实验室检测在猪病防控中的应用

2016-03-27于新友李天芝沈志强

养猪 2016年1期

关键词：病料猪病病原

于新友，李天芝，沈志强，2

（1.山东绿都生物科技有限公司，山东滨州256600；2.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州256600）

实验室检测在猪病防控中的应用

于新友1，李天芝1，沈志强1，2

（1.山东绿都生物科技有限公司，山东滨州256600；2.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州256600）

近年来，猪发生的疾病种类不断增多，病情复杂，死亡率增加，给我国养猪业造成巨大的经济损失，仅靠流行病学和病理变化等有时很难对病因作出正确的判断，因此，必须借助实验室方法对猪病进行诊断，以便做出相应的防控措施，使养殖场的损失降到最低。文章就实验室开展的检测工作、检测对猪病防控的意义、送检样品的要求和检测结果的评价等进行论述，旨在为今后广大兽医工作者能更好地利用实验室检测做好猪病防控工作提供参考。

实验室检测；猪病防控；应用

近年来，我国猪病的种类越来越多，老病新发或新的疾病不断暴发流行[1]，症状日益复杂，隐性感染、非典型症状和混合感染无处不在[2]，仅靠流行病学、临床症状和病理变化难以确诊，不能及时准确制定防控措施，往往贻误疾病治疗的最佳时机，导致猪群大量死亡。因此，采集病猪或死猪相关组织作为病料，进行病原检测是辅助猪病诊断的重要手段，只有查明病原才能更好地、有针对性地采取相应的防治措施，减少临床工作的盲目性，以达到预防、控制和扑灭传染病的目的，从而使养殖场/户的损失降到最低。另一方面，目前市场上疫苗厂家众多，疫苗质量参差不齐，疫苗的免疫效果会受到储存、运输和免疫操作等多个环节影响，实验室可检测保护性抗体出现时间、维持时间、离散度和最高滴度等指标，评估疫苗免疫效果，为疫苗选择及制定科学免疫程序提供参考。此外，社会上还出现了大量传播谣言的人，他们受经济利益的驱使，对疫苗市场进行炒作，引起广大百姓的思想误区[3]。因此，只有开展实验室诊断工作才能更好地为广大兽医工作者和养殖场/户服务，才能更好地做好规模化猪场疫病综合防控与净化工作。而病料采集、保存、送检的方法是否正确，直接影响到检验的结果和防治工作的开展。鉴于部分养殖户和相关专业技术人员对实验室检测及应注意的事项不太清楚或认识上存在误区，笔者就多年从事实验室检测工作的心得体会及注意事项进行论述，以期为广大基层兽医工作者提供参考。

1 实验室开展的检测工作

实验室检测的内容很多，目前临床应用较多的是抗体检测和病原检测，可根据自己的需求进行选择，现主要介绍一下抗体检测和病原检测情况。

1.1 抗体检测

抗体检测指在体外进行的抗原抗体反应，其基本原理就是利用抗原可与相应的抗体特异性结合的特性，利用已知的抗原来检查血清或其它样品中是否含有相应的抗体[4]，目前普遍采用的是ELISA（酶联免疫吸附试验）方法，检测血清中某种病原的抗体含量。该法的优点是操作简单、时间短、可同时检测大量样本，对人员要求不高。但也存在一些问题，大部分试剂盒不能区分野毒和疫苗毒，有的病原抗体的检测水平与保护力并没有太大相关性，仅能作为疫苗免疫后产生免疫力的依据或感染发生的依据。实验室目前主要使用的是已经商品化的试剂盒。目前也有不少企业研发出了猪病抗体胶体金快速检测卡，也可用于抗体的快速检测，主要应用于猪场疾病的现场检测。

1.2 病原检测

病原检测分两种：一种是采用某种方法，如细菌培养、动物接种等直接检测某种病原微生物是否存在；另一种是采用PCR等方法，检测样品中某种病原微生物的核酸是否存在，从而间接反应某种病原微生物是否存在。第一种方法做起来费时费力，第二种方法便利快捷，在较短时间就能得到结果，所以目前病原检测主要采用的是第二种方法。PCR检测针对的是病原，针对性强、可确诊，可区分野毒与疫苗毒，荧光定量PCR检测方法可确定病毒载量，确定发病的主要原因，但PCR检测对人员和仪器有一定的要求，需专业人员操作，专业人员需要有一定的分子生物学基础。

2 检测对猪病防控的意义

病原检测的意义是了解猪群是否感染某种病原，假如感染，阳性率是多少，调查某种疾病的流行情况，根据检测结果，对猪场开展疾病净化相关工作，采取相应的措施，隔离或扑杀阳性感染猪，建立阴性种猪群，实行全进全出等措施，从而彻底根除某种疾病在猪场的流行。在疾病初期进行诊断，实现早发现、早治疗，用疫苗紧急接种，防控疾病大规模的暴发和流行。

