P53、MDR-1基因在中老年食管癌患者中的表达及临床运用分析

钟亚莉,刘　超,赵治国　(河南省郑州大学第二附属医院消化内科,河南 郑州 450017)



P53、MDR-1基因在中老年食管癌患者中的表达及临床运用分析

钟亚莉,刘超,赵治国(河南省郑州大学第二附属医院消化内科,河南 郑州 450017)

【摘要】目的：探究P53、MDR-1基因在中老年食管癌患者中的表达及临床意义. 方法：选取郑州大学第二附属医院与安阳肿瘤医院共同收治的120例食管癌患者作为研究对象，对其血清P53基因，以及癌组织中P53蛋白及MDR-1基因进行检测，并对P53基因表达与患者放化疗预后的相关性进行分析. 结果：P53基因mRNA阳性45例，表达量为0.43±0.12；阴性75例，表达量为0.09±0.03. P53 mRNA表达阳性组其MDR-1基因阳性例数为41例，阴性组其MDR-1基因的表达为65例；表达阴性组其治疗有效率明显高于阳性组，差异具有统计学意义(P<0.05). 结论：P53、MDR-1基因的表达与食管癌患者治疗预后有明显的相关性.

【关键词】P53基因;MDR-1基因;预后;食管癌

0引言

食管癌作为常见的消化系统肿瘤，其发生是由多阶段、多因素构成的，主要涉及到多种基因的一次表达等[1]. 其分子生物学研究表明细胞增殖活动明显异常、肿瘤基因以及抑癌基因的异常表达等在食管癌的发病过程中均发挥着重要的作用. P53基因作为参与肿瘤发生发展的基因，也参与了其他基因的转录，继而达到抑制细胞增殖和对损伤的细胞进行修复等作用. P53基因的缺陷可能与人体细胞的异常增殖有关联. 研究[2]表明，P53基因的无效突变可导致出现一种顶端短缺的相关蛋白，该蛋白无法与DNA结合，故无法发挥其修复损伤的特性，同时该无效突变可降低癌细胞对化疗药物的敏感性，继而导致癌细胞产生对抗肿瘤药物的抗药性. 本研究中对老年食管癌患者的食管癌组织以及癌旁组织进行P53以及MDR-1基因检测并探究其临床意义，现报道如下.

1资料和方法

1.1一般资料选取郑州大学第二附属医院与安阳肿瘤医院2009-01/2013-01共同收治的食管癌患者329例作为研究对象，取其胃镜活检标本蜡块进行常规石蜡包埋后行HE染色提示均为鳞癌. 患者年龄>45岁，KPS评分>70分，肿瘤病变长度<8 cm，且无锁骨上淋巴结或其他淋巴结转移，无食管穿孔征象，患者可进食流食，无声带麻痹，无胸部放疗史且无其他恶性疾病. 符合以上要求患者120例，其中男76例，女44例，年龄45～76(平均67.6±12.2)岁，病变部位位于胸下段11例，胸中段89例，胸上段20例，分化程度为低分化38例，中分化45例，高分化37例. 病理类型分析，其中髓质型65例，蕈伞型31例，缩窄型4例及溃疡型20例. 所有患者在接受治疗前均进行心电图、血常规、肝肾功能以及腹部B超、胸部X光、食管左右前斜位检查等. 经患者及其家属同意，医院伦理委员会批准后进行本研究.

1.2方法

1.2.1P53基因表达的检测患者于入院第二天空腹取静脉血2 mL，采用Trizol液提取法对总RNA进行提取，所提取的总RNA必须在收样后4 h内完成所有操作，然后采用RT-PCR方法对外周血白细胞中的P53基因的相关mRNA的表达情况进行分析，逆转录试剂盒为美国Fermentas公司产品，引物购自生工生物工程有限公司，P53 F:5’-GTTTCCGTCTGGGGTTCTTG-3’,R:5’CACAACCTGCGTCATGTGCT-3’;GAPDH:F:5’ACAGTCAGCCGGATCTTGTTT-3’,R:5’-CCATCACGGCACAGTTTCC-3’;取PCR反应产物在电泳槽中进行电泳分析，而后采用凝胶成像系统对目的条带进行观察并分析其灰度值，P53基因的相对表达量为P53和GAPDH的灰度比值.

