益气合剂对免疫受抑大鼠免疫功能的影响

马 锦，杨如意

(青海大学医学院，青海 810001)

益气合剂对免疫受抑大鼠免疫功能的影响

马 锦，杨如意

(青海大学医学院，青海 810001)

目的 研究益气合剂对免疫受抑大鼠的免疫调节作用。方法 腹腔注射环磷酰胺建立免疫受抑大鼠模型。测定模型大鼠血清IgG、IgA、IgM含量，IL-2生成能力，胸腺指数与脾脏指数等免疫指标，评价益气合剂免疫调节作用。结果 益气合剂组大鼠血清IgG、IgM、IgA的含量，IL-2的生成能力及胸腺指数、脾脏指数与模型组比较明显升高(P<0.05)。结论 益气合剂能增强免疫受抑大鼠的免疫功能。

益气合剂 免疫功能 大鼠 影响

免疫功能低下可出现免疫细胞发育、分化、增生、调节和代谢异常，临床表现为易反复感染、自身免疫现象和某些肿瘤的发生率增高。现代研究表明补益类中药有一定的免疫增强作用，能够有效地调节机体免疫平衡[1-2]。益气合剂是青海大学附属医院中医科的临床经验方，具有益气健脾、温阳补肾的功效。相关研究表明益气合剂对脾气虚证模型大鼠有免疫调节作用，且能改善癌症肿瘤放、化疗后的不良反应，对免疫功能似有提升效应[3-4]。本研究通过观察益气合剂对大鼠免疫功能的影响，初步探讨其作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物

清洁级wistar大鼠，雌雄各半，50只，8～10周龄，体重180～220克，由甘肃中医学院提供，动物许可证号为SCXK(甘)2013-0002。

1.1.2 药物

益气合剂：将党参20 g、麦冬9 g、五味子6 g、黄精10 g、淫羊藿9 g分两次煎煮，第一次加蒸馏水1500 mL，煎煮2 h，第二次加蒸馏水500 mL，煎煮1 h，合并两次滤液，纱布过滤，水浴蒸发制成。将益气合剂制成高剂量(12.6g/kg )、中剂量(6.3g/kg )、低剂量(3.2g/kg)制剂 。

环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：14031325)。

1.1.3 试剂和仪器

RaT IL-2 ELISA kit试剂盒(批号为L141105156，武汉优尔生商贸有限公司)。DNM-9602酶表分析仪(北京普朗新技术有限公司)。TS-100恒温混匀仪(杭州瑞诚仪器有限公司)。 RE-3000型旋转蒸发仪( 上海亚荣生化仪器厂)。HH-6数显电子恒温水浴锅( 常州国华电器有限公司)。FA1004B型电子天平( 上海佑科仪器仪表有限公司)。 TG16-WS台式高速离心机( 湖南湘仪实验仪器开发有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 动物分组及给药方法

将50只大鼠，随机分平均为空白组、模型组、益气合剂高剂量组、益气合剂中剂量组、益气合剂低剂量组，在实验过程中，死亡12只，判断造模成功与否用去8只，实际每组6只。空白组和模型组给予生理盐水(3mL/只·天)灌胃；益气合剂高、中、低剂量组分别给予益气合剂高、中、低剂量水煎剂(3mL/只·天)灌胃；除空白组，其余各组在灌胃前3 d，在给药1 h后，给予环磷酰胺造模，即腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg[5]。均自由饮食，共计14 d。

1.2.2 造模成功指标[6]

实验第7 d，在空白组与模型组中，每组随机抽取4只大鼠，进行造模指标的判断。一般症状：有不同程度腹泻，甚至肛脱，毛色晦暗发黄，毛发扎堆直立，活动量少，群聚抱团，精神萎靡，食欲不振。模型指标：称取大鼠体重后处死，无菌条件下取脾脏、胸腺，剥去脾脏、胸腺上的杂质，生理盐水冲洗，用滤纸吸去多余水分，电子称称重，计算脾脏指数( 脾脏湿重/体重×10)和胸腺指数 ( 胸腺湿重/体重×10)。

造模结束后，于实验第七天，分别在空白对照组及造模组中各随机抽取4 只大鼠测定体重、脾脏指数、胸腺指数，详见表1。

组别动物数体重(g)脾脏指数胸腺指数空白组4194.75±13.5722.23±1.2512.189±2.19模型组4168.50±7.3315.01±1.744.88±0.57t-3.4046.7506.453P-<0.05<0.01<0.01

表1显示，模型组大鼠体重减轻，与空白组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；模型组脾脏指数及胸腺指数明显下降，与空白组比较，差异有显著性差异(P<0.01)。

1.2.3 取材方法

灌胃14 d，禁食12 h后，称取大鼠体质量，给予5%乌拉坦进行腹腔麻醉，腹主动脉取血5 mL，室温放置2 h，然后离心(3000r/min)10 min，取上清液，分装于1 mLEP管中，-80 ℃保存。无菌条件下再分别剖取大鼠胸腺与脾脏，用滤纸吸干残血，于分析天平称取脏器质量。