通过抗体检测可以了解猪群的整体免疫状况，从而把握整个猪群的健康状况，弄清楚猪群注射疫苗后是否产生抗体及抗体量的多少，以此判断疫苗的免疫效果，及早发现问题，及早采取措施，为下一步的疫苗选择和免疫程序的制定提供依据。

3 送检样品的要求

送检的样品是实验室能否做出正确检测结果的前提和基础，送检样品不合格可能做出错误的检测结果，造成误诊，耽误疾病的治疗。现简单介绍一下样品的采集、保存和运输途中应注意的一些事项。样品主要包括血清和病料两个主要部分，现分别进行阐述。

3.1 抗体检测样品

送实验室检测血清样品一般有两个目的，一是做血清抗体的普查，即检验猪只的免疫情况及效价的高低，另一种目的是用于未注射疫苗猪群的疾病监测，如果是以抗体的普查为目的，要注意采样一定要有统计意义，按照猪场的规模采取一定分布和数量的样品[5]。对于以疫病监测为目的，一定注意当发现突然死亡或死因不明的病畜尸体，必须先采集耳静脉等末梢血液，涂片镜检，在认定不是炭疽时，才允许解剖和全面采集病料。对血清样品一般从前腔静脉或耳缘静脉采血2～5 mL，尽可能防止血样在采集过程中被污染，一旦污染细菌可能会影响监测结果的准确性，如果有条件的话最好能将血清分离后送检血清。方法为待血液凝固后，将析出的血清转移至离心管，3 000 r/min离心10 min，取上清液置于1.5 mL灭菌离心管内，做好标记送检，也可以直接送检采集好的血样，注意运输途中要冷藏保存，以防血样腐败变质，最好4℃，不能冻结，否则会造成溶血，影响检测结果，尽快将血样送达实验室，一般不超过24 h。

3.2 病原检测样品

采集病料进行病原分离和检测时，要保证病料的新鲜，一定要取适宜的病料和病变的典型部位，对检测细菌样品的病料最好是没有经抗生素治疗的动物[6]。如果病料取的部位不正确也能造成假阴性的结果，比如猪瘟，以前有送检人员取的是肝脏，这是错误的，采集的病料应尽可能的齐全，混合一起进行检测，避免漏检，提高结果的准确性。关于猪的常见病病料应该采集的部位在下面将作详细论述，采集病料时尽量无菌操作，动作要尽可能快，所用器械、容器都必须消毒灭菌，减少样品被污染的可能性，要在病猪死亡后6 h内采集病料。要将病料尽快送达实验室进行检测，不能送腐败变质的病料，病料运输途中一定要保持低温，防止途中变质，但也要避免病料的反复冻融，最好能在24 h内送达实验室检测。

3.2.1 猪病毒性病料应该采集的部位猪瘟主要采集扁桃体、淋巴结和脾脏，猪蓝耳病主要采集肺脏和淋巴结，猪圆环病毒病主要采集淋巴结、脾脏和肺脏，猪伪狂犬病主要采集脑、扁桃体、淋巴结和脾脏，猪乙型脑炎主要采集脑、腹股沟淋巴结、流产胎儿，猪传染性胃肠炎和流行性腹泻主要采集空肠、肠内容物和腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结，猪细小病毒主要采集流产或死产胎儿的肾、肺、肝、脑、睾丸和胎盘、仔猪肠系膜淋巴结、肝脏、母猪血样，口蹄疫主要采集溃烂或溃疡的表皮组织、水泡皮或水泡液，猪流感主要采集鼻腔液体，猪捷申病主要采集脑、脊髓、肠系膜淋巴结和扁桃体。

3.2.2 猪细菌疾病病料的采集部位猪大肠杆菌病主要采集肠系膜淋巴结、肝和脾，猪链球菌病主要采集心血、肝、脾、淋巴结、关节腔内液体渗出物及脑，副猪嗜血杆菌病主要采集心血、脾及淋巴结，猪巴氏杆菌病主要采集心血、脾及淋巴结，猪传染性萎缩性鼻炎主要采集鼻腔分泌物，猪梭菌性肠炎主要采集腹水和肠道分泌物，猪丹毒杆菌病主要采集心、肝、脾和淋巴结，猪传染性胸膜肺炎主要采集肺气管、肺门淋巴结和鼻腔分泌物，猪副伤寒主要采集心血、肝、脾和淋巴结，猪布鲁氏菌病主要采集流产胎盘、阴道分泌物，猪痢疾主要采集带血的新鲜粪便、肠内容物和结肠黏膜刮取物，仔猪红痢主要采集空肠内容物，猪支原体肺炎主要采集肺脏，猪钩端螺旋体病主要采集肝、脾、肾、淋巴结，猪衣原体病主要采集肝、脾、肺及流产胎儿。