1.2.2P53蛋白的检测对所有检测蛋白均采用免疫组化ABC法进行检测，其中试剂盒均采用Maxim Biotech的相关产品，如免疫组化单克隆抗体、免疫组化SP试剂盒等，并采用PBS代替一抗进行阴性对照试验. 根据P53的着色强度进行评价：强阳性：组织细胞染色深或阳性细胞达到50%以上；中度阳性：组织细胞染色适中或阳性细胞达到20%～50%；弱阳性：组织细胞染色浅或阳性细胞低于20%；阴性：组织细胞无染色，或未见阳性细胞.

1.2.3MDR-1基因的检测总RNA提取运用异硫氰酸胍一步法，其下游引物为5’-GTTCAACTTCTGCTCCTGA-3’，上游引物为5’-CCCATCATTGCAATAGCGG-3’,采用RT-PCR进行逆转录，而后进行电泳，并在紫外透射仪下进行电泳带的检测.

1.2.4治疗方案对患者进行三维适形放疗，采用6MV-X线，每次放疗剂量为1.8～2.0 Gy，每周5次，放疗总剂量为60～70 Gy. 在放疗过程中，将食管原发病灶、纵膈、食管旁、锁骨上区淋巴结以及淋巴结预防放射区作为放射野，对于有远处转移的患者，如骨转移或脑转移的患者，则给予转移病灶剂量30 Gy/10次. 放疗中给予患者同步的氟尿嘧啶联合顺铂化疗方案进行治疗，每4周重复一次.

1.3疗效判断标准根据WHO肿瘤治疗评价标准进行疗效评价，分为完全缓解、部分缓解、稳定及进展，其中完全缓解和部分缓解代表治疗有效.

1.4统计学处理采用SPSS14.0统计学软件对数据进行分析，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，P<0.05表示差异具有统计学意义.

2结果

2.1患者外周血白细胞中P53基因mRNA的表达情况外周血白细胞P53 mRNA阳性组45例，其中P53 mRNA的表达量为0.43±0.12；P53 mRNA阴性组75例，P53 mRNA表达量为0.09±0.03，两组比较,差异具有统计学意义(P<0.05).

2.2P53 mRNA表达阳性组及阴性组其P53蛋白在食管癌组织中的表达情况阳性组其P53蛋白在食管癌组织中表达阳性率明显高于阴性组,差异具有统计学意义(P<0.05,表1).

表1P53 mRNA表达情况与食管癌组织中P53蛋白表达的相关性分析

组别n强阳性中度阳性弱阳性阴性阳性率(%)阳性组4534920100a阴性组751576217.3

aP<0.05vs阴性组.

2.3P53 mRNA表达阳性组及阴性组其MDR-1基因的表达情况P53 mRNA表达阳性组其MDR-1基因阳性41例，阴性组其MDR-1基因的表达65例，P53 mRNA表达与MDR-1基因的表达有明显的正相关性(P<0.05).

2.4 P53 mRNA表达与患者预后的相关性分析P53 mRNA表达阳性组其治疗有效率明显低于阴性组，差异具有统计学意义(P<0.05,表2).

表2两组患者治疗预后比较

组别n完全缓解部分缓解稳定进展治疗有效率(%)阳性组45311191231.1a阴性组75134515277.3

aP<0.05vs阴性组.

3讨论

现阶段食管癌的发病率出现明显上升的趋势，临床发现时多为晚期患者，这类患者由于缺乏手术治疗的机会，故主要进行放化疗治疗[3]. 随着肿瘤分子生物学的发展，关于肿瘤基因的表达对预后影响的相关性的研究越来越受到关注. 现阶段已发现部分肿瘤抑制基因以及癌基因的异常可能对肿瘤细胞的凋亡以及放疗的敏感性产生影响. 张培龙等[4]研究发现细胞周期的变化可能与肿瘤放疗的敏感性有明显的相关性，大部分细胞在G期对放疗具有较强的抵抗作用，最敏感时期则为G/S交界期，其DNA切除修复细胞的能力在适当剂量的放疗后出现明显的降低，继而表现出细胞的凋亡. 而在细胞进入S期后，放化疗的敏感性又开始降低，敏感性最低为S晚期，而当进入G/M期时肿瘤细胞对放疗的敏感性又开始增加，故参加细胞调节的基因产物均可能与肿瘤细胞的放疗敏感性有一定的相关性[5].

