食品中苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测方法的研究

□刘向前 李 明 季华国 丽江市食品药品检验所

食品中苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测方法的研究

□刘向前 李 明 季华国 丽江市食品药品检验所

目的在现用专项检测标准的基础上，优化一种合理、快速的基于高效液相色谱分离的测定苏丹红Ⅰ～Ⅳ的方法。方法探讨了提取溶剂、吸附剂、洗脱溶剂等对苏丹红分离的影响。结果在相同流动相和测定波长下，改进后的方法标准曲线线性非常好，r大于0.999 99，RSD为1.3%～1.5%，样品加标回收率为94.5%～109.4%。结论可用于苏丹红Ⅰ～Ⅳ的检测，具有灵敏度高、重现性好的特点。

食品；苏丹红Ⅰ～Ⅳ；高效液相色谱法

苏丹红是一种人工合成的染料，广泛用于如溶剂、油、蜡和汽油的增色以及鞋、地板等的增光[1]，苏丹红是亲脂性偶氮苯化合物，主要包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ4种类型（见图1），由于具有潜在的致癌性，中国和欧盟都禁止将其作为食品添加剂[2]，但因苏丹红成本低、着色性好，仍被很多商家非法使用，食品中检测出苏丹红的报道时有发生，因此有必要建立简单、快速、高效的苏丹红分析检测方法，目前测定苏丹红的主要方法有高效液相色谱法、薄层色谱法、气质联用法、荧光光谱法等[3-7]。

现行检测标准是GB/T 19681-2005，对样品处理过程较比较复杂，分离效果不好，在实际操作中经反复实验，对此方法进行了改进，实验结果比较满意。

1 仪器与试剂

Agilent 1260液相色谱仪（配有二极管阵列检测器，美国），LabTech EV311旋转蒸发仪（北京莱伯科技有限公司），赛多利斯BT224S电子天平（德国）。

甲醇、乙腈、丙酮、正己烷（HPLC级，Fisher scientific）、甲酸（分析纯，天津市风船化学试剂科技有限公司）、层析柱管和层析用中性氧化铝（100～200目）。

苏丹红Ⅰ号（GBW100254，100 μg/mL）、Ⅱ号（GBW100255，100 μg/mL）、Ⅲ号（GBW100256，100 μg/mL）、Ⅳ号（GBW100257，100 μg/mL）溶液标准物质，均购自北京海岸鸿蒙标准物质技术有限公司。

实验室用水均为锐思捷（ELGA）超纯水系统制备的超纯水。

2 方法

2.1 色谱条件

色谱柱：Zorbax-C18，3.5 μm，150 mm×4.6 mm；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10 μL；检测波长：苏丹红Ⅰ478 nm,苏丹红Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ520 nm；流动相：溶剂A（0.1%甲酸的水溶液∶乙腈=85∶15），溶剂B（0.1%甲酸的乙腈溶液∶丙酮=80∶20）（见表1）。

2.2 标准溶液的配制

2.2.1 标准贮备液的配制

精密量取苏丹红Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号、Ⅳ号溶液标准物质各1.6 mL，置50 mL的容量瓶中，用乙腈或者丙酮稀释并定容至刻度，摇匀即得。

2.2.2 标准曲线

精密量取上述贮备液0.5、1.0、2.0、4.0 mL和8.0 mL，分别置10 mL的容量瓶中，用乙腈或者丙酮稀释并定容至刻度，摇匀备用。此标准系列浓度为0.16、0.32、0.64、1.28 μg/mL和2.56 μg/mL。

2.3 样品前处理（以红辣椒粉为例）

称取1.0 g（准确至0.001 g）样品于三角瓶中，加入30 mL正己烷，超声5 min，过滤，用10 mL正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5 mL以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2 mm左右上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。控制氧化铝表面吸附的色素带宽宜小于0.5cm，待样液完全流出后，用30 mL正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用乙腈或者丙酮60 mL洗脱，收集、浓缩近干后，用乙腈或者丙酮定容至5 mL，经0.45um有机滤膜过滤后待测。

3 结果与讨论

3.1 提取溶剂的选择

比较了乙腈、正己烷2种溶剂对待测物萃取回收率的影响，结果发现，两者的回收率分别为79.2%～90.8%、84.8%～94.2%［8］。两种提取液的提取回收率都很高，但乙腈提取液在进行液相色谱分析时会在苏丹红Ⅳ的保留时间附近产生明显的干扰峰。因此本研究选择正己烷为萃取溶剂。

3.2 洗脱溶剂的选择

中性氧化铝吸附剂主要依靠硅胶本身的吸附力吸附。当硅胶吸附完成后，都需要选用合适的溶剂洗脱。本研究试验了丙酮、乙腈、正己烷-丙酮（7∶3）和正己烷-丙酮（5∶5）等溶剂对洗脱效果的影响，结果表明，丙酮、乙腈、正己烷-丙酮（5∶5）的洗脱效果较好，考虑到与下一步色谱分离流动相的匹配，本研究选择丙酮作为洗脱剂。

3.3 线性范围和检出限

用混合标准溶液系列，按照国标和本标准的色谱条件测定，色谱图见图2～4，重复测定5次。以所得峰面积对质量浓度进行回归，得到苏丹红Ⅰ～Ⅳ的线性回归方程（见表2、3）。结果表明，苏丹红Ⅰ～Ⅳ在0.16～2.56 μg/mL浓度范围内，按标准方法得到的苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ相关系数（r）约为0.995，苏丹红Ⅲ相关系数（r）为0.96，苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ检出限为0.123～0.647 μg/mL，定量限为0.412～2.156 μg/mL；按改进方法得到的线性关系非常好，相关系数（r）大于0.999 99，苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ检出限为0.064～0.123 μg/mL，定量限为0.212～0.409 μg/mL。

3.4 回收率与精密度

在两种苏丹红色谱分离条件下，对已经经过预先处理的食品进行分析测定，实验结果见表4、5。由表可见，按改进方法处理的结果明显优于国标方法处理的结果。

4 结论

针对红辣椒粉中苏丹红染料（苏丹红Ⅰ～Ⅳ）的残留检测，本文采用在原国家标准方法基础上的改进方法，得到了灵敏度高、重现性好的结果。

[1]张洁,黄玉明.高效液相色谱测定苏丹红的研究[J].西南大学学报,2012,34(5):46-50.

[2]潘志明,李忠,王冰,等.食品中苏丹红检测研究进展[J].世界科技研究与发展,2007,29(6):14-18.

[3]雷雅娟,徐烨,刘渭萍,等.高效液相色谱法同时测定食品中的苏丹红、苋菜红和胭脂红[J].分析实验室,2007,26(4):85-88.

[4]张裕平,张毅军,袁倬斌,等.高效液相色谱法测定红辣椒制品中的苏丹红[J].生命科学仪器,2005,3(3):25-28.

[5]李春香,黄坚,马慧雪,等.薄层层析-高效液相色谱法测定食品中苏丹红[J].广州化工,2011,39(19):75-78.

[6]倪永付,王勇,朱莉萍,等.液相色谱-串联质谱法测定浓缩胡萝卜汁中8种苏丹类染料[J].理化检验-化学分册,2013,49(3):306-309.

[7]周尚,杨季冬,贺奎娟,等.荧光光谱法测定食品中苏丹红含量[J].理化检验-化学分册,49(3):179-182.

[8]朱浩,李小平,邹宝波,等.分散固相萃取/高效液相色谱法测定鸡蛋中对位红与苏丹红染料残留[J].分析测试学报,2013,32(11):1379-1383.