隐睾症与生殖细胞肿瘤关联性的病理研究

景诗学 吴波 罗添友

【摘要】目的：通过对隐睾患者检测神经细胞粘附分子（NCAM）及转录因子Oct-4蛋白，探讨隐睾症与生殖细胞肿瘤的关联性。方法：搜集入住我院的隐睾症的患者，采集隐睾睾丸标本，并进行睾丸活检，检测NCAM、Oct-4的表达；并分析两个指标的表达与隐睾位置和年龄的相关性。结果：NCAM在人隐睾中的表达与年龄组、睾丸位置无相关性（P>0.05）。但是大于5岁后隐睾内生精小管NCAM阳性表达有增高趋势。不同年龄组NCAM表达存在显著差异性（P<0.05），小于1.6岁年龄组与大于5岁年龄组间存在显著差异性（P<0.017），余年龄组间无显著差异性。NCAM在间质内阴性表达与睾丸位置分布无相关性（P>0.05）。Oct-4与NCAM生精小管内同时阳性表达有4例，其年龄及睾丸位置分布无规律。结论：NCAM、Oct-4在人隐睾中存在病理性表达，NCAM和Oct-4可作为临床预测隐睾患儿生殖潜能和睾丸癌变的筛查指标。

【关键词】隐睾；神经细胞粘附分子；转录因子Oct-4；不育；癌变

【中图分类号】R679+. 22【文献标志码】A

隐睾是一种常见的男性不育疾病，发病率高达3%～4%，且其发病率有升高的趋势＼[1，2＼]。临床医学研究已广泛关注隐睾症与癌变、不育的关系，有文献报道隐睾症引起了的生殖细胞肿瘤的概率是正常人的20～40倍＼[3＼]，引起约30%的睾丸肿瘤，是生殖细胞癌变的主要原因之一。特别是有人指出，即使将睾丸放入阴囊，也并不能改善隐睾患者的“不育、癌变”趋势＼[4＼]。有研究认为， 生殖母细胞迁移障碍或者分化延迟，不能形成足够的精原细胞池，是隐睾患者“不育”及“癌变”的最关键的环节，而Oct-4及NCAM的表达，在这关键环节起重要作用。本组资料采用免疫组化方法对隐睾患者的NCAM、Oct-4进行分析，探讨其与患者睾丸位置、年龄之间的相关性。

1资料与方法

1.1临床资料

本研究以2011年10月至2012年前来我院体检的48例隐睾患者为研究对象，单侧患者41例，双侧患者7例，手术年龄在0.5～13.1岁之间，平均年龄为3岁。经伦理委员会批准，获得患者家属知情同意条件下，共搜集50个睾丸标本，在单侧患者只取患侧共41个，双侧患者只取一侧共5个，取双侧者共2例4个。其中腹股沟型标本共21例，外环口型标本共14例，内环口型标本共10例，皮下型标本共5例。

1.2组织病理学检测

采用冰冻切片免疫组织化学方法进行睾丸组织病理检测。手术切除睾丸组织，置冰冻切片机载物台上，-22℃快速冷冻后，切片，将切片贴附于涂有APES胶的玻片上，用冷丙酮固定5s后晾干切片，再用Tris-HCL缓冲液洗10s，滴加细胞角蛋白即用型抗体于水平位置的玻璃片上，将组织覆盖，将盛有玻璃片的试剂盒放入43℃冰箱内孵育3min，用Tris-HCL缓冲液洗3次，每次10s，DAB显色，显微镜下控制染色强度，用Mayers苏木素复染20s，水洗后用梯度酒精脱水，二甲透明，封片，观察结果。设备及试剂盒由我院病理科提供。

结果判定：（1）NCAM阳性：新生鼠睾丸NCAM阳性免疫组化染色片作阳性对照，染色阳性信号为棕黄色，位于细胞膜。（2）Oct-4阳性判断：以成人精原细胞瘤阳性免疫组化染色片作阳性对照，染色阳性信号为棕黄色，位于细胞核。

1.3统计学

统计学软件是SPSS17.0，不同组之间的差异比较采用方差分析，连续型变量两组间比较采用t检验，不符合正态分布的采用秩和检验，率的比较采用Fisher确切概率法/χ2检验。P<0.05有统计学意义。两两比较应用Bonfrroni法，校正检验标准=0.05/检验次数。

