高效液相色谱法测定银花泌炎灵片中野黄芩苷含量

白凤芝，孙 录，刘玉梅，耿 虹

(1．吉林大学中日联谊医院，吉林 长春 130033； 2．吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033)

高效液相色谱法测定银花泌炎灵片中野黄芩苷含量

白凤芝1，孙 录1，刘玉梅1，耿 虹2

(1．吉林大学中日联谊医院，吉林 长春 130033； 2．吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033)

目的 建立测定银花泌炎灵片中野黄芩苷含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱为Kromasil C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），流动相为甲醇－0．4%磷酸溶液(15∶85)，检测波长为335 nm，柱温35℃，流速0．8 mL／min。结果 野黄芩苷进样量在0．027～0．216 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r＝1．000 0)，平均回收率为97．35%，RSD为0．56%（n＝6）。结论 该法简便、准确、专属性强、分离效果好，可用于银花泌炎灵片的质量控制。

银花泌炎灵片；野黄芩苷；高效液相色谱法；含量测定

银花泌炎灵片由金银花、半枝莲、石韦和川木通等10味药材组方，具有清热解毒、利湿通淋的功效，可抑制大肠埃希菌，用于治疗急性肾盂肾炎、急性膀胱炎等[1－2]。方中半枝莲具有清热解毒、化瘀利尿功效，主要含有野黄芩苷。原质量标准无半枝莲的含量测定，也尚未见关于测定野黄芩苷控制银花泌炎灵片质量的文献报道。笔者参考文献[3－4]建立了测定银花泌炎灵片中野黄芩苷的高效液相色谱(HPLC)法，用于控制产品的质量。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；Milli－Pore型纯水处理器（美国密滤博公司）；CAY50型紫外分光光度计（美国瓦里安公司）。野黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110842－200504，供含量测定用）；银花泌炎灵片（吉林华康药业股份有限公司，批号为110720），甲醇为色谱纯，水为高纯水，磷酸以及其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流动相：甲醇－0．4%磷酸溶液(15∶85)；检测波长: 335 nm；进样量：10 μL；柱温：35℃，流速：0．8 mL／min。理论板数按野黄芩苷峰计算应不低于5 000。

2．2 溶液制备

称取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含12 μg的溶液，摇匀，即得对照品溶液。取样品20片，研细，取约0．5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 mL，称定质量，加热回流30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方比例制成缺半枝莲的阴性样品，按供试品溶液准备方法制得阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

专属性试验：精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各10 μL，分别注入色谱仪，色谱图见图1。供试品溶液在与野黄芩苷对照品溶液色谱相应位置上有相应色谱峰，阴性对照无干扰。

线性关系考察：称取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含13．5 μg的溶液，分别精密吸取2，4，8，12，16 μL进样测定，测得峰面积分别为103．47，208．45，416．86，622．78，826．81。以进样量（X）对峰面积(Y)进行线性回归，得回归方程 Y＝3 827．705 5 X－2．599 1，r＝1．000 0(n＝5)。结果表明，野黄芩苷进样量在0．027～0．216 μg与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：精密吸取对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，重复进样测定6次。结果野黄芩苷色谱峰面积值的 RSD为0．7%（n＝6），表明仪器精密度良好。

图1 高效液相色谱图

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在配制后0，2，4，8，12，24 h时依法测定。结果野黄芩苷峰面积的RSD为1．1%(n＝6)，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

重复性试验：取同一批样品（批号为110720）6份，依法制成供试品溶液，独立测定6次。结果的 RSD为0．4%(n＝6)，表明方法重复性好。

加样回收试验：称取已知含量的样品粉末（批号为110720，含量为0．57 mg／g）6份，精密称定，分置具塞锥形瓶中，分别精密加入野黄芩苷对照品溶液（质量浓度为0．191 g／L）0．8，1．0，1．2 mL，各2份，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 野黄芩苷加样回收试验结果(n＝6)

2．4 样品含量测定

取样品3批，依法制成供试品溶液并进行测定，记录峰面积，计算含量。结果批号为 110722，110713， 101124的样品中野黄芩苷含量分别为每片 0．270，0．275，0．275 mg。

