青海地区回族、撒拉族胃癌患者雌激素受体基因多态性研究*

王 成，赵延芳，王 虎，谢艳超

(青海大学附属医院胃肠外科，青海 西宁 810001)

青海地区回族、撒拉族胃癌患者雌激素受体基因多态性研究*

王 成，赵延芳，王 虎，谢艳超

(青海大学附属医院胃肠外科，青海 西宁 810001)

目的 通过研究青海地区回族、撒拉族人群中ERα基因PvuⅡ和XbaⅠ、ERβ基因RsaⅠ及AluⅠ单核苷酸多态性(SNPs)分布情况，分析ERα基因和ERβ基因SNPs与青海地区回族、撒拉族胃癌患者的关系。方法 收集青海地区原发胃腺癌回族、撒拉族患者及条件与之匹配的健康对照组各80例。采集观察对象空腹静脉血2～3 mL提取DNA。应用PCR-RFLP法对ERα基因PvuⅡ和XbaⅠ、ERβ基因RsaⅠ及AluⅠ单核苷酸多态性(SNPs)进行鉴定，利用统计学方法分析ERα基因PvuⅡ和XbaⅠ、ERβ基因RsaⅠ和AluⅠ基因多态性与罹患胃癌危险性的关系。结果 回族胃癌组和对照组对比ERα-XbaⅠ基因XX、Xx、xx分布存在显著性差异，撒拉族胃癌组和对照组对比ERα-XbaⅠ基因XX、Xx、xx分布存在显著性差异；回族、撒拉族胃癌组和对照组ERα-PvuⅡ、ERβ-RsaⅠ、Erβ-AluⅠ基因型分布无差异；研究对象中胃癌组回族和撒拉族ERα-XbaⅠ、ERα-PvuⅡ、ERβ-RsaⅠ、Erβ-AluⅠ基因型分布无显著性差异。结论 ERα基因XbaⅠ位点多态性与青海地区胃癌的易感性存在相关性；ERα-XbaⅠ基因分布可能增加了罹患胃癌的危险性。但在青海地区回族、撒拉族胃癌人群间该基因型分布无显著性差异。ERα基因PvuⅡ、ERβ基因AluⅠ和RsaⅠ位点多态性与青海地区胃癌的易感性不具有相关关系。

胃癌 雌激素受体 遗传易感性 基因多态性

青海地区汉、回、藏、撒拉、土、蒙古族胃镜胃癌检出率分别为5.959%、8.519%、6.128%、6.868%、6.492%、3.876%；其中回族胃镜检出率最高[1]。本研究通过研究雌激素受体基因多态性与青海地区回族、撒拉族胃癌易感性的相关性，初步探讨雌激素受体基因多态性与青海地区回族、撒拉族胃癌易感性的关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料

采用1：1配对病例对照研究。将2012年12月至2015年6月在青海大学附属医院收治且经病理确诊为原发胃腺癌的80例回族、80例撒拉族患者作病例组；收集与病例组在民族、性别、年龄相匹配同期健康体检者各80例作对照组。所有研究对象在提供血液标本前，签署医学伦理学同意书，并经青海大学附属医院医学伦理委员会同意。

1.2 研究方法

1.2.1 DNA提取

抽取胃癌组和对照外周静脉血2～3 mL，分离血清，运用常规的盐析法提取白细胞中的基因组DNA，置-80 ℃冰箱保存备用。

1.2.2 引物合成

引物的设计与合成由上海生工生物工程(股份)有限公司合成。

引物序列：ERα基因PvuII、XbaI多态性引物

上游：5′-CTGCCACCCTATCTGTATCTTTTCCTATTCTCC-3′

下游：5′-TCTTTCTCTGCCACCCTGGCGTCGATTATCTGA-3′

PCR产物片段长度1.3 kb；

ERβ基因RsaI

上游：5′-TCTTGCTTTCCCCAGGCTTT-3′

下游：5′-ACCTGTCCAGAACAAGATCT-3′

PCR产物片段长度156 bp；

ERβ基因AluⅠ

上游：5′-TTTTTGTCCCCATAGTAACA-3′

下游：5′-AATGAGGGACCACACAGCA-3′

PCR产物片段长度307 bp。

1.2.3 PCR方法扩增

进行ERα基因片段、ERβ基因RsaⅠ多态位点片段和ERβ基因AluⅠ多态位点片段三对引物的PCR扩增。2%琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。外透射仪灯下观察结果，行限制性内切酶酶切分析。

1.2.4 统计学处理

本研究采用SPSS22.0软件进行分析，连续型资料采用均值和标准差表示，组间比较采用t检验；分类资料采用频数表示，组间比较采用卡方检验或Fisher精确检验进行，检验水准α=0.05。雌激素受体基因型频率经Hardy-Weinberg遗传平衡检验，样本中各基因型频率已达遗传平衡，具有较好的群体代表性。

