右归丸调节肾阳虚垂体-靶腺轴功能的动态变化

张磊，廖成彬，黄榕波，马娜，唐小娅，王秀凤

(广东药学院 基础学院，广东 广州 510006)



右归丸调节肾阳虚垂体-靶腺轴功能的动态变化

张磊，廖成彬，黄榕波，马娜，唐小娅，王秀凤

(广东药学院 基础学院，广东 广州 510006)

摘要:目的 探究右归丸调节肾阳虚过程中垂体-靶腺轴功能的动态变化规律。方法 SD大鼠90只随机分为3组：正常组、模型组、右归丸组；分别测定3个组早、中、晚期垂体-甲状腺轴生物分子[促甲状腺激素(TSH),三碘甲腺原氨酸(T3),四碘甲腺原氨酸(T4)]、垂体-肾上腺轴生物分子[促肾上腺皮质激素(ACTH) 和 皮质醇(CORT)]以及垂体-性腺轴生物分子[黄体生成素(LH),促卵泡激素(FSH),睾酮(T) ]的含量，利用成组比较及因子分析方法探究右归丸调节肾阳虚时垂体-靶腺轴功能的动态变化规律。结果 右归丸调节肾阳虚的早中晚3个时期除LH和ACTH外，垂体-靶腺轴其余生物分子指标值均随着用药时间增加而逐渐增大且差异有统计学意义；右归丸组因子分析结果表明：早期主调控因子主要包括靶腺层生物分子，中期增加了1个垂体层生物分子，晚期增加了2个垂体层生物分子。结论 右归丸调节肾阳虚相对西药是一个较为缓慢长期的过程；右归丸调节肾阳虚过程中首先对靶腺层起作用，进而反馈到垂体层。

关键词:右归丸； 肾阳虚； 垂体-靶腺轴； 因子分析

肾阳虚伴有机体广泛的病理生理变化[1-3]，下丘脑-垂体-靶腺轴多个激素指标出现异常变化[4-5]，机体功能低下或紊乱。右归丸出自《景岳全书》是一首温补肾阳、填精养血的常用方具有温补肾阳、填精益髓之功效[6]，是治疗肾阳虚的经典复方。

在课题组前期对右归丸的药效及肾阳虚大鼠垂体-靶腺轴功能的研究[7-13]基础上发现右归丸是整体、多靶点、动态的调节机体，因此本研究选取垂体-靶腺轴(甲状腺、肾上腺、性腺)8个激素指标，通过建立分时期的肾阳虚大鼠模型，同时利用统计学方法阐释右归丸对肾阳虚的动态整体的调节作用。

1材料与方法

1.1主要试剂

TSH(促甲状腺激素)、T3(三碘甲腺原氨酸)、T4(四碘甲腺原氨酸)、LH(黄体生成素)、FSH(促卵泡激素)、T(睾酮)、ACTH(促肾上腺皮质激素)和CORT(皮质醇)放射免疫试剂药盒由北京北免东雅生物技术研究所提供。

1.2动物及分组

雄性SD大鼠，体质量220～250 g，广东省实验动物中心提供，生产许可证号SCXK(粤)2008-0002。购进后，适应环境5 d，随机分为正常组、肾阳虚模型组、右归丸组3组，每组30只，共90只。

1.3动物造模及处理[5]

①正常组：0.9%的生理盐水0.3 mL后肢肌肉注射，每天1次。自由饮水、饮食，连续29 d；②肾阳虚大鼠模型复制：醋酸可的松混悬液充分混匀。按2.5 mg/100 g后肢肌肉注射，每天1次。自由饮水、饮食,连续29 d； ③右归丸组:分别在肾阳虚大鼠模型复制后8 d起给予右归丸灌胃，给药容积1.0 mL/100 g。每天1次。自由饮水、饮食,连续29 d；④处理：采取毒理实验常用的方法即分批宰杀。为了获得动态可靠的实验数据，对动物采取平行处理，即3组动物分别在第15天(10只)、第23天(10只)、第30天(10只)处死；取血清用放免法检测TSH、T3、T4； ACTH、CORT、 FSH、LH、T。

1.4统计学方法

近几年，随着科学技术的提高，科学技术在农业领域的应用也在逐渐的提高，尤其是在农作物的栽培技术研究中。茄子是茄科茄属一年生草本植物，其营养价值高，不仅能帮助维持人体酸碱平衡，多吃还有抗癌的保健功效。茄子在种植的过程中由于栽培技术的局限，其产量和质量都难以满足人们的需求，故此，通过日光温室栽培技术提高茄子的产量和质量，满足人们的日常需求，促进农业经济作物的健康良性发展。