P53基因和人类肿瘤的发生发展有明显的相关性. 作为一种重要的抑癌基因，其编码的53KD蛋白在细胞周期过程中发挥着重要的作用，正常情况下具有抑制肿瘤生长的作用，但当该基因发生缺失或突变时反而会促进肿瘤的发生发展[6]. P53基因的缺失可导致如乳腺癌、骨癌、恶性肉瘤等肿瘤的发生. 肿瘤对放疗的敏感性与P53基因有一定的相关性. P53作为细胞周期调控的负向因子，参与了肿瘤细胞的发生和发展过程，由于P53基因的表达蛋白可将肿瘤细胞停滞在C/G期，从而抑制肿瘤细胞的生长发展，当P53发生缺失或突变时，则会导致恶性肿瘤的增殖和生长[7]. 现阶段围绕P53基因与恶性肿瘤放疗的相关性展开的研究较少，有研究[8-9]表明，当恶性肿瘤发生P53缺失或突变时，会使CDK4的活性不能得到有效抑制，从而不能有效的将细胞周期由G期进展到S期进行抑制，继而导致肿瘤细胞的增殖. MDR-1基因作为现阶段研究最为广泛的多药耐药性基因，其编码的P-gP作为肿瘤细胞的耐药膜蛋白，其高表达与肿瘤的耐药性有明显的相关性[10]. 通过对P53、MDR-1基因在食管癌患者中的表达的研究，分析P53表达与食管癌患者放化疗之间的相关性，继而为非手术食管癌患者的临床治疗提供参考. 结果显示，对于失去手术机会的中晚期食管癌患者，其外周血中存在P53 mRNA表达，且MDR-1基因与P53 mRNA的表达有明显的相关性，故我们认为P53基因与食管癌的发生发展有一定的相关性. 在对食管癌患者放化疗治疗预后的分析发现，P53 mRNA表达性组对放化疗的预后明显优于P53 mRNA表达阳性组. 本研究提示MDR-1基因与P53 mRNA在外周血及癌组织中均表现出高表达水平，且P53 mRNA的突变早于肿瘤组织中形态的改变. 我们进一步认为食管癌放化疗的敏感性与P53 mRNA是否过度表达有明显的相关性，故对食管癌患者进行P53及MDR-1基因的检测有助于指导临床治疗方案的制定.

综上所述，对于外周血P53基因高表达的患者，应当给予结合P53相关基因的放化疗方案进行治疗，以提高患者的临床预后. 但由于本研究的样本量较少，可能导致研究具有一定的偏倚，故需进一步加大样本量多中心的进行探究.

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[10] 黄志军. 食管癌、癌旁组织中P53、MDR-1基因的表达[J]. 中国老年学杂志,2015,34(7):1782-1784.

Expression and clinical application analysis of P53, MDR-1 gene in elderly patients with esophageal cancer

ZHONGYa-Li,LIUChao,ZHAOZhi-Guo

Department of Gastroenterology, Second Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450017,China

【Abstract】AIM: To explore the expression and clinical significance of P53, MDR-1 gene in elderly patients with esophageal cancer. METHODS: A total of 120 patients with esophageal cancer were selected as research objects. Their serum P53 gene were detected as well as the P53 protein and MDR-1 gene in cancer tissue. The correlation between P53 gene expression and prognosis after chemoradiotherapy in patients were analyzed. RESULTS: P53 gene mRNA-positive in 45 cases, with the expression level of 0.43 ± 0.12; 75 cases of negative expression, with the expression level of 0.09±0.03; 41 MDR-1 gene positive cases in P53mRNA-positive group, 65 MDR-1 expression positive cases in P53mRNA-negative group. Negative expression group had significantly higher efficiency of treatment (P<0.05). CONCLUSION: There is a significant interaction between expression of P53 and MDR-1 gene and prognosis of esophageal cancer patients.

【Keywords】P53 gene;MDR-1 gene;prognosis;esophageal cancer

【中图分类号】R735.1

【文献标识码】A

作者简介：钟亚莉. 硕士,主治医师. 研究方向:消化道肿瘤. E-mail: 2639554951@qq.com

收稿日期：2015-11-29；接受日期：2015-12-16

文章编号：2095-6894(2016)01-12-03

·基础与转化医学·