3 讨论

测定波长的选择：于200～400 nm范围内扫描，野黄芩苷于335 nm、265 nm和365 nm波长处都有最大吸收，参考相关文献[5－6]选择335 nm为本试验的检测波长。

流动相的选择：对药典法甲醇－水－醋酸（35∶61∶4）、乙腈－水－冰醋酸（20∶80∶1）和甲醇－0．4%磷酸溶液(15∶85)3种流动相分离效果的比较，结果以甲醇－0．4%磷酸溶液(15∶85)为流动相分离效果较理想。

提取条件和时间的考察：通过对药典索氏提取器提取法[7]，加甲醇超声处理法(功率为 400 W，频率为40 kHz)和加甲醇回流提取法进行考察，结果以加甲醇回流提取30 min的方法较简便，提取含量高。

含量限度的确定：根据 2010年版《中国药典（一部）》半枝莲的含量测定限度和该处方中半枝莲的用量，得出本品每片（0．5 g）含野黄芩苷全部转移时最低不得少于0．50 mg、半枝莲在制法中为水煎煮入药，考虑到生产过程的波动及药材质量的差异，按50%转移率为含量限度，即每片含半枝莲以野黄芩苷（C21H18O12）计，不得少于0．25 mg。以上3批样品测得的含量在此限度之内，符合规定，本法可用于控制银花泌炎灵片的质量。

[1]黄 燕，崔 俊，陆建勋，等．银花泌炎灵治疗急性膀胱炎60例临床分析[J]．中国医药科学，2013，3(4)：85．

[2]胡 亚，王冀邯，张晓天，等．银花泌炎灵片对大肠埃希菌的抑菌机制[J]．湖南中医药大学学报，2012，32（8）：3－4．

[3]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：109－110．

[4]戴 薇．高效液相色谱法测定复方斑蝥胶囊中野黄芩苷含量[J]．中国药业，2011，20（1）：23－24．

[5]郑金凤，李文莉，冯 芳．HPLC法测定灯盏花素注射液中野黄芩苷含量及有关物质[J]．药物分析杂志，2011，31（1）：34－38．

[6]胡 静，鞠忠良，满 亮．HPLC法测定茵山莲颗粒中野黄芩苷的含量[J]．中国药事，2009，23（9）：920－921．

[7]高晓霞，袁红霞，赵云丽，等．HPLC法测定半枝莲及其制剂热炎宁胶囊中野黄芩苷[J]．中草药，2007，38（4）：538－540．

Content Determination of Scutellarin in Yinhua Miyanling Tablets by HPLC

Bai Fengzhi1,Sun Lu1,Liu Yumei1,Geng Hong2
(1．China－Japan Union Hospital of Jilin University,Changchun,Jilin,China 130033; 2．Jilin Provincial Institute for Food and Drug Control,Changchun,Jilin,China 130033)

Objective To establish an HPLC method to determine the content of scutellarin in Yinhua Miyanling Tablets．Methods The HPLC method was adopted．The determination was performed on the Kromasil－C18column(250 mm×4．6 mm,5 μm)with the mobile phase of methanol－0．4% phosphoric acid(15∶85)at the flow rate of 0．8 mL／min．The column temperature was 35℃．The detection wavelength was 335 nm．Results The injection volume of scutellarin showed good linearity with the peak area in the range of 0．027－0．216 μg(r＝1．000 0)，the average recovery rate was 97．35%,RSD was 0．56%(n＝6)．Conclusion The established method is Simple, accurate and strongly specific with satisfactory separation results,which can be used for the quality control of Yinhua Miyanling Tablets．

Yinhua Miyanling Tablets;scutellarin;HPLC;content determination

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)03－0045－02

白凤芝（1966－），女，副主任护师，主要从事静脉药物配置中心管理工作，（电子信箱）1767028487＠qq．com；孙录（1958－），男，大学本科，副主任药师，主要从事医院药学工作，本文通讯作者，（电话）0431－849952489（电子信箱）sunlugood＠163．com。

2015－01－27；

2015－06－08)