1.2.4 大鼠血清IgG、IgA、IgM含量及IL-2含量的测定方法[7]

取分装于EP管的血清1 ml，用ELISA法测定IL-2的含量，剩余血清用全自动生化分析仪(透射比浊法)测定IgG、IgM、IgA的含量。

1.2.5 大鼠胸腺指数与脾脏指数测定方法

胸腺指数=胸腺重量/大鼠体重×10，脾脏指数=脾脏重量/大鼠体重×10，计算指数。

1.2.6 统计学方法

2 结果

2.1 一般症状

造模第二天，除空白组，其他各组大鼠厌食、大便溏稀、活动减少、反应迟钝、卷曲拱背，一周后，除正常组，其他各组大鼠都有不同程度腹泻，甚至肛脱症状，毛色晦暗发黄，毛发扎堆直立，活动量少，群聚抱团，精神萎靡，食欲不振，益气合剂低剂量组有死亡现象。

2.2 对大鼠IgG、IgA、IgM含量影响

空白组与模型组比较，模型组各指标含量明显降低(P<0.05)，说明造模成功；益气合剂高、中、低剂量组与模型组比较，各指标含量明显升高(P<0.05)；益气合剂高剂量组与中剂量组比较，IgA含量明显升高(P<0.05)；益气合剂高剂量组与低剂量组比较，IgG、IgA、IgM含量明显升高(P<0.05)；益气合剂中剂量组与低剂量组比较，IgG、IgM含量明显升高(P<0.05)，详见表2。

组别动物数IgAIgGIgM空白组60.216±0.0201.753±0.2220.452±0.041模型组60.162±0.011*1.148±0.130*0.199±0.022*益气合剂高剂量组60.207±0.015#★▲1.703±0.139#▲0.380±0.015#▲益气合剂中剂量组60.188±0.013#1.734±0.171#▲0.375±0.055#▲益气合剂低剂量组60.184±0.014#1.455±0.281#0.284±0.091#F- 11.821 10.363 21.210P- <0.05 <0.05 <0.05

注：*与空白组比较P<0.05，#与模型组比较P< 0.05，★与益气合剂中剂量组比较P<0.05，▲与益气合剂低剂量比较P<0.05.

2.3 对大鼠脏器指数和IL-2的影响

空白组与模型组比较，模型组脏器指数和IL-2的含量明显降低(P<0.05)，说明造模成功；益气合剂高剂量组与模型组比较，各指标明显升高(P<0.05)；益气合剂中剂量组与模型组比较，脾脏指数和胸腺指数明显升高(P<0.05)；益气合剂低剂量组与模型组比较，各指标无统计学意义(P>0.05)；益气合剂高剂量组与中剂量组比较，胸腺指数和IL-2含量明显升高(P<0.05)，益气合剂高剂量组与低剂量组比较，各指标明显升高(P<0.05)；益气合剂中剂量组与低剂量组比较，脾脏指数明显升高(P<0.05)，详见表3。

组别动物数胸腺指数(g/l)脾脏指数(g/l)IL-2(pg/ml)空白组610.309±1.20020.077±2.78228.45±4.90模型组66.155±1.938*14.796±1.836*19.44±1.41*益气合剂高剂量组610.165±0.656#★▲20.183±2.185#▲27.66±2.18#★▲益气合剂中剂量组68.380±1.506#19.895±0.981#▲22.30±3.56益气合剂低剂量组67.399±1.50916.346±2.63522.64±4.17F- 9.415 7.988 7.229P- <0.05 <0.05 <0.05

注：*与空白组比较P<0.05，#与模型组比较P<0.05，★与益气合剂中剂量组比较P<0.05，▲与益气合剂低剂量比较P<0.05.

3 讨论

免疫功能低下的最大特点是易反复感染且难以治愈，患者易感的外源性病原体种类主要取决于免疫系统受损的组分：体液免疫、吞噬细胞或补体缺陷患者易患细菌性感染，细胞免疫缺陷患者易发生病毒、真菌及原虫等胞内寄生性感染，另外病原体感染也可影响特异性和非特异性免疫功能，如HIV所致获得性免疫缺陷综合征。免疫功能低下患者也易发恶性肿瘤和自身免疫病，西医治疗以“补充和替代治疗”为主，通过补充各种免疫分子(如胸腺肽、转移因子、免疫球蛋白等)，以提高机体免疫功能。

环磷酰胺通过与细胞DNA的烷化反应产生破坏力，特别是对增殖分化较快的骨髓造血组织、淋巴组织、生殖细胞等破坏作用明显，因而具有抑制免疫和造血的作用[8]。实验研究方面，环磷酰胺能使小鼠脾脏、胸腺萎缩，碳廓清吞噬功能降低，NK细胞活性降低，血清溶血素含量降低，降低耳肿胀度及小鼠脾脏 T 淋巴细胞的增殖反应，对非特异性免疫和特异性免疫均有抑制作用[9]。本实验中，模型组与正常组比较有差异性(P<0.05)，可以说明环磷酰胺能导致大鼠体内IgG、IgA、IgM含量、IL-2含量及脾脏指数、胸腺指数降低。

