IBDV感染雏鸡盲肠扁桃体的病理组织学变化

赵莹,李文,陶换,刘晓晓,刘婷宇,余燕,马金友

（河南科技学院,河南新乡453003）

IBDV感染雏鸡盲肠扁桃体的病理组织学变化

赵莹,李文,陶换,刘晓晓,刘婷宇,余燕,马金友

（河南科技学院,河南新乡453003）

为了探究雏鸡感染传染性法氏囊病毒（IBDV）后盲肠扁桃体病理组织学变化的发展规律,用实验室保存的IBDV毒株感染19日龄雏鸡,分别在感染后0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h、168 h、192 h取盲肠扁桃体,通过石蜡切片、HE染色,观察盲肠扁桃体的病理组织学变化.结果表明：在IBDV感染24 h,盲肠扁桃体淋巴小结内淋巴细胞开始出现坏死凋亡；IBDV感染48~72 h,淋巴小结和弥散淋巴组织区淋巴细胞大量减少,空泡化程度严重；IBDV感染96 h,盲肠扁桃体固有层弥散淋巴组织区和淋巴小结内空泡减少,淋巴细胞增多；IBDV感染120~192 h,组织结构开始恢复正常形态.由IBDV感染造成的雏鸡盲肠扁桃体的损伤在感染72 h后最为严重,96 h后开始恢复.

雏鸡；盲肠扁桃体；IBDV；病理组织学

传染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus,IBDV）是双链线状RNA病毒,能引起雏鸡急性、高度接触性传染病.早期的研究认为,IBDV主要在法氏囊中成熟的B淋巴细胞[1]、携带IgM的未成熟B淋巴细胞[2]或正在增殖的B淋巴细胞[3]中复制,而在T淋巴细胞内不会复制,因而IBDV感染导致大量的B淋巴细胞坏死和凋亡,引起感染雏鸡的体液免疫受到抑制,而机体细胞免疫功能不会受到显著影响.然而,后来的研究显示,雏鸡感染IBDV后,T淋巴细胞的体外增殖能力明显减弱[4],还能造成组织内网状细胞、巨噬细胞、异嗜细胞和结缔组织细胞凋亡,破坏各组织器官的结构[5].这说明IBDV不但能抑制感染雏鸡的体液免疫和细胞免疫,还能造成多组织器官的损伤.目前,关于雏鸡感染IBDV对免疫器官的损伤已有不少报道[6-7],其中大多针对的是侵害最为严重的法氏囊.而有关感染IBDV后盲肠扁桃体损伤的发展规律缺乏较为详尽的研究.本文采用组织切片、HE染色技术对病毒感染后不同时间点的盲肠扁桃体进行病理组织学观察,为IBDV感染后雏鸡各组织器官损伤的发展变化规律提供基础资料.

1 材料与方法

1.1 动物处理

1日龄白来航雏公鸡150只（河南省新乡市世周养鸡场）,置于河南科技学院实训中心饲养室喂养,在整个饲养过程中给予自由采食与饮水,饲养过程严格按照《蛋鸡饲养管理手册》进行.饲养2周,待雏鸡母源抗体消失后,10倍稀释实验室保存的IBDV（编号：19951128）200 μL,分别通过点眼（50 μL）、滴鼻（50 μL）和肛门吸收（100 μL）感染小鸡10只,3 d后收集感染小鸡的法氏囊,称质量后按5 g加1 mLPBS（pH 7.36）冰浴中充分匀浆,离心取上清,PCR检测病毒含量,调整浓度感染雏鸡70只,感染量和部位与前面相同,感染时间为19日龄,其余70只未感染IBDV雏鸡为对照组.

1.2 病料收集与处理

分别于雏鸡感染IBDV的0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h、168 h、192 h随机取试验组和对照组雏鸡各6只,颈椎脱臼处死,然后取盲肠扁桃体,置于4%多聚甲醛固定液中（0.1 mol/L,pH 7.4）,48 h以后按常规方法修块、脱水、透明、浸蜡、包埋,制作厚度为5 μm的组织切片,HE染色.每只鸡的盲肠扁桃体选取5张切片,利用Olympus显微照相系统拍照观察.

