌组织的细胞质或细胞核，C-erbB-2的阳性染色主要位于细胞膜。60例大肠癌组织标本中C-erbB-2，VEGF和MMP-9的阳性表达率分别为：50.0%，60.0%，60.0%，明显高于远癌肠组织(P<0.01)，见表1。

表1　2组C-erbB-2，VEGF和MMP-9阳性比较(例，%)

2.2C-erbB-2，VEGF和MMP-9表达与大肠癌临床病理特征的关系

大肠癌组织C-erBb-2、VEGF和MMP-9阳性表达与年龄、性别和分化程度无关(P>0.05)，而与肿瘤侵袭深度、淋巴结转移和病理分期密切相关(P<0.05)，见表2。

2.3C-erbB-2、VEGF、MMP-9在大肠癌组织中表达相关性分析

C-erBb-2，VEGF和MMP-9在大肠癌中的表达均呈正相关。VEGF和C-erbB-2间的等级相关系数γ=0.461，P=0.016；MMP-9和VEGF间的等级相关系数γ=0.483，P=0.013；C-erbB-2和MMP-9间的等级相关系数γ=0.427，P=0.019。

3讨论

恶性肿瘤以远处转移和局部浸润为最重要特征，也是恶性肿瘤致死率高的主因。以往研究表明，C-erbB-2基因的异常表达在恶性肿瘤组织的局部浸润、淋巴结转移和远处转移中扮演了重要角色，也是肿瘤生物学行为的重要关联因素，是目前临床大肠癌高度恶性的常用生物学标志物[8]。本研究通过对60例大肠癌患者的免疫组化分析表明C-erbB-2蛋白在大肠癌患者中的阳性表达显著高于正常组织，C-erbB-2的表达与年龄、性别、肿瘤组织浸润深度以及肿瘤分化程度无关，而在淋巴结转移患者其阳性组明显高于淋巴结转移阴性组，Duke’s分期中，C+D期明显高于A+B期，分期越高，阳性表达越明显；表明C-erbB-2可能在大肠癌浸润、发展和远处转移等过程中起到重要介导作用；C-erbB-2的阳性表达越高，大肠癌组织侵袭性越强。这说明c-erbB-2在大肠癌的生长、侵袭和转移中起着非常重要的作用。

表2　C-erBb-2，VEGF和MMP-9与大肠癌组织临床病理特征的关系

肿瘤的生长浸润和转移依赖于肿瘤的血管形成。VEGF作为糖蛋白二聚体的一种，目前也是最强血管通透剂之一，其主要作用为增加毛细血管壁的通透性。此外，VEGF还能够选择性促进内皮细胞的有丝分裂，诱导肿瘤组织新血管形成，从而促进肿瘤细胞脱落后侵入血管或邻近组织，以上病理反应均为肿瘤组织的浸润、生长和转移创造了前提条件[3,9]。国内研究发现[10]，结肠癌组织标本中VEGF 阳性表达较高，且VEGF 高水平表达可促进结直肠癌发生肿瘤组织浸润以及淋巴转移。在本组研究结果中，大肠癌组织中VEGF的阳性表达为60%，显著高于正常结肠组织的10%，与临床分期、浸润深度及淋巴结转移均相关，与上述报道基本一致，表明VEGF的异常阳性表达与恶性肿瘤的发生进程密切联系，能够引起恶性肿瘤细胞的增殖、侵袭以及远处转移。

MMP-9作为MMPs家族的重要成员，其被激活后能够形成Iv型胶原酶；因此，能够降解肿瘤周围组织的基质成分，从而肿瘤细胞可与细胞外基质粘附，然后沿着被降解的细胞外基质浸润到周围组织，最后实现远处转移[11]。本组结果显示：60例大肠癌中MMP-9的阳性反应达到60%，明显多于正常组织的20%，提示大肠癌细胞通过分泌MMP-9成分而降解基膜和细胞外基质，诱导肿瘤细胞浸润到深层管壁，同时侵及淋巴管引起淋巴结转移，是目前评价大肠癌恶性进程的一个有效指标。

C-erbB-2能够抑制细胞凋亡，促进或保持肿瘤细胞的增殖、生长；C-erbB-2通过上调VEGF而促进肿瘤新血管的形成，促进肿瘤细胞发生侵袭、转移等；MMP-9 是一种降解基膜的重要蛋白酶，不仅参与基膜的降解，还能诱导肿瘤细胞运动和粘附。MMP-9的主要作用包括刺激肿瘤的生长，破坏局部结构，加速肿瘤的远处转移，导致肿瘤新血管的生成[12]。在本研究中，VEGF、C-erbB-2和MMP-9在大肠癌组织中的阳性表达显著多于正常组织，均提示这些指标可能参与了肿瘤的发生、发展进程；VEGF、C-erbB-2和MMP-9的异常表达与淋巴结转移和肿瘤分期有密切关系，且在大肠癌肿瘤组织中表达呈正相关；证实了C-erbB-2、VEGF和MMP-9与肿瘤的恶性程度与进展情况有关，推测其在大肠癌的发生发展中可能有协同作用。因此，我们认为联合检测C-erbB-2、VEGF和MMP-9在大肠癌肿瘤组织中的表达对临床评价肿瘤的生物学特征及其预后有重要作用，以上结果为进一步的大肠癌的基因诊断和靶向治疗提供重要研究依据。

参考文献

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(编辑：甘艳)

Expression of C-erBb-2，VEGF，and MMP-9 in Laryngeal Carcinoma and Its Clinical Significance

WUFuhong，ZHANQilin，LIXuehua.Shanghai6thPeople'sHospital，JinshanBranch，Shanghai，201500

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of C-erBb-2，vascular endothelial growth factor(VEGF)，and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) in laryngeal carcinoma and its correlation with clinical pathological factors.Methods60 laryngeal carcinoma tissues and 20 normal tissues of large intestine were chosen.Immunohistochemistry method was employed to detect the expression of C-erBb-2，VEGF，and MMP-9 in all tissues.The relationship between expression of C-erbB-2，VEGF，and MMP-9 with clinicopathological factors of laryngeal carcinoma tissues was analyzed，and at the same time correlation among C-erbB-2，VEGF，and MMP-9 was also analyzed.ResultsThe positive rates of C-erbB-2，VEGF，and MMP-9 in laryngeal carcinoma tissues were 50%，60%，and 60% respectively，which were obviously higher than those of normal tissues of large intestine (P<0.01).There was statistical correlation between expression of C-erBb-2，VEGF，and MMP-9 in largengeal carcinoma and tumor invasion，metastasis，and pathological grade (P<0.01，P<0.05)，but was not related with age，sex，and differentiation (P>0.05).Expression of C-erBb-2，VEGF，and MMP-9 were positive correlated in laryngeal carcinoma tissues.Coefficient of rank correlation between VEGF and C-erbB-2 was 0.461，MMP-9 and VEGF was 0.483，C-erbB-2 and MMP-9 was 0.427.ConclusionExpression of C-erBb-2，VEGF，and MMP-9 in laryngeal carcinoma tissues are significantly related to pathological grade，clinical stage，and metastasis，it can be marker evaluating occurrence，development，and prognosis of laryngeal carcinoma.

【Key words】Laryngeal carcinoma；C-erBb-2；Vascular endothelial growth factor(VEGF)；Matrix metalloproteinase-9(MMP-9)

(收稿日期2015-06-22修回日期 2015-10-08)

中图分类号：R735.3+4

文献标识码：A

文章编号：1001-5930(2016)04-0526-04

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.04.002