天竺雾化剂对慢性咽炎动物模型的行为学及病理形态学影响*

刘元献李许娜吴新风连纯利胡镇何强亮刘媛媛熊雅岚

天竺雾化剂对慢性咽炎动物模型的行为学及病理形态学影响*

刘元献1李许娜1吴新风2连纯利2胡镇2何强亮2刘媛媛2熊雅岚2

目的 观察天竺雾化剂对慢性咽炎模型动物的治疗效应。方法 40只新西兰兔随机分为模型组、空白组、布地奈德组、天竺雾化剂组、自然恢复组。除空白组外，其余各组动物均建立慢性咽炎模型。造模完成后，处死并检测空白组和模型组动物；布地奈德组以布地奈德喷剂局部喷雾，天竺雾化剂组以天竺雾化剂局部喷雾治疗，自然恢复组不予药物治疗，疗程10天。治疗结束后处死所有动物，收集标本以供检测。观察比较5组动物的行为学和咽黏膜病理形态学变化。结果与自然恢复组比较，天竺雾化剂组、布地奈德组动物行为学变化差异有统计学意义（P＜0.01），但二处理组间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。病理形态学观察结果也显示，布地奈德、天竺雾化剂可以有效缓解慢性咽炎动物咽黏膜的病理形态学变化。结论 天竺雾化剂可以有效改善慢性咽炎动物模型的症状，减轻黏膜肿胀及炎症细胞浸润，促进咽黏膜组织修复。

慢性咽炎；天竺雾化剂；疗效；实验研究

慢性咽炎是咽部组织慢性炎症，以咽部不适，咽干，咽痒或者异物感，晨起刷牙恶心干呕等为主要临床表现。检查可见咽部黏膜充血，咽后壁淋巴组织增生。急性咽炎反复发作、临近器官炎性分泌物刺激，鼻通气困难张口呼吸，长期的烟酒刺激，空气中的粉尘颗粒及刺激性气体可以导致慢性咽炎。因慢性咽炎病程久，易反复，严重影响了患者的工作、学习、生活，并给患者造成了不同程度的心理负担，慢性咽炎的预防和治疗方法研究工作愈显重要。本研究主要通过观察天竺雾化剂对慢性咽炎的兔子的咽部病理形态学及行为学的影响，了解天竺雾化剂的治疗作用。

材料与方法

1实验材料

1.1 实验动物

健康普通级雌性新西兰兔40只,体重2.0～2.5kg，由广东省医学实验动物中心提供。

1.2 药物

天竺雾化剂（深圳市中医院制剂室提供，生产批号：20150915）。吸入用布地奈德混悬液（2ml：1mg/支，澳大利亚 AstraZeneca Pty Ltd，生产批号：3185471705）。

1.3 试剂

氨水（浓度：25%～28%，济宁宏明化学试剂有限公司）；蒸馏水（郑州津北化工有限公司）；松节油（浓度：25%～27%，无锡市展望化工试剂有限公司，批号：150601）。

1.4 仪器

电子称（广东香山衡器集团有限公司）、喉头喷雾器（江苏平安有限公司）、扁桃体针、XD-300冷光源（南京亚南特种照明电器厂）、0°硬性鼻内镜（tiansong）、BX43型生物显微镜（日本制造）、自制开口器、压舌板等。

2实验方法

2.1 造模

将40只兔子随机分为5组，每组8只。分别是模型组、空白组、布地奈德组、天竺雾化剂组、自然恢复组。模型组：第1～15天采用2.5%氨水喷兔子咽部，每天上午、下午各1次，每次3掀，第8天在其咽部注射松节油0.5ml,第16天注射空气栓子处死后立即取下咽部黏膜及其下组织作切片以供病理观察[1]。空白组：第1～15天用蒸馏水喷兔子咽部，每天上午、下午各1次。每次3掀，第16天处理同模型组。

2.2 治疗

天竺雾化剂组：造模方法同模型组，第16天开始用天竺雾化剂（根据人与家兔体表面积比率系数换算等效剂量[2]）喷兔子咽部，每天上午、下午各1次，每次3掀，第26天处理同模型组。布地奈德组：第1～15天造模方法同模型组，第16天开始用布地奈德混悬液（根据人与家兔体表面积比率系数换算等效剂量）喷兔子咽部，每天上午、下午各1次，每次3掀，第26天处理同模型组。自然恢复组：造模方法同模型组，第16天开始不予药物治疗，正常饲养，第26天处理同模型组。

2.3 观察指标

2.3.1 日常观察

观察兔子的精神状态，有无搔抓口部，记录每天的食量、观察喷喉后30分钟内的饮水状态，口咽部的分泌物的情况。分别在造模第15天、治疗第10天在硬性鼻内镜下观察兔子的咽部黏膜情况。