2 结果

2.1 研究对象一般资料

回族患者80例，其中男性51例，女性29例，年龄在40～69岁，平均年龄(54.30±7.26)岁；撒拉族患者80例，其中男性58例，女性22例，年龄在42～69岁，平均年龄(54.70±7.21)岁。回族健康者80例，其中男性49例，女性31例；年龄40～69岁，平均年龄(53.03±6.98)岁；撒拉族健康者80例，其中男性45例，女性35例；年龄40～69岁，平均年龄(52.34±7.29)岁。四组研究对象性别构成经卡方检验(χ2=4.783，P=0.188)性别构成比例无统计学差异；四组研究对象年龄均值经单因素方差分析(F=1.871，P=0.134)年龄没有统计学差异。

2.2 限制性酶切片段长度多态性结果

ERα基因PvuⅡ的酶切结果用P和p表示，PvuⅡ内切酶位点多态性电泳结果为PP(CC型)：1374bp一个条带；pp(TT型)：936 bp、438 bp两个条带；Pp(CT型)：1374 bp、936 bp、438 bp三个条带(图1)。同理ERα基因XbaⅠ内切酶位点多态性电泳结果为XX(GG型)：1374 bp一个条带；xx(AA型)：981 bp、393 bp两个条带；Xx(AG型)：1374 bp、981 bp、393 bp三个条带(图2)。ERβ基因AluI酶切结果为aa(GG型)：307 bp一个条带；AA(AA型)：242 bp、65 bp两个条带；Aa(AG型)：307 bp、242 bp、65 bp三个条带(图3)。ERβ基因Rsal酶切结果为rr(GG型)：156 bp一个条带；RR(AA型)：110 bp，46 bp两个条带；Rr(AG型)：156 bp，110 bp，46 bp三个条带(图4)。图1至图4中，M均为DNA相对分子质量标准。

图1 ERα基因PvuⅡ的酶切鉴定结果

Figure 1 Restriction enzyme digestion bands of ERα gene Pvu II

图2 ERα基因XbaⅠ的酶切鉴定结果

图3 ERβ基因AluⅠ的酶切鉴定结果

图4 ERβ基因RsaⅠ的酶切鉴定结果

2.3 雌激素受体基因多态性统计结果

回族人群中，胃癌组和对照组的Erα-Xba I(XX，Xx，xx)基因分布概率在1%水平上存在显著性差异(χ2=34.800，P=0.000)；胃癌组中XX基因型占比为60%，而对照组中XX基因型占比为15%；胃癌组和对照组的Erα-Pvu II(PP，Pp，pp)、ERβ-Rsa l(RR，Rr，rr)、Erβ-Alu I(AA，Aa，aa)基因分布概率均无显著性差异(表1)。

表1 回族人群胃癌组与对照组不同基因型对比结果(%)

Table 1 Comparison of different genotypes in the gastric cancer group and control group

撒拉族人群中，胃癌组和对照组的Erα-Xba I(XX，Xx，xx)基因分布概率在1%水平上存在显著性差异(χ2=10.902，P=0.004)；胃癌组中XX基因型比例为46.25%，而对照组中XX基因型比例为22.5%；胃癌组和对照组的Erα-Pvu II(PP，Pp，pp)、ERβ-Rsa l(RR，Rr，rr)、Erβ-Alu I(AA，Aa，aa)基因分布概率均无显著性差异(表2)。

表2 撒拉族人群胃癌组与对照组不同基因型对比结果(%)

Table 2 Comparison of different genotypes in the gastric cancer group and control group

2.4 胃癌病人中不同民族雌激素受体基因多态性比较结果

胃癌组中回族和撒拉族ERα-XbaⅠ、ERα-PvuⅡ、ERβ-RsaⅠ、Erβ-AluⅠ基因型分布无显著性差异(表3)。

表3 胃癌病人中不同民族基因型表达的对比结果(%)

Table 3 Comparison amongthe genotypes in patients with gastric cancer in different nationalities(%)

续表：

基因型胃癌患者回族撒拉族χ2PERβ-RsalRR7(8.75) 6(7.50) Rr40(50.00)39(48.75)0.1480.928rr33(41.25)35(43.75)Erβ-AluIAA3(3.75) 5(6.25) Aa22(27.50)24(30.00)0.7560.703aa55(68.75)51(63.75)

3 讨论

雌激素受体(ER)属于核受体超家族成员之一，通过与雌激素结合发挥其生物学效应[2]。ER包括α和β两种亚型。目前国内外许多研究均已证明ERα基因和ERβ基因SNPs与乳腺癌、原发性肝癌、子宫内膜癌、骨质疏松症和多发性硬化病等多种疾病相关[3-10]。本研究通过对青海地区回族、撒拉族胃癌组和对照组ERα基因PvuⅡ和XbaⅠ，ERβ基因RsaⅠ和AluⅠ单核苷酸多态性(SNPs)分布情况进行对比，分析等位基因型、各基因型及单倍体型特征，揭示ERα基因和ERβ基因SNPs与胃癌的关系。

