乳腺癌患者基质金属蛋白酶抑制因子－1和人类表皮生长因子受体－2表达的临床意义研究

庞菁春，樊 静

（重庆医科大学附属第一医院，重庆 400021)

乳腺癌患者基质金属蛋白酶抑制因子－1和人类表皮生长因子受体－2表达的临床意义研究

庞菁春，樊 静

（重庆医科大学附属第一医院，重庆 400021)

目的 观察基质金属蛋白酶抑制因子－1（TIMP－1）和人类表皮生长因子受体－2（HER－2）在乳腺癌患者中的表达及其临床意义。方法 收集2007年1月至2008年12月收治的乳腺癌患者98例，所有病例均随访5年，分析TIMP－1和HER－2在乳腺癌中的表达与不同临床病理特征的关系，应用总生存时间（OS）评估患者预后情况。结果 全组肿瘤组织TIMP－1阳性表达率为57．14%，HER－2为42．86%，二者的表达与患者年龄、肿瘤大小、临床分期和病理类型均无关（P＞0．05）；TIMP－1的表达与淋巴结转移、组织学分级有关（P＜0．05）；HER－2与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)状态有关（P＜0．05）。TIMP－1表达者5年生存率为 61．79%，低于TIMP－1未表达者的66．64%，差异无统计学意义（P＞0．05）；HER－2表达者5年生存率为56．43%明显低于未表达者的64．32%（P＜0．05）。结论 TIMP－1表达者可能与肿瘤淋巴转移、组织分化有关，但不能作为不良预后的独立指标；HER－2阳性表达者5年生存率明显较低，可作为不良预后指标。

金属蛋白酶抑制剂；基质金属蛋白酶抑制因子－1；人类表皮生长因子受体－2；乳腺恶性肿瘤

乳腺癌是危害女性健康的恶性肿瘤，是异质性强的肿瘤，但随着医学科学技术的发展，对肿瘤疾病的治疗或预后预测研究的深入，其发病率从20年前的大幅上升逐渐开始下降，许多预后因素如淋巴结状态、内分泌受体状态等的提出，有效地指导了乳腺癌患者的综合性治疗，使其死亡率得到明显下降[1]。目前，有许多学者对基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP－1）和人类表皮生长因子－2（HER－2）开展了研究，但TIMP－1的阳性表达对肿瘤细胞的转移抑制作用还存在争议[2]，HER－2的表达与乳腺癌发生、转移和预后有关。笔者通过对我院收集的98例乳腺癌患者检测其TIMP－1和HER－2的表达，探索其临床病理特征及预后的意义，现报道如下。

1 资料与方法

1．1 一般资料

收集我院2007年1月至2008年12月收治的乳腺癌患者98例，均为女性；年龄25～72岁，平均（55．4± 12．1）岁；术前均未接受过任何治疗，临床资料记录完整。排除标准：术前接受新辅助治疗、放射治疗（简称放疗）、化学治疗（简称化疗）；晚期转移性乳腺癌、双原位癌患者；临床资料不全或标本不符合要求。入选患者中，左乳48例，右乳50例；肿瘤组织直径0．8～10 cm，中位数为3．6 cm，≤2 cm者24例，2～5 cm者51例，＞5 m者23例；淋巴结转移56例，无淋巴结转移42例；组织学分级Ⅰ级53例，Ⅱ级28例，Ⅲ级17例；临床分期Ⅰ期20例，Ⅱ期52例，Ⅲ期26例；浸润性导管癌83例，其他类型癌15例；孕激素受体（PR）阳性64例，阴性34例；雌激素受体（ER）阳性66例，阴性32例。所有病例随访5年，采用定期门诊复查和电话随访相结合的方式，随访了解患者术后治疗、生存情况，随访截至2014年12月31日或死亡时间。

1．2 方法

采用免疫组织化学法检测98例乳腺癌患者石蜡切片标本，观察乳腺癌组织中TIMP－1和HER－2的表达水平。免疫组化试剂：鼠抗人TIMP－1，HER－2单克隆抗体及S－P试剂盒（福建福州迈新生物技术公司）。试验操作步骤严格按照S－P法进行，所有标本经10%福尔马林液固定，石蜡包埋，取6张切片，切片厚度4～5 μm，TIMP－1及HER－2单克隆抗体为一抗；DBA显色后做阳性和阴性对照，以已知的阳性乳腺癌切片作为阳性对照，磷酸盐缓冲液代替相应抗体作为阴性对照；试验平行重复观察2次，每张切片取代表性的高倍视野≥5，以保证结果的准确性。

1．3 检测结果判定标准

TIMP－1阳性标准：TIMP－1呈棕色颗粒状，主要定位于癌细胞细胞质或少许其他间质细胞内；按Shimizu等方法，根据发生棕色反应的阳性强度和棕色颗粒面积进行判断。每张切片按照棕色阳性强度分为无着色、淡黄色、棕黄色和褐黄色，分别评分0，1，2，3分。切片棕色反应面积按阳性细胞数计算，阳性细胞数量＜5%为阴性（－）；阳性细胞数5%～25%为弱阳性（＋）；阳性细胞数达26%～50%为阳性（＋＋）；阳性细胞数＞50%以上为强阳性（＋＋＋），阳性数包括弱阳性、阳性和强阳性。