2.3.2 病理形态学观察

咽部黏膜及以下组织取出后，用10%甲醛溶液固定，经修块、流水冲洗、脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋、石蜡切片，HE染色后在光学显微镜下观察咽部组织各层的病理形态变化（由广东省医学实验动物中心比较医学实验室承担）。

2.4 统计学处理

实验结果

1日常观察

1.1 模型组

造模第1～7天，兔子的精神状态好，较活泼，每次喷氨水后，饮水频繁，但是总饮水量不多，食量稍减少，口腔见少量分泌物。第8天在其咽部注射松节油后，兔子的饮水量、食量明显下降，自主活动减少，表情淡漠，搔抓口部频繁，口腔分泌物逐渐增多，第12天达到高峰，个别兔子口腔分泌物较粘稠。第15天在纤维喉镜下观察其咽部黏膜呈暗红色，光泽度欠佳，黏膜分泌物增多。

1.2 空白组

造模第1～15天，精神状态良好，自主活动正常，无搔抓口部等动作，饮水、食量前后无变化。第15天在纤维喉镜下观察其咽部黏膜淡红、湿润，表面光滑，未见充血、肿胀等现象。

1.3 天竺雾化剂组、布地奈德组、自然恢复组

第1～15天表现同模型组，第16天开始，兔子精神状态逐渐好转，饮水量增多，自发活动增多，搔抓口部活动减少，口腔分泌物减少，食量变化如表1、图1，三组兔子食量较治疗前均有提高，天竺雾化剂组、布地奈德组两组与自然恢复组比较，有显著性差异（P＜0.01）。其中天竺雾化剂组与布地奈德组比较，P＞0.05，差异无统计学意义。

表1 三组兔子食量治疗前后对比（±s）

表1 三组兔子食量治疗前后对比（±s）

组别 n 治疗前天竺雾化剂组布地奈德组自然恢复组888 74.8±6.85 75.1±7.79 75.0±7.11治疗后107.2±9.37 107.7±10.48 87.3±7.44 t值7.895 7.061 3.380 P值0.000 0.000 0.002

图1 三组兔子治疗前后食量的变化

2病理形态学表现

2.1 造模后兔子咽部病理形态表现

模型组：咽部黏膜上皮呈钉状突增生，部分上皮脱落、坏死。固有层和黏膜下层水肿，炎性细胞浸润明显，以淋巴细胞、嗜酸性粒细胞为主，小血管增生扩张，黏膜下层内黏液腺分泌活跃，（图2）。

空白组：咽部组织各层分界清晰，由外到内可分为外膜层、肌层、黏膜下层、黏膜层。黏膜下层为疏松结缔组织，内含丰富的腺体，腺体无增生和萎缩，黏膜层又分为上皮层和固有层，上皮层为未角化复层扁平上皮，固有层为致密结缔组织，内含少量血管，可见分泌腺导管，（图3）。

图2 模型组

图3 空白组

图4 天竺雾化剂组

图5 布地奈德组

图6 自然恢复组

2.2 治疗后兔子咽部病理学形态观察

天竺雾化剂组：咽部黏膜上皮钉状突无明显增生，少数兔子固有层轻度肿胀、血管充血及炎细胞浸润，腺体分泌增生不明显，未见纤维增生表现。（图4）

布地奈德组：病理表现基本同天竺雾化剂组。（图5）

自然恢复组：多数兔子咽部黏膜上皮钉状突轻度增生，固有层可见轻到中度的充血肿胀，血管增生扩张，炎细胞浸润，腺体分泌活跃，少数兔子可见纤维增生。（图6）

如表2可见，天竺雾化剂组与布地奈德组兔子咽部黏膜病变恢复较好，黏膜上皮增生、腺体分泌情况与自然恢复组比较，有明显差异（P＜0.05）。

表2 三组兔子治疗后病理形态结果

讨论

慢性咽炎是我科的常见病，症状多种多样，包括咽不适感、异物感、瘙痒、灼热感、干燥、疼痛感等，发病率高，缠绵难愈，不仅影响患者的工作和生活，严重者可导致心理障碍[3]。本病属中医“慢喉痹”范畴，《内经》中已有“嗌干及痛”、“咽喉干燥”等描述。本病的病机，多因“风热喉痹”反复发作或治不彻底，致邪热留恋，熏蒸咽喉为患。火热上蒸，炼液成痰，加之久病成瘀，最后导致痰火郁结。因此，本病的治疗主要以清热化痰，理气解郁为法。根据唐容川在《血证论》中所云：“瘀则作干，瘀能致燥，津血同源，瘀则咽干”，在临证中多选清寒甘润之品，而慎用苦寒直折阴津。在此理论基础上，刘元献根据多年临床经验，研制出天竺雾化剂，其组成为：天竺黄、瓜蒌皮、木香、两面针、千年健、僵蚕、葶苈子、鱼腥草等。其中，天竺黄、瓜蒌皮以化痰结散,稀释稠痰，止咳清嗓；两面针，千年健，僵蚕以通络祛风，消肿利咽；同时两面针的乙醇提取物，对溶血性链球菌和金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用[4]；木香以芳香理气，调畅气机，气顺则血行；葶苈子降气祛痰，利水消肿；薄荷清利咽喉之要药；鱼腥草清热祛痰利咽，药理研究显示,该药对溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、流感杆菌、卡他球菌、肺炎双球菌有明显抑制作用,对大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌有抑制作用，对多种病毒也有抑制作用[5-8]。