IGA、IGG和IGM属于体液免疫，IGA作为体液中抗体，对抑制病原菌的吸附侵入起重要作用，具有重要的自然被动免疫功能。IGG具有抗细菌、抗病毒、抗毒素和主动免疫功能。IGM具有抗伤寒杆菌体及类风湿因子等功能，在感染早期作用更强，对机体免疫防护有重要作用。益气合剂各剂量组都能增加IgG、IgM、IgA的含量(P<0.05)，高剂量组IgA含量优于中、低剂量组(P<0.05)，但是中低剂量组之间无统计学意义(P>0.05)，高、中剂量组IgM、IgG含量优于低剂量组(P<0.05)，但是高、中剂量组之间无统计学意义(P>0.05)，说明益气合剂能升高IgG、IgM的含量，且以高、中剂量为佳，也能升高IgA含量，且以高剂量为最佳。

胸腺与脾脏属于重要的免疫器官，其脏器指数可在一定程度上反应机体免疫功能的强弱，胸腺主要产生T淋巴细胞，主要参与细胞免疫，脾脏主要储存大量淋巴细胞和巨噬细胞，B细胞比例较大，主要参与体液免疫。益气合剂高、中剂量组脾脏指数、胸腺指数明显优于模型组(P<0.05)，益气合剂低剂量组脾脏指数、胸腺指数与模型组比较，无显著性差异(P>0.05)，高剂量组胸腺指数优于中、低剂量组(P<0.05)，但中、低剂量组比较无差异(P>0.05)，高、中剂量组脾脏指数优于低剂量组(P<0.05)，但高、中剂量组比较无差异(P>0.05)。

IL-2作为一种淋巴因子，能使细胞毒性T细胞、自然杀伤细胞和淋巴因子活化的杀伤细胞增殖，增强杀伤活性，促进淋巴细胞分泌抗体和干扰素，具有抗肿瘤、抗病毒和增强免疫功能的作用[10]。益气合剂中、低剂量组IL-2含量与模型组比较，无显著差异(P>0.05)，益气合剂高剂量组IL-2含量优于模型组和中、低剂量组(P<0.05)。

中医理论中，正虚邪胜或正邪两衰，属于免疫力低下，用扶正的方法，可扶正祛邪，最终达到阴平阳秘的状态。党参健脾补肺、益气生津，能使碳粒廓清速率及胸腺指数和脾脏指数均明显高于模型组，能减轻环磷酰胺对小鼠免疫功能的抑制作用[11]。五味子收敛固涩，益气生津，宁心安神，可显著提高正常小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，促进溶血素和溶血空斑形成，促进淋巴细胞转化[12]。淫羊藿补肾壮阳，祛风除湿，强筋键骨，能增强NK细胞的细胞毒活性和ConA诱导小鼠T淋巴细胞的转化活性，能增强脾细胞IL-2的产生，并降低CD8阳性细胞百分率，CD4/CD8阳性细胞细胞百分率显著提高[13]。黄精补气养阴，健脾，润肺，益肾，能提高免疫抑制小鼠的脏器和溶血素指数，高剂量组血清中SOD活性恢复显著，MDA水平显著降低，达到或超过了正常小鼠水平，小鼠吞噬能力也有所提高，一定程度上缓解了炎症[14]。麦冬养阴生津，润肺清心，能增加CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平，能抑制白细胞减少，减轻恶心、呕吐等化疗副反应，稳定KPS评分和体质量，提高生活质量[15]。五药配伍，气血阴阳并补，肺脾肾兼顾，旨在共达益气养阴，滋补肝肾之功，可达到增强免疫功能的作用。

本研究显示，益气合剂能增强免疫功能低下大鼠的免疫功能，与模型组比较，IGG、IGM、IGA、IL-2、脾脏指数和胸腺指数均有所提高(P<0.05)；说明益气合剂通过对机体细胞特异性免疫、体液特异性免疫及免疫器官等作用，从而增强机体免疫功能。因此，益气合剂可以做为免疫增强剂应用于临床，但其对非特异性免疫的作用及增强免疫功能的机制，需做进一步研究。

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The effect of yiqi mixture on immune function of immunosuppressed rats

Ma Jin，Yang Ruyi

(Qinghai University Medical college，Qinghai，Xining，810001)

Objective To study the effect of YiQi Mixture on immune function of immunosuppressed rats.Methods The immunosuppressed model was established by intraperitoneal injecting of cyclophosphamide in rats.serum IgG，IgM and IgA，IL-2 production capacity，spleen index and thymus index were detected afteradministrating YiQi Mixture.Results Serum IgG，IgM，IgA and IL-2，the spleen index and thymus index in therapeutic group of YiQi Mixture were raised compared those with the model group.Condusion The YiQi Mixture can improve the immune function of immunosuppressed rats.

YiQi Mixture Immune Function Rat Effect

R363.1

A

10.13452/j.cnki.jqmc.2016.01.010

2015-10-10

马 锦(1990～)，女，回族，青海籍，2013级科学班研究生