福林酚法测定注射用肌氨肽苷中多肽的含量

刘业萍（鄂尔多斯市药品医疗器械检验研究中心　鄂尔多斯　017000）



福林酚法测定注射用肌氨肽苷中多肽的含量

刘业萍（鄂尔多斯市药品医疗器械检验研究中心鄂尔多斯017000）

摘要：目的：建立福林酚法测定注射用肌氨肽苷中多肽的含量。方法：用国家药品标准肌氨肽苷注射液规定的福林酚法测定注射用肌氨肽苷中多肽的含量。结果：牛血清蛋白在0.030mg～0.270mg（r=0.99964）范围内与吸光度值呈现良好的线性关系，平均加样回收率为99.28%，三批样品多肽含量均在85.0%～115.0%之间。结论：该方法结果可靠、专属性强，可用于注射用肌氨肽苷的质量研究。关键词：福林酚法注射用肌氨肽苷多肽含量测定

注射用肌氨肽苷是以健康家兔肌肉和心肌为原料，提取含有多种血管活性物质，利用现代生物技术手段，加适量赋形剂经冷冻干燥制成的冻干粉针剂。它含有生物活性多肽具有强大的扩张血管作用，扩张冠脉的能力是硝酸甘油的240倍[1]，用于治疗脑功能紊乱、脑卒中、脑供血不足所致的脑功能减退、周围神经病。本研究依据国家药品标准肌氨肽苷注射液[2]，对三批样品中多肽的含量测定方法进行研究，为成品质量标准的制定提供依据。

1　仪器与试药

1.1仪器：岛津UV-2450型紫外可见分光光度计，普利赛斯92SM-202A型电子分析天平。

1.2试药：牛血清蛋白对照品（中国食品药品检定研究院，批号140619-201421）；福林酚试液；水为超纯水，其余试剂为分析纯；试验用样品：注射用肌氨肽苷（1号样品：辽宁玉皇药业有限公司，批号14071801、2号样品：辽宁玉皇药业有限公司，批号14101201；3号样品：湖南五洲通药业有限责任公司，批号140507）。

2　方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1碱性铜试液的制备：取氢氧化钠10g，碳酸钠50g，加水400mL使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g，加水50mL使溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30mL使溶解，将两液混合作为乙液。临用前，合并两液，并加水至500mL。

2.1.2对照品溶液的制备：取牛血清蛋白对照品，加水制成每1mL中含0.3mg的溶液。

2.1.3供试品溶液的制备：取本品3支，分别加水制成每1mL中含多肽0.14mg的溶液，作为供试品溶液。

2.2实验方法

2.2.1标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.0mL、0.1mL、0.3mL、0.5mL、0.7mL、0.9mL，分别置具塞试管中，各加水至1.0mL，分别加入碱性酮试液1.0mL，摇匀，各加入福林酚试液4.0mL，立即混匀，置55℃水浴中准确反应5min，置冷水浴中10min，在650nm波长处测定吸光度；同时以0号管作为空白。以吸光度为纵坐标，对照品浓度（mg）为横坐标绘制标准曲线。牛血清蛋白对照品浓度在0.030～0.270mg范围内与吸光度值呈现良好的线性关系。回归方程为：y=2.38576x+0.00539，r=0.99964。

2.2.2测定法：精密量取供试品溶液1.0mL，照标准曲线制备项下方法，自“再加入碱性酮试液”起，依法测定，自标准曲线上查得供试品溶液的浓度，并乘以稀释倍数。

2.2.3稳定性考察：取批号为14071801的1号样品中的1支进行溶液稳定性考察，前1h，15min检测1次吸光度，1h后，30min检测1次吸光度，考察至3h，检测结果见表1。结果表明样品在1h之内基本稳定，通常样品吸光度检测在15min内完成。

表1　溶液稳定性考察结果

2.2.4准确度试验：取1号样品6支，分别加水至25mL量瓶中，分别精密量取该溶液0.3mL，各精密加入牛血清蛋白对照品（0.3mg/mL）0.4mL，加水至1.0mL，按“2.2.2”项下方法，依法测定，并计算回收率，回收率结果见表2。结果表明，多肽含量测定平均回收率为99.28%，RSD=1.10%。

表2　溶液准确度试验结果

2.2.5供试品中多肽含量测定：取3批样品，每批分别按“2.2.2”项下方法测定，测定结果见表3。测定结果表明，3批供试品中多肽的含量以标示量计均在85.0%~115.0%之间。

表3　样品含量测定结果

3　讨论

福林酚试剂对反应的酸碱度要求比较严格，通常情况下，该试剂仅在酸性条件下稳定，但此反应是在pH=10的情况下发生的，因此，当福林酚试剂加到碱性铜溶液中时，必须立即混匀才能发生反应；实验过程中，对照液和样品使用的移液管需洁净、干燥，防止加入溶液量不准确；当置水浴中保温时，各管所处的反应区温度应均匀，否则对照液将不呈线性关系。

综上所述，用国家药品标准肌氨肽苷注射液规定的福林酚法测定多肽的含量，可用于注射用肌氨肽苷质量标准的研究。

参考文献

[1]吴限，刘庆发，王喜莉.肌氨肽苷注射液临床疗效综述[J].黑龙江医药，2006，19（3）：215-216.

[2]国家食品药品监督管理局.国家药品标准.化学药品地标升国标第16册，2003：119-120.

中图分类号：R927.2

文献标识码：A

文章编号：1672-8351（2016）01-0002-02