HPLC法测定延肾胶囊中川芎嗪的含量

杨丽铃，冯　兵



HPLC法测定延肾胶囊中川芎嗪的含量

杨丽铃，冯兵

[摘要]目的建立延肾胶囊中川芎嗪的含量HPLC测定方法。方法检测院内制剂延肾胶囊中川芎嗪的含量。采用Symmetry C-18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相为甲醇-醋酸铵（PH＝8.6）-四氢呋喃缓冲液（20∶75∶5），检测波长为285 nm，流速1.0 m1/min。结果川芎嗪在2.0～40.0 μg/m1范围内呈良好线性关系，r＝0.9996（n＝6），平均回收率为100.70%，RSD＝1.62%。结论高效液相色谱法能够准确测定延肾胶囊中川芎嗪的含量，该法操作简单，重现性好，可用于该制剂的含量测定和质量控制。

[关键词]延肾胶囊；川芎嗪；含量测定；高效液相色谱法

延肾胶囊是本院研制的院内制剂，其主要由川芎、三七、黄芪、淫羊藿、当归、生地等8味中药饮片组方而成，具有活血化瘀、益气固肾、利水渗湿等功效，临床主要用于治疗慢性肾炎、慢性肾功能衰竭1～3期、急性肾功能衰竭恢复期[1-2]。为了控制延肾胶囊的质量标准，参考有关文献[3-6]，本研究建立了高效液相色谱仪测定延肾胶囊中的川芎嗪含量方法，该法准确可靠，重现性好。

1　仪器与试剂

1.1仪器高效液相色谱仪（Agi1ent 1100，美国）；SQP电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；PHS-3C型PH计（上海智光仪器仪表有限公司）；KQ- 4200超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；HSG-C-4电热恒温水浴锅（上海仪表供销有限公司）1.2试剂盐酸川芎嗪对照品（中国药品生物制品鉴定所批号，130926-200305）；甲醇（美国TEDIA，色谱纯），醋酸铵（成都市科龙化工试剂厂），乙醇（重庆川东化工有限公司化学试剂厂）；延肾胶囊（本院自制，批号141101）；超纯水（自制）。

2　方法与结果

2.1溶液制备

2.1.1对照品溶液制备精密称取盐酸川芎嗪对照品10 mg置于10 m1容量瓶中，用甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，作为储备液（浓度1.0 mg/m1）。再精密量取该储备液1 m1置于10 m1容量瓶中，用甲醇稀释至刻度作为对照品溶液（浓度0.1 mg/m1）。

2.1.2供试品溶液制备精密称取胶囊内容物约0.5 g，置于100 m1具塞锥形瓶中，加入甲醇50 m1，放置过夜后超声处理1 h，摇匀滤过，取残渣按上述方法再提取2次，合并滤液。加入1 mo1/L的盐酸甲醇溶液适量，调PH至2.0，置于60℃恒温水浴箱蒸干，残渣加10 m1甲醇使之溶解，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

2.1.3阴性对照溶液制备取不含川芎的延肾胶囊其他各味药材，按处方工艺混匀制备不含川芎的延肾胶囊样品，按“2.1.2”项中的方法，制备阴性对照溶液。

2.2色谱条件色谱柱：Symmetry C-18（150 mm× 4.6 mm，5 μm）色谱柱；流动相：甲醇-醋酸铵（PH＝8.6）-四氢呋喃缓冲液（20∶75∶5）；流速1.0 m1/min；检测波长285 nm；柱温：30℃，进样量：10 μ1。在此色谱条件下，进行系统适应性试验，结果显示阴性对照品溶液在川芎嗪出峰处未检测出峰（图1）。

图1　川芎嗪系统适应性HPLC色谱图A：对照品；B：供试品；C：阴性对照

2.3线性关系考察精密量取对照品溶液0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、4.0 m1，分别置于6个10 m1容量瓶中，加甲醇稀释定容至刻度。取上述各溶液10 μ1注入高效液相色谱仪，照“2.2”项下方法测定，以峰面积（Y）对盐酸川芎嗪对照品浓度（X）进行线性回归，得回归方程为y＝2005x-148.9（r＝0.9996，图2），结果表明盐酸川芎嗪在2.0～40.0 μg/m1范围内呈良好线性关系。

图2　盐酸川芎嗪标准曲线

2.4精密度试验取盐酸川芎嗪对照品溶液，按照“2.2”项下方法连续测定6次，记录色谱图。结果RSD为1.12%，说明该法精密度良好，符合仪器分析要求。

2.5稳定性试验取供试品溶液，在室温下分别放置0、2、4、6、8、12 h后进样测定含量，结果RSD为1.65%，说明供试品溶液在12 h内稳定。

2.6重复性试验取延肾胶囊样品按“2.1.2”项处理，用“2.2”项色谱条件连续测定6次，记录峰面积，计算含量。结果川芎嗪平均含量为3.012 mg/g，RSD 为1.54%，表明该法重复性好。