① 成组比较：对正常组、模型组及右归丸组的早、中、晚3个时期的垂体-靶腺轴生物分子的指标值进行成组比较，验证分时期的肾阳虚造模是否成功以及右归丸的药效及动态起效过程；②因子分析：因子分析是多元统计分析中的一个重要内容，其基本思想就是根据变量内部的相关性大小对变量分组，使组内变量间高相关、组间变量间低相关[14]，得到的每一组组合的变量称为公共因子，结合所研究问题的相关背景知识可以来分析每个公共因子的实际意义。本研究对右归丸药方组早、中、晚3个时期垂体-靶腺轴生物分子指标值进行因子分析，了解各生物分子之间相关关系的变化。通过主成分所占比重探讨右归丸在肾阳虚的不同时期对哪些生物分子作用大，进而阐释右归丸的动态作用机制。

采用SPSS 20.0统计软件进行成组比较及因子分析。在因子分析过程中利用主成分法进行因子提取，利用最大方差旋转法进行因子旋转，并将正交旋转后的因子载荷矩阵作为提取公共因子的依据。

2结果与分析

2.1正常组、模型组、右归丸组早、中、晚3个时期垂体-靶腺轴激素指标值的变化

结果见表1。模型组垂体-靶腺轴8个激素指标随造模时间增加不断下降，尤其是模型组晚期指标值下降明显，模型组与正常组之间以及除垂体-甲状腺轴3个激素早、中期外，模型组不同时期之间指标值差异均有统计学意义(P<0.01)，说明本实验造模成功，且肾阳虚早、中、晚3个时期分割效果好；右归丸组不同时期的指标值与模型组比较差异有统计学意义(除FSH早、中期外)，提示右归丸有效。同时右归丸组指标值随着用药时间的增加逐渐增大(除LH、ACTH外)，并且右归丸组不同时期指标值之间差异有统计学意义(P<0.01)，说明右归丸起效是一个相对缓慢长期的过程。

2.2右归丸组早、中、晚3个时期因子分析结果及分析

结果见表2。按照因子载荷值的大小将关联程度分为3个层次，当因子载荷值小于0.4时，认为该生物分子与此公共因子关联程度较弱；当因子载荷值大于0.6时，认为该生物分子与所在公共因子关联程度较强；当因子载荷值处于0.4～0.6之间时，认为该生物分子与其所在的公共因子有一定关联[15]。根据此原则并结合表2，右归丸早、中、晚3个时期垂体-靶腺轴8个激素指标相关性分组见表3。

由表3可见右归丸调节肾阳虚的早、中、晚3个时期，取前3个公共因子的总方差贡献率均达到75%以上，即这3个公共因子可以在75%的程度上解释所有生物分子包含的全部信息。同时由于方差贡献率最大，因此称之为右归丸调节肾阳虚的主调控因子。右归丸调节肾阳虚的早期主调控因子包括T4、T、CORT，并且方差贡献率为32.49%，即主调控因子包括垂体-甲状腺轴，垂体-肾上腺轴及垂体-性腺轴的靶腺层生物分子，提示右归丸早期主要对靶腺层生物分子起作用。中期主调控因子包括T4、FSH、CORT，并且方差贡献率占32.78%，即中期主调控因子较之于早期增加一个垂体层生物分子；晚期主调控因子包括LH、T、ACTH、CORT，并且方差贡献率占40.74%，较之于早期增加2个垂体层生物分子，且主调控因子方差贡献率逐渐增大。

表1　正常组、模型组及右归丸组早、中、晚3个时期垂体-靶腺轴激素的指标值

同一指标同一时期，与正常组比较:△P<0.01，与模型组比较：▲P<0.01；同一指标同一组别，与早期比较：☆P<0.01，与中期比较：★P<0.01。

表2 右归丸组早、中、晚3个时期垂体-靶腺轴8个激素指标正交旋转后的因子载荷矩阵(取前3列)

Table 2Rotated component matrix of 8 hormones on pituitary-target gland axes in the YP group during the early,middle and late periods (the first 3 arrays)

时期指标f1f2f3早期TSH-0.290-0.8410.218T3-0.0980.8720.077T40.6600.4710.017LH0.152-0.1210.832FSH0.3650.3200.420T-0.780-0.1160.241ACTH-0.4130.0070.722CORT0.740-0.1840.405

