MMP－7在结肠癌侵袭转移中的作用及其意义

樊晓静　(新疆医科大学附属新疆维吾尔自治区中医院，新疆　乌鲁木齐　830000)



MMP－7在结肠癌侵袭转移中的作用及其意义

樊晓静(新疆医科大学附属新疆维吾尔自治区中医院，新疆乌鲁木齐830000)

〔摘要〕目的探讨不同分期结肠癌组织及其患者血清基质金属蛋白酶( MMP)－7的表达差异。方法采用蛋白质免疫印迹方法检测182例不同临床分期的结肠癌组织样本及30例癌旁组织样本，采用酶联免疫吸附法同时检测了这182例结肠癌患者外周血血清的MMP－7蛋白水平，分层分析MMP－7表达与其他临床参数的相关性，进一步分析MMP－7表达与患者5年无瘤生存预后的临床联系。结果结肠癌组织中MMP－7蛋白表达比较:Ⅳ期＞Ⅲ期＞Ⅱ期＞Ⅰ期，均明显高于癌旁组织MMP－7的表达( P＜0．01)，其中Ⅲ期结肠癌组织MMP－7表达显著高于Ⅱ期( P＜0．01) ;不同分期结肠癌患者的血清样本MMP－7阳性率比较:Ⅳ期＞Ⅲ期＞Ⅱ期＞Ⅰ期，与结肠癌组织MMP－7表达呈正相关( P＜0．05) ;血清MMP－7阳性与患者年龄、性别、肿瘤部位、病理类型和分化程度无明显相关性( P＞0．05) ;进一步生存分析示血清MMP－7阳性与患者5年无瘤生存显著相关，肿瘤分期和血清MMP－7是结肠癌患者5年无瘤生存的危险因素( P＜0．05)。结论MMP－7可能作为结肠癌临床诊断和分期的生物学标志物，具有预测结肠癌患者5年无瘤生存预后的重要临床价值，但该结论亟待进一步证实。

〔关键词〕MMP－7;结肠癌;转移;侵袭

Wnt/β－catenin信号通路的激活是结肠癌发生、发展过程中的重要环节〔1，2〕，基质金属蛋白酶( MMP)－7作为此通路中参与肿瘤侵袭转移的重要基因之一，具有破坏细胞外基质的生物学作用〔3〕。本研究通过检测不同分期结肠癌组织和患者血清中的MMP－7蛋白表达情况，以期明确MMP－7表达与结肠癌侵袭转移及其临床预后方面的意义。

1资料和方法

1. 1临床资料选取本院2009年7月至2011年6月收治并接受结肠癌根治术的182例患者作为研究对象，将相应成功配对的30例癌旁组织作为对照，均成功获得所有患者的外周血血清样本。本研究纳入的结肠癌及其癌旁组织均经术后病理组织检查明确诊断，同时依照TNM结肠癌临床分期标准将182例患者分为4组:Ⅰ组35例;Ⅱ组40例;Ⅲ组51例;Ⅳ组56例，患者KPS评分均在60～80分。4组不同分期结肠癌患者及对照组癌旁样本对应的人口统计学及临床病理参数等资料见表1。结肠癌患者或家属均签署知情同意书，并经本院伦理委员会批准。

1. 2蛋白质免疫印迹将来源于结肠癌根治术的结肠癌和癌旁组织样本放于液氮中保存，液氮研磨并经玻璃匀浆器处理后，用SDS蛋白裂解液处理并将收集到的上清转入EP管中－80℃保存，以备浓度测定。经BCA法标准曲线分析后获得不同样本的蛋白质浓度并计算上样体积，将loading buffer按比例混合和煮沸处理的蛋白样品等量加入到PAGE胶点样孔中，待指示线跑至底部时终止，转膜处理100 V，100 min后终止，三蒸水洗膜后用5%脱脂牛奶封闭(摇床1 h，室温)，随后加入一抗4℃过夜孵育(β－actin 1∶1 000，购于杭州联科生物有限公司; MMP－7 1∶1 000，购于德国Cell Signaling Technology公司)，复温20 min后洗膜，再加入用5% BSA稀释的二抗孵育，室温1 h，洗膜后化学发光，同时采用凝胶图像分析仪曝光和图像保存，灰度值用image J软件进行分析。

表1不同分期结肠癌人口统计学及其临床资料( n)

1. 3酶联免疫吸附法0．05 mol/L碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至5 μg/ml，每反应孔加0．1 ml，4℃过夜，弃去孔内液体，洗涤缓冲液3 min，共3次;加待检样品0．1 ml于已包被反应孔中，37℃孵育60 min后洗涤;各反应孔中加酶标抗体0．1 ml。37℃孵育45 min后洗涤;各反应孔中加TMB底物溶液0．1 ml以显色，37℃孵育20 min;各反应孔中加硫酸0．05 ml终止显色反应;于450 nm波长处测定各反应孔的OD值，大于阴性对照OD值的2．1倍或以上，即视为蛋白表达水平阳性。