本研究动物造模结果提示，慢性咽炎可导致咽部黏膜血管周围淋巴细胞、白细胞及浆细胞浸润，黏膜及黏膜下结缔组织增生。也可致黏液腺肥大，分泌功能亢进，黏液分泌增多。从行为学方面观察，经天竺雾化剂治疗后，兔子饮食及体重增加，饮水量增多，自发活动增多，搔抓口部活动减少，口腔分泌物减少，与自然恢复组比较差异有统计学意义。从咽部病理学方面观察，经天竺雾化剂治疗后，家兔咽部黏膜咽部黏膜病变恢复较好，黏膜上皮增生、腺体分泌情况与自然恢复组比较，差异有统计学意义。综上，本研究提示天竺雾化剂可以有效地抑制炎症反应，减轻黏膜充血，减少炎症细胞浸润及黏液分泌，为天竺雾化剂的临床应用提供了理论支持。天竺雾化剂采用局部用药，直接作用于病灶，用法简便，且副作用小，具有重要的临床应用价值，可进一步推广应用，但其改善咽炎症状的具体机制，还需深入研究。

1 彭顺林,钟渠,熊大经.慢性咽炎动物模型研究[J].成都中医药大学学报,1999,22(1):51-53

2 李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海：上海科学技术出版社,2006:13.

3 陈开森，蔡庆，吕小林，等．黄连金银花鱼腥草和大青叶对阳性球菌作用的试验研究 [J]．实用中西医结合临床,2009，9(3)：87-88.

4 杨仓良．毒药本草[M]．北京：中国中医药出版社，1983: 431.

5 熊大胜，席在星，邓应威．鱼腥草提取物抑菌作用研究[J]．常德师范学院学报(自然科版)，2002，14：60.

6 曹郡双，秦荣和．鱼腥草的药理作用及临床应用 [J]．现代中西医结合杂志，2001，10(6)：89-90.

7 孙志杰．鱼腥草素钠联合青霉素G对金黄色葡萄球菌的体外抗菌作用研究[J]．中国医药指南，2012，10(29)：37-39.

8 刘君，王家东．慢性咽炎的治疗[J]．上海医药，2010，30 (4)：186-187

（收稿:2016-04-20 修回：2016-05-04）

Therapeutic effects of Tianzhu aerosol on rabbit models of chronic pharyngitis

LIU Yuanxian,LI Xuna,WU Xinfeng,LIAN Chunli,HU Zhen,HE Qiangliang,LIU Yuanyuan,XIONG Yalan Department of Otolaryngology,Shenzhen Hospital Affiliated to Guangzhou University of Chinese Medicine, 518033,China

Objective To observe the therapeutic effects of Tianzhu aerosol(TZA)on rabbits with chronic pharyngitis based on an experimental study.Methods Forty New Zealand rabbits were randomly divided into 5 groups,i.e.model group(MG),blank group (BG),budesonide treating group(BTG),TZA treating group(TTG),and naturally recovering group(NRG).Except the animals in BG, all other rabbits were prepared as models of chronic pharyngitis.When modeling finished,animals in MG and BG were put into death to detect the associated indexes.Then,animals in BTG were treated by budesonide and those in TTG treated by TZA respectively, with the therapeutic course lasted for 10 days,while ones in NRG untreated at all.By the end of therapeutic course,rabbits in these 3 groups were all executed to collect samples for determination of pathohistological indicators.At last,a comparative study was carried out among these 5 groups to evaluate the changes in behaviors and pathohistological indicators.Results As compared with that of NRG,the changes in behaviors of TTG and BTG were markedly statistical significance(P＜0.01),while there was no such statistical significance(P＞0.05)when compared between these two treating groups.Meanwhile,it could be concluded from the pathohistological study that interfering with either budesonide or TZA had brought about effectively improved changes in pathological morphology among the animals of these 2 groups.Conclusion Tianzhu aerosol can effectively improve the symptoms of chronic pharyngitis in animal models,alleviate mucosal swelling and inflammatory cells infiltrating,and promote healing of inflamed pharynx mucosa.

Chronic pharyngitis;Tianzhu aerosol;Therapeutic effect;Experimental study

10.16542/j.cnki.issn.1007-4856.2016.03.002

广东省中医药管理局立项课题（NO.20132025）

1广州中医药大学附属深圳市中医院耳鼻咽喉科（518033）

2广州中医药大学在读硕士研究生

刘元献，主任医师.Email:liuyx2011@126.com