2 结果与分析

光学显微镜下,IBDV感染的0 h,雏鸡盲肠扁桃体固有层淋巴小结结构清晰,小结内没有形成明显的皮髓质和生发中心,小结外弥散的淋巴组织分布均匀,淋巴细胞结构正常,固有层内肠腺上皮细胞发育良好,细胞核清晰（图1-a）.雏鸡感染IBDV 24 h,盲肠扁桃体固有层淋巴小结中淋巴细胞出现核固缩、核碎裂、核溶解等典型细胞坏死现象,导致细胞排列疏松,细胞间间隙变宽（图1-b）.雏鸡感染IBDV48 h,低倍镜下盲肠扁桃体淋巴小结和弥散淋巴组织分界不明显或无分界；高倍镜下,大量网状组织增生,细胞大小不一,巨噬细胞和嗜中性粒细胞增多,淋巴细胞和碎裂溶解的淋巴细胞大量减少.同时肠腺上皮细胞胞核界限不清晰,胞质溶解呈空泡状,大量盲肠上皮细胞坏死、脱落（图1-c）.雏鸡IBDV 72 h,盲肠扁桃体固有层内大量淋巴细胞消失,空泡化严重,破碎的淋巴细胞胞核随处可见.雏鸡感染IBDV 96 h,盲肠扁桃体固有层空泡减少,淋巴细胞数量增多,肠腺已基本恢复正常（图1-d）.雏鸡感染IBDV 120~192 h,盲肠扁桃体固有层空泡消失,弥散的淋巴组织区内淋巴细胞分布均匀,和淋巴小结界限清晰,与对照组相比无甚差异（图1-e、f、g、h、i）.

图1 IBDV感染后不同时间点雏鸡盲肠扁桃体的病理组织学观察Fig.1 Pathological histologyofcecal tonsils at different time points after chicken infected with IBDV

3 结论与讨论

由传染性法氏囊病毒感染引起的鸡传染性法氏囊病是目前养禽业危害最大的疾病之一,已被世界动物卫生组织列为影响养禽业的重要疫病.本病主要侵害法氏囊,引起B淋巴细胞变性、坏死,并逐渐被异噬性白细胞、网状细胞、巨噬细胞取代,法氏囊滤泡消失.在法氏囊受到损伤的同时,其他免疫器官如盲肠扁桃体的组织结构也受到损害.

结果显示,雏鸡感染IBDV 24 h,盲肠扁桃体开始出现病变,48 h和72 h病变最为严重,到了96 h病变减轻,120~168 h盲肠扁桃体病变基本消失,这和我们之前对法氏囊的研究略有不同,即：雏鸡感染IBDV96 h,法氏囊损伤最为严重,120 h以后病变减轻并开始修复[8].雏鸡IBDV感染后法氏囊和盲肠扁桃体这种损伤和修复时间上的不同可能和不同免疫器官的含毒量多少以及存留时间长短有关,陈明勇等[9]的研究表明,IBDV人工感染雏鸡,法氏囊含毒量最大,带毒时间最长,其次是脾脏、胸腺、盲肠扁桃体、哈德氏腺含毒量较低,带毒期也较短.

研究结果还显示,雏鸡感染IBDV 48 h,盲肠扁桃体固有层内肠腺上皮细胞核固缩,胞质溶解,盲肠上皮细胞坏死脱落,说明雏鸡感染IBDV后非免疫细胞也受到了侵害.大量的研究也表明,IBDV感染会造成非免疫器官如肾脏、肝脏、腺胃、肌肉、十二指肠等多器官的损伤[10],这可能与IBDV感染会造成雏鸡血液中IFN-Y的水平增加有关,Rautenschlein等[11]研究认为,增加的IFN-Y启动巨噬细胞,激活一氧化氮合酶（iNOS）,导致NO和肿瘤坏死因子TNF-a的产生,引起组织炎症和细胞凋亡,组织结构遭到破坏.