1. 4随访对182例结肠癌患者进行为期5年的术后随治，对复发、转移或死亡情况记录，将此三类转归情况作为随访终点事件，以门诊或电话等方式收集随访数据。所有纳入患者均成功参与了5年的无瘤生存预后监测，无失访者出现，随访率达100%。

2结果

2. 1不同分期结肠癌组织MMP－7表达量182例结肠癌组织的MMP－7蛋白条带灰度值为( 189．12±75．33)，较30例癌旁组织的( 82．18±29．49)明显增高( t = 7．667，P = 0．000)。不同临床分期结肠癌组织中的MMP－7蛋白表达比较:Ⅳ期( 224．11± 59．82)＞Ⅲ期( 205．49±49．88)＞Ⅱ期( 150．86±31．27)＞Ⅰ期( 137．24±30．44)，其中Ⅲ期结肠癌组织MMP－7表达显著高于Ⅱ期( t=6．053，P=0．000)。

2. 2不同分期结肠癌患者血清MMP－7阳性率不同分期血清样本MMP－7阳性率依次减小，Ⅳ期( 71．4%，40/56)＞Ⅲ期( 62．7%，32/51)＞Ⅱ期( 55．0%，22/40)＞Ⅰ期( 51．4%，18/35)，但四组比较均无统计学意义(χ2= 4．580，P= 0．205)，同时两两比较也无统计学意义( P＞0．05)。进一步相关性分析示，结肠癌患者血清样本MMP－7阳性率与组织样本MMP－7阳性表达量具有明显正相关性( P＜0．05)。

2. 3其他临床参数与MMP－7的相关性结肠癌患者的年龄、性别、肿瘤部位、病理类型和分化程度与血清MMP－7阳性均无明显相关性( P＞0．05)。见表2。

2. 4结肠癌5年无瘤生存与MMP－7的相关性5年随访后发现，MMP－7阳性者的5年无瘤生存期和生存率分别为( 48．0± 1．8)个月和69．6%，明显低于MMP－7阴性者的( 54．4±1．6)个月和82．9%( P=0．038)，采用Cox生存风险模型分析结肠癌患者5年无瘤生存的可能危险因素后发现，肿瘤分期和血清MMP－7与患者5年无瘤生存密切相关，是5年无瘤生存的危险因素。见表3。

表2血清MMP-7阳性与其他临床参数相关性( n)

表3结肠癌患者5年无瘤生存危险因素的Cox分析

3讨论

侵袭转移是肿瘤致死的关键因素，作为我国最常见的恶性肿瘤之一，侵袭性方面的研究已成为结肠癌研究的热点〔1〕。肿瘤的侵袭转移是一个多阶段发展的生物学过程，需要多因素和多机制的参与，单一的瘤细胞检出仅能提示增加了转移风险，但不一定发生了肿瘤转移，所以目前亟待有关结肠癌侵袭转移的分子检测，尤其是发现肿瘤特异性生物学标记物〔4〕。Wnt/βcatenin通路激活是结肠癌发生、发展过程中的重要环节〔2〕，有通过对Wnt/β－catenin信号通路相关因子与结肠癌患者预后关系的研究报道，提示了结肠癌组织中的MMP－7和Survivin表达是引发患者肿瘤性死亡的危险因素〔5〕，但有待进一步关于临床肿瘤诊断和预后评估的研究。MMP－7属于MMPs家族的重要成员，可激活多种细胞外基质，对细胞外基质有广泛降解作用，可有效降解弹力纤维、纤维连接素、V型胶原纤维，抑制肿瘤转移的跨膜蛋白，从而发挥破坏细胞外基质的作用〔6〕。MMP－7表达与人类多种恶性肿瘤的发生、发展相关，在结肠癌侵袭转移过程中起重要作用，但其与患者病理参数及预后的关系相关报道结果并不一致〔7〕。有文献报道，结肠癌组织中MMP－7基因高表达，可能与肿瘤恶性程度和侵袭能力相关〔8，9〕。最新研究提示了结肠癌可能通过MMP－7的降解作用促进肿瘤的侵袭转移，而且可能与结肠癌的发生发展密切相关〔10〕。有研究通过免疫组化和原位杂交方法发现，MMP－7不在基质细胞中表达，良性肿瘤中的表达高于正常组织，但低于癌组织，提示了MMP－7可能参与了从正常组织向恶性组织转化的过程〔11〕。本研究首先证实了结肠癌组织MMP－7表达明显高于癌旁组织，进一步发现不同TNM分期结肠癌组织的表达呈随分期进展逐渐增高的趋势，提示MMP－7可能在结肠癌侵袭转移和疾病进展过程中发挥了重要作用。

4参考文献

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11 Cardillo MR，Di Silverio F，Gentile V．Quantitative immunohistochemical and in situ hybridization analysis of metalloproteinases in prostate cancer 〔J〕．Anticancer Res，2006; 26( 2A) : 973－82．

〔2015－03－15修回〕

(编辑郭菁)

〔中图分类号〕R735. 35

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202( 2016) 02-0365-03;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2016. 02. 051

第一作者:樊晓静( 1974－)，男，副主任医师，主要从事肿瘤外科研究。