2结果

2.150个睾丸中生精小管内NCAM、Oct-4病理表达规律及NCAM在隐睾生精小管和睾丸间质内表达NCAM生精小管（-）、睾丸间质（+）有21例，占42%；NCAM生精小管内（+）、睾丸间质（+）有13例，占26%；NCAM生精小管内阳性表达（+）、睾丸间质表达（-）有2例，占4%。NCAM在生精小管内（-）、睾丸间质（-）有14例，占28%。生精小管中NCAM（+）、Oct-4（-）有11例，占22%；生精小管中NCAM（+）、Oct-4（+）有4例，占8%；生精小管中NCAM（-）、Oct-4（+）有2例，占4%；总共17例，约34%在隐睾生精小管内病理性表达。见表1、表2。

2.2NCAM生精小管内表达、间质内阴性表达与年龄的相关性NCAM在人隐睾生精小管中的表达与年龄组无相关性（P>0.05）。但是大于5岁后隐睾内生精小管NCAM阳性表达有增高趋势。不同年龄组NCAM间质内阴性表达存在显著差异性（P<0.05），小于1.6岁年龄组与大于5岁年龄组间存在显著差异性（P<0.017），余年龄组间无显著差异性。见表3。

2.3NCAM生精小管内表达、间质内阴性表达与年龄的相关性Fisher确切概率法P=0.1415，P>0.05； NCAM间质内阴性表达与年龄的相关性Fisher确切概率法：P=0.0022，P<0.05。

2.4NCAM在人隐睾中的表达与睾丸位置无相关性（P>0.05）NCAM在间质内阴性表达与睾丸位置分布无相关性（P>0.05）。Oct-4与NCAM生精小管内同时阳性表达有4例，其年龄及睾丸位置分布无规律。见表4。

3讨论

NCAM是细胞粘附分子的一员， 启动并维持生殖母细胞发育，是调控间质细胞前驱体迁移及间质细胞分化发育的重要因子之一＼[5，6＼]。在正常发育过程中NCAM在生精小管中的表达在出生3～4个月时消失，同时在睾丸间质中开始出现，其异常表达，代表生殖细胞的生长分化异常，存在生殖潜能低下和/或癌变危险性＼[7，8＼]。本研究中，NCAM在人隐睾生精小管中的表达与年龄组无相关性（P>0.05），提示隐睾患者生殖细胞发生癌变的风险较高，并不受年龄影响。但是NCAM在生精小管中的异常表达，大于5岁后有增高趋势，提示可能隐睾患者生殖细胞发生癌变的风险随年龄增高而增加，需进一步增大样本研究。不同年龄组NCAM间质内阴性表达存在显著差异性（P<0.05），小于1.6岁年龄组与>5岁年龄组差异有统计学意义（P<0.017），其它年龄组间差异无统计学意义。提示隐睾患者睾丸间质细胞发生癌变的风险较高，并随着年龄有增高趋势，提示可能隐睾患者睾丸间质细胞发生癌变的风险随年龄增高，而增加，需进一步增大样本研究。统计学分析发现，本研究中NCAM生精小管内、间质内阴性表达均与睾丸置分布无相关性，即睾丸位置与生殖细胞发生癌变无相关性＼[9，10＼]。

Oct-4是生殖母细胞特异性标志物，参与睾丸生殖细胞的分化及睾丸结构的形成，与癌前病变相关＼[11，12＼]。Oct-4生精小管内的表达阳性有6例，占12%，且与其年龄及睾丸位置分布无相关性，提示提示隐睾患者睾丸癌变的风险与年龄、睾丸位置无关，提示可能隐睾患者癌变的风险在睾丸下降之前已经出现，但是本研究样本量少＼[13＼]，需进一步增大样本研究。

综上，.NCAM和Oct-4可作为临床预测隐睾患儿发生生殖细胞癌变的筛查指标，在50例标本中， NCAM、Oct-4正常表达的有19例，仅占38%，虽然其表达在隐睾患者中随年龄有增高趋势，统计分析其表达 NCAM、Oct-4在生精小管内表达与其年龄及睾丸位置分布无相关性，提示可能隐睾患者癌变的风险在睾丸下降之前已经出现＼[14，15＼]。本研究受到时间及临床标本来源限制，生殖细胞癌变预测指标和隐睾位置及单双侧的相关性，NCAM在间质表达异常与生殖细胞癌变的影响，是否治疗越晚生殖潜能损害越重等众多问题，尚待进一步扩大标本量和远期随访研究。

参考文献

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（收稿日期：2015-02-02）