在回族胃癌组与健康组对比、撒拉族胃癌组与健康组对比均提示胃癌组和对照组ERα-XbaⅠ基因XX、Xx、xx分布存在显著性差异；不同民族胃癌组和对照组ERα-PvuⅡ、ERβ-RsaⅠ、ERβ-AluⅠ基因型分布均无显著性差异。既往有很多研究探讨了ER基因多态和胃癌相关性，但结果不尽相同[11-16]。本研究结果显示，ERα基因XbaⅠ的多态性分布与胃癌易感性有显著相关性，且ERα-XbaⅠ基因分布可能增加了罹患胃癌的危险度；在胃癌组中检测到较对照组多的XX基因型比例，此研究结果与先前研究基本类似。目前有关ERβ基因多态性与胃癌相关的研究报道较少。有研究发现，胃腺癌组织中ERβ的表达水平较癌旁正常胃黏膜下降[17]。但本研究结果显示胃癌组和对照组Erα-PvuⅡ、ERβ-RsaⅠ、Erβ-AluⅠ基因型分布均无显著性差异。

胃癌组中回族和撒拉族ERα-XbaⅠ、ERα-PvuⅡ、ERβ-RsaⅠ、Erβ-AluⅠ基因型分布没有显著性差异。在所研究区域不同民族之间胃癌发病率的研究仍无明确的流行病学调查资料，且该研究资料无大样本的随机人群抽样，尚不能说明民族因素与胃癌发病率之间的关系；本研究表明青海地区不同民族胃癌患者之间ER基因多态性无显著差异，但民族是否是影响胃癌发生的独立影响因素尚不足以证明。

以上研究结果提示，ERα-XbaⅠ基因分布可能增加了罹患胃癌的危险性，但在胃癌人群中不同民族之间基因型分布无显著性差异。因此，该基因型可作为胃癌高发地区人群胃癌发生危险因素的筛选指标。但仍需大样本、多中心研究。

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Research on the gene polymorphism of estrogen receptor of Hui and Salar patients with gastric cancer in Qinghai area

Wang Cheng，Zhao Yanfang，Wang Hu，Xie Yanchao

(Department of Gastrointestinal Surgery，QinghaiUniversityAffiliated Hospital，Xining，Qinghai 810001，China)

Objective This article aims to study the distribution situation of ERα-PvuⅡ and XbaⅠ，ERβ-RsaⅠand AluⅠsingle nucleotide polymorphism(SNPs)；and the relationship between the SNPs of ERα gene and ERβ gene in the patients with gastric carcinoma among Hui and Salar people in Qinghai area.Methods 80 cases of Hui patients and 80 cases of Salar patients with gastric adenocarcinoma as case group and 80 cases of health group with matched age，gender and nationality were collected from QinghaiUniversityAffiliatedHospital.2～3 mL venous blood in fast state was collected from each patient to extract DNA.PCR-RFLP method was applied to identify PvuⅡ and XbaⅠ of ERα gene，RsaⅠand AluⅠSNPs of ERβ.Statistics method was adopted to analyze the relations between PvuⅡ and XbaⅠof ERα gene，RsaⅠ and AluⅠ SNPs of ERβ gene with the risk of having gastric cancer.Results In terms of in Hui gastric cancer group and control group，significant difference exists in ERα-XbaⅠgene XX，Xx and xx distribution；in terms of Salar gastric cancer group and control group，significant difference exists in ERα-XbaⅠ gene XX，Xx and xx distribution；in terms of gastric cancer group and control group of Hui people and Salar people，no significant difference was found in ERα-PvuⅡ，ERβ-RsaⅠ，and Erβ-AluⅠ gene distribution.Among the research subjects，no significant difference was found between the gene distribution of gastric cancer group and Salar ERα-XbaⅠ，ERα-PvuⅡ，ERβ-RsaⅠ，and Erβ-AluⅠ.Conclusions Correlation exists in the ERα-XbaⅠpolymorphism and the susceptibility of gastric cancer in Qinghai area；the ERα-XbaⅠgene distribution may has increased risk of gastric cancer，but no significant difference was found on the gene distribution of people with gastric cancer among different nationalities.The ERα-PvuⅡ，ERβ-AluⅠ，and RsaⅠpolymorphism were not correlated to the susceptibility of gastric cancer in Qinghai area.

Gastric cancer Estrogen receptor Susceptibility Gene Polymorphism

*：青海省科技厅自然科学基金项目(2012-Z-726) 王 成(1971～)男，汉族，甘肃籍，副主任医师

R735.2

A

10.13452/j.cnki.jqmc.2016.01.005

2015-11-12