2.7回收率试验取已知川芎嗪含量的延肾胶囊样品（批号为141101）约0.3 g，精密称量6份，用供试品制备方法制备溶液，分别精密加入川芎嗪对照品溶液0.2 m1，按“2.2”项色谱条件测定含量，计算回收率。结果见表1。

2.8含量测定精密称取3批延肾胶囊内容物，按溶液配制方法分别制备成供试品溶液，用“2.2”项色谱条件进样，记录峰面积，根据线性回归方程计算川芎嗪含量，结果显示3批样品的含量分别为1.346、1.258、1.303 mg。

3　讨论

延肾胶囊中含有8种中药材，为了避免其他物质干扰并测定川芎嗪的含量，因此实验中制备阴性对照溶液。前期预实验中，选取甲醇-醋酸铵（PH＝8.6）-四氢呋喃作为流动相，通过不断调节其比例，最终使峰形变窄对称，同时PH呈碱性能抑制生物碱电离，与其他成分顺利洗脱。盐酸川芎嗪在甲醇中易溶，加入盐酸甲醇溶液能够使游离的川芎嗪酸化，避免川芎嗪的损失。川芎嗪易升华，因此，在制备供试品溶液过程中，温度不宜过高，恒温水浴锅温度应控制在60℃左右。本实验建立了高效液相色谱法测定延肾胶囊中川芎嗪含量的方法，具有专属性强、灵敏度高、检测结果迅速而准确等特点，为延肾胶囊的质量控制和保证患者用药安全提供了可靠的参考依据。

【参考文献】

[1]袁发焕，李一标，光丽霞.延肾胶囊延缓残肾损伤的实验研究[J].中国现代医学杂志，2004，14（18）: 1-5.

[2]郭丽萍，袁发焕，张耀全.延肾胶囊对部分肾切除大鼠肾脏CB表达的影响[J].中国中西医结合肾病杂志，2006，7（3）: 143-145.

[3]王芳，石悦，曹健.高效液相色谱法测定延肾胶囊中淫羊藿苷含量[J].中国药业，2014，23（4）: 37-38.

[4]朱美晓，黄志芳，肖红斌，等.HPLC法测定川产道地药材川芎中川芎嗪的含量[J].药物分析杂志，2011，31（1）: 103-106.

[5]王世祥，王晓雯，高志娟，等.HPLC法测定活血胶囊中芍药苷、苦杏仁苷、川芎嗪和阿魏酸[J].中成药，2011，33（4）: 619-622.

[6]闫高颖，董娟妮，杨洋，等.HPLC法同时测定心脑康胶囊中6种成分[J].中成药，2013，35（8）: 1672-1675.

表1　样品回收率试验结果

Determination of tetramethy1Pyrazine content in Yanshen caPsu1e by HPLC

Yang Li1ing，Feng Bing

DePartment of NePhro1ogy，Xinqiao HosPita1 of the Third Mi1itary Medica1 UniVersity，Chongqing，400037，China

[Abstract]ObjectiVe To estab1ish a method for the determination of tetramethy1Pyrazine content in Yanshen caPsu1e by HPLC. Methods The content of tetramethy1Pyrazine in the three batches of Yanshen caPsu1e made by Xinqiao HosPita1 was detected. The chromatograPhic co1umn was Symmetry C-18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；the mobi1e Phase was the mixture of methano1-ammonium acetate（PH＝8.6）-tetrahydrofuran（20:75:5）；the detection waVe1ength was set at 285 nm，and the f1ow rate was 1.0 m1/min. Resu1ts The tetramethy1Pyrazine Presented a good 1inear re1ation within the range of 2.0-40.0 μg/m1（r＝0.9996，n＝6）. The aVerage recoVery was 100.70%with RSD of 1.62%. Conc1usion The HPLC method can accurate1y detect the content of tetramethy1Pyrazine in Yanshen caPsu1e. The method is simP1e and has good reProducibi1ity，which can be used for the content detection and qua1ity contro1 of Yanshen caPsu1e.

[Key words]Yanshen caPsu1e；tetramethy1Pyrazine；content determination；HPLC

收稿日期：（2015-05-17）

文章编号1004-0188（2016）02-0148-03

doi:10.3969/j.issn.1004-0188.2016.02.012

中图分类号R 285

文献标识码A

作者单位：400037重庆，第三军医大学新桥医院肾内科通讯作者：冯兵，E-mai1:fxb12@yahoo.com.cn