[1]Chen L,Ran M J,Shab X X,et al.BAFF enhances B-cell-mediated immune response and vaccine-protection against a very virulent IBDVin chicken[J].Vaccine,2009,27（9）：1393-1399.

[2]陈家丽,蒋守群.鸡传染性法氏囊病及其免疫抑制研究进展[J].养禽与禽病防治,2012（5）：2-3.

[3]郭太杰.传染性法氏囊病的研究概况[J].黑龙江畜牧兽医,2010（11下）：86.

[4]滕素玲.益生菌应用雏鸡IBD免疫后免疫器官免疫功能和IL-2及其受体mRNA表达变化[D].哈尔滨：东北农业大学动物医学学院,2011.

[5]Tanimura N,Sharma J M.Appearance of T cells in the bursa of fabricius and cecal tonsils during the acute phase of infectious bursal disease virus infection in chickens[J].Avian Diseases,1997,41（3）：638-645.

[6]Inoue M,Miyano K.Thymic lessions in chicken infected with infections bursal disease virus[J].Avian Diseases,1994,38（4）：839-846.

[7]刘爵,韦莉,姚炜光.鸡传染性法氏囊病超强毒感染后SPF鸡免疫器官病理学观察[J].畜牧兽医学报,2002,33（4）：371-376.

[8]刘晓晓,余燕,邵营格,等.雏鸡感染IBDV后法氏囊组织结构的动态变化[J].河南科技学院学报：自然科学版,2015,43（4）：40-43.

[9]陈明勇,高齐瑜,杨汉青,等.传染性法氏囊病病毒变异E株感染鸡细胞凋亡的研究[J].畜牧兽医学报,2002,33（2）：180-184.

[10]佟美娇.IBDV感染SPF雏鸡免疫器官细胞凋亡及相关基因表达变化[D].哈尔滨：东北农业大学,2013.

[11]Rautenschlein S,Yeh H Y,Njenga M K,et al.Role of intrabursal T cells in infectious bursal disease virus（IBDV）infection：Tcells promote viral clearance but delayfollicular recovery[J].Archives ofVirology,2002,147（2）：285-304.

（责任编辑：卢奇）

The change of cecal tonsils in chickens infected with infectious bural disease virus

ZHAO Ying,LI Wen,TAO Huan,LIU Xiaoxiao,LIU Tingyu,YU Yan,MA Jinyou
（Henan Institute ofScience and Technology,Xinxiang453003,China）

To explore the histopathological change regulation of cecal tonsils in chickens infected with infectious bural disease virus,a group of 19-days-old chickens were infected with the standard strains of infectious bursal disease virus（IBDV）saved in our laboratory.Cecal tonsils were collected at 0,24,48,72,96,120,144,168 and 192 h after the chickens infected with IBDV,respectively.Histopathological changes of cecal tonsils were observed using paraffin section and HE staining.The results showed that necrosis and apotosis of the lymphocytes emerged in lymph node of lamina propria after the chicken infected with IBDV for 24 h.IBDV,the lymphocyte cells decreased dramatically and vacuolation emerged largely in lymph node and diffuse lymphoid tissue area during the chicken infected with IBDV for 48~72 h.Lymphocyte cells increased and vacuolation decreased in diffuse lymphoid tissue area and lymph node after the chicken infected with IBDV for 96 h.The tissue structure of cecal tonsil was beginning to recover to the normal after the chicken infected with IBDV for 120~192 h.The jury of cecal tonsil was the most serious after the chicken infected with IBDV for 72 h,then began to recover after 96 h.

chickens；cecal tonsil；infectious bursal disease virus；histopathologic

S858.31

A

1008-7516（2016）03-0043-04

10.3969/j.issn.1008-7516.2016.03.010

2016-04-05

河南省高校科技创新人才支持计划（13HASTIT006）；河南科技学院大学生创新实验项目（2014CX041）

赵莹（1995―）,女,河南济源人,本科生.

马金友（1968―）,男,河南信阳人,博士,副教授.主要从事分子病理学与动物病原学研究