3.2.3 猪寄生虫性病料应该采集的部位弓形虫病主要采集抗凝血和肺脏，球虫病主要采集粪便。

4 检测结果的评价

实验室不仅要及时、准确地对样品进行检测，有时也需要对得到的原始数据进行整理、分析和汇总，否则养殖户不能准确理解数据的意义。向养殖户提供准确的建议和报告，如阳性率、阴性率、差异度等，从而更好的指导临床用药，对当前的免疫程序、用药情况、疫苗质量等提出意见和建议，真正地为猪场服务，做到“检有所值，检有所用”。并进行可持续的跟踪服务，将实验室的作用发挥到最大。

5 小结

兽医诊断实验室在猪病防控中起着非常重要的作用，不论是病原检测还是抗体检测都应该追求高标准、高质量，将检测结果与临床诊断结合起来，将检测与分析统一结合起来，实验室检测虽不能解决猪场所有的问题，但可解决部分紧急问题。降低猪场养殖成本，避免大规模传染病的发生，尤其是规模较大的猪场，更应该重视实验室检测的作用，否则可能造成不可估量的损失，有条件的话最好能建立自己的检测实验室或依托可靠的合作单位，如果采取临时抱佛脚式的检测，会产生很多时间和信任成本。对猪场疾病的防控应重视预防和检测，检测可以贯穿于整个生产过程中的疫病防控，实验室检测应秉承“专业、高效、及时、准确”的服务宗旨，“客观、独立、公正、严谨”的原则，提升自身创新力、市场竞争力、打造社会公信力，为规模化养殖场提供及时、准确、权威的检测报告。同时，检测中心将“养大于防、防大于治”的养殖理念与养殖体检结合，实现全方位的养殖防控数据服务体系，从而真正实现养殖效益的最大化。随着猪病的不断增多和病情的复杂化，各地“草根实验室”和各集团公司的中心实验室纷纷建立，并在猪病防控中发挥了巨大作用。将各种实验室的作用结合起来，取长补短，才能更好地服务于生产一线[7]。实验室检测结果受到样品、人员、仪器设备、检测方法、检测试剂、检测环境等多种因素的影响，为保障实验室检测效果的准确性，应从以下几个方面进行控制：①加强对实验室的管理，制定一系列的规章制度，并严格执行；②采集合适的样品，并及时正确的送检；③加强对实验室检测人员的管理，定期开展技能考核，尽量减少人为因素造成的试验结果误差；④定期开展培训，使实验室人员不断学习，及时掌握最新、有效的检测方法，对检测结果分析要科学和全面，根据试验数据作出合理的判断，制定科学的猪病防控措施。相信在不久的将来，实验室检测会在猪病的防控工作中发挥更加重要的作用。

[1]胡长兰.抗体检测技术在猪疫病防控中的应用分析[J].农业与技术，2015（12）：170-171.

[2]李龙，章叶恩.用于实验室诊断的猪病料的采集、保存和运输方法介绍（1）—疑似病毒性疾病病料的采集、保存和运输[J].养猪，2007（3）：75-77.

[3]邓丽琴.猪病诊断方法目前出现的问题和相关的解决措施研究[J].北京农业，2014（27）：125.

[4]蔡丽，祝丹，魏正明，等.血清学检测在猪病诊断中的作用[J].养殖与饲料，2010（7）：47-48.

[5]刘建杰，方兵兵，吴斌，等.2002年我室猪病的诊断情况总结及分析[J].养殖与饲料，2003（8）：42-44.

[6]章叶恩，李龙.用于实验室诊断的猪病料的采集、保存和运输方法介绍（2）—疑似细菌性疾病病料的采集、保存和运输[J].养猪，2007（4）：68-69.

[7]劳锦华.猪病复杂催生“草根实验室”上马[N].中国畜牧兽医报，2009-11-29.

（编辑：柳青）

专家称肠道细菌决定胖瘦

【英国《每日邮报》网站5月11日报道】对减肥而言，限制卡路里饮食并不管用。很多人可能多年来一直有这样的怀疑。现在，伦敦大学国王学院权威遗传学专家蒂姆·斯佩克特教授给出了令人信服的证据。

他提出了有关人们发胖真正原因的新理论。该理论可能彻底改变我们的减重方法。

作为研究人类肠道内数万亿细菌的科学家之一，斯佩克特教授认为，这些细菌对我们的健康和情绪有着惊人的作用，而我们的现代饮食也许对它们有负面影响。