HER－2阳性标准：依据ASCO／CAP评分标准对HER－2阳性细胞数和着色程度评分分级。HER－2呈棕黄色颗粒，定位于癌细胞胞膜。细胞未染色或＜10%的肿瘤细胞胞膜染色为0级；＞10%的肿瘤细胞胞膜呈现微弱染色为1级；＞10%的肿瘤细胞呈现弱至中度的染色和＜30%的肿瘤细胞较强的染色之间的为2级；＞30%的肿瘤细胞呈浸润性染色为3级。其中0级和1级为阴性，2级和3级为阳性。

1．4 统计学处理

采用SPSS 20．0统计软件对数据进行统计分析，年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级、临床分期、病理类型、ER／PR状态等计数资料采用百分比表示，不同病理特征组间比较采用 χ2检验。采用乘积极限法（Kapplan－Meier法）计算患者TIMP－1和 HER－2表达5年生存率，取Log－Rank法比较不同组间生存率。P＜0．05表示差异有统计学意义。

2 结果

2．1 与临床病理特征的关系

全组肿瘤组织 TIMP－1阳性表达率达 57．14%（56／98），HER－2阳性表达率为 42．86%（42／98）。TIMP－1和HER－2表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、临床分期和病理类型均无关（P＞0．05）；TIMP－1的表达与淋巴结转移、组织学分级有关（P＜0．05），与ER及PR状态无关；HER－2与ER及PR状态有关（P＜0．05），但与淋巴结转移、组织学分级无关，详见表1。

表1 TIMP－1和HER－2表达与临床病理特征的关系(例)

2．2 与生存率的关系

乳腺癌患者TIMP－1表达者5年生存率为61．79%，低于阴性表达者的66．64%，但差异无统计学意义(P＞0．05)，见图1。HER－2表达者5年生存率为56．43%，明显低于阴性表达者的64．32%(P＜0．05)，见图2。

图1 TIMP－1表达与患者生存率关系曲线

图2 HER－2表达患者生存率关系曲线

3 讨论

目前，TIMP－1是有关乳腺癌治疗和预后研究的热点问题之一。TIMP－1能有效抑制基质金属蛋白酶（MMPs）的活性，阻止MMPs对细胞外基质（ECM）的降解，而ECM是阻止肿瘤细胞向外扩散、转移的天然生理屏障，肿瘤细胞必须穿越ECM，才可能进入血管或淋巴管远处扩散。TIMP－1除了抑制MMPs降解作用外，还可抑制肿瘤血管的形成，从而抑制肿瘤细胞的生长和扩散。本研究结果显示，TIMP－1高表达促进肿瘤细胞的淋巴转移和肿瘤细胞的分化，理论上也认为TIMP－1表达越强，乳腺癌的预后越好。但有研究显示，TIMP－1的增高，同时也伴随着MMPs增高，导致TIMP／MMP的比例失衡，尤其是在转移性乳腺癌中MMP－2，MMP－9显著增高[3－4]，主要是因为机体受肿瘤细胞的刺激宿主细胞和肿瘤细胞同时产生大量的MMP的原因；当TIMP－1主要来源于肿瘤内源性表达时，TIMP－1反而会促进肿瘤细胞的增长，只有当来源于外源性时，才可能抑制肿瘤细胞的生长、扩散；表达TIMP－1的乳腺癌更具有侵袭性，这类患者术后更容易出现骨转移[5]。本试验结果显示，TIMP－1在乳腺癌中阳性率占57．14%，TIMP－1阳性表达者生存率低于表达阴性者，但无显著差异，可能与TIMP－1主要来源于内源性肿瘤细胞有关，在本研究中来源于浸润性肿瘤的占89．29%（50／56）。该研究结论与张绍坤等[6]的研究一致。

HER－2是表皮生长因子受体家族中的一种跨膜蛋白，与配体相结合发挥类似酪氨酸激酶活性，通过细胞信号通路的调节细胞生长、增殖和分化作用。乳腺癌患者HER－2表达与预后的相关性研究已逐渐受到重视。有临床研究报道，HER－2蛋白过度表达的患者相比无HER－2表达的患者的肿瘤负荷较大，肿瘤增殖指数高，组织分化低，淋巴转移发生率高，患者的总生存率与无病生存率均减少[7]。本研究进一步证实，HER－2高表达者的5年生存率为56．43%，明显低于HER－2阴性表达患者的64．32%，表明HER－2作为一项独立的预后指标可预测乳腺癌患者预后。本结果与杨黎等[8]的研究报道一致，也有研究结果报道HER－2高表达者的5年无远处转移生存率并未见明显差别。HER－2高表达导致乳腺癌患者生存率降低的因素，可能通过磷酸肌醇－3激酶／蛋白激酶B（PI3K／Akt）通路促进乳腺癌癌细胞的生长增殖、侵袭转移的作用有关；同时可导致细胞表面整合素和黏合素功能的异常，促进了肿瘤细胞的扩散和转移。王言等[9]的研究认为，HER－2在腋淋巴阳性乳腺癌患者中高表达与预后相关，HER－2阳性患者中5年生存率达55．2%，明显低于阴性患者。在本次研究