续表2

注：各列中有下划线的因子载荷值对应的指标属于其所在的公共因子

表3右归丸组早、中、晚期垂体-靶腺轴8个激素指标相关性分组

Table 3Correlation grouping of 8 hormones on pituitary-target gland axes in the YP group during the early,middle and late periods

时期f1方差贡献率/%f2方差贡献率/%f3方差贡献率/%总方差贡献率/%早期T4TCORT32.49TSHT325.61LHACTHFSH17.7175.81中期T4FSHCORT32.78T3TACTH28.47TSHLH15.5176.77晚期LHTACTHCORT40.74TSHT330.98FSHT413.6685.38

3讨论

模型组大鼠早、中、晚3个时期垂体-靶腺轴激素指标值的变化表明这种分时期的肾阳虚大鼠模型构建成功。同时右归丸组大鼠早、中、晚3个时期垂体-靶腺轴激素指标值的变化显示右归丸调节肾阳虚是一个相对缓慢长期的过程。

从右归丸调节肾阳虚的早、中、晚3个时期的主调控因子可以看出，右归丸早期主要对靶腺层生物分子起作用，随着用药时间的增长逐渐反馈到垂体层。课题组前期研究发现垂体-肾上腺轴枢纽作用消失是肾阳虚发生的机制之一[12-13]。而右归丸调节肾阳虚的早、中期主调控因子包含垂体-肾上腺轴靶腺层生物分子CORT，晚期主调控因子包含了垂体-肾上腺轴垂体层和靶腺层的2个生物分子ACTH和CORT，提示在右归丸的调节下随着用药时间增加垂体-肾上腺轴的功能逐渐恢复。

本研究通过建立分时期的肾阳虚大鼠模型，利用右归丸调节肾阳虚，发现垂体-靶腺轴8个激素除LH、ACTH 2个垂体层激素外，其余激素均随用药时间增加而逐渐回升，可见右归丸调节肾阳虚是一个相对缓慢长期的过程。同时因子分析的结果提示右归丸调节肾阳虚的过程是先对靶腺层激素起作用，进而反馈到垂体层。后续研究将继续深入研究和挖掘右归丸调节肾阳虚时靶腺层对垂体层的反馈调节作用。

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(责任编辑：幸建华)

Dynamic changes of the pituitary-target gland axis function in the kidney yang deficiency modulated by Yougui pill

ZHANG Lei,LIAO Chengbin,HUANG Rongbo,MA Na,TANG Xiaoya,WANG Xiufeng

(BasicSchoolofGuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China)

Abstract:Objective To explore the change rule of the pituitary-target gland axis function in the kidney yang deficiency modulated by Yougui pill (YP). Methods 90 SD rats were randomly divided into three groups,including the normal group,the model group and the YP group. The model of kidney yang deficiency was established by intramuscular injection of cortisone. The values of the hormones in pituitary-thyroid axis (TSH,T3 and T4),pituitary-adrenal axis (ACTH and CORT) and pituitary-gonadal axis (LH,FSH and T) in rats were measured in the early,middle and late periods,respectively. The t-test and factor analyses were used to examine the change rule of the pituitary-target gland axis function in the kidney yang deficiency modulated by YP. Results The values of hormones,except LH and ACTH,on pituitary-target gland axes were significantly increased in the YP group during the early,middle and late periods. Master regulatory factors mainly contained the hormones of the target gland layer in the early period,one hormone of the pituitary gland layer was involved in the middle period,and two hormones of the pituitary gland layer were involved in the late period. Conclusion YP treatment shows a slow process in modulation of kidney yang deficiency,which first affect the target gland layer and then feed back to the pituitary gland layer.

Key words:Yougui pill; kidney yang deficiency; pituitary-target gland axis; factor analysis

DOI:10.16809/j.cnki.1006-8783.2015110401

中图分类号:R285.5

文献标志码:A

文章编号:1006-8783(2016)01-0102-05

作者简介：张磊(1979—)，男，硕士，实验师，主要从事生物系统数据挖掘研究工作，Email:zhanglei.st@163.com；通信作者：王秀凤(1980—)，女，硕士生导师，副教授，主要从事生物系统与数据挖掘研究，Email:wxfsnow8012@126.com。

基金项目：国家自然科学基金项目(81403153)

收稿日期：2015-11-04

网络出版时间：2016-01-15 14:26网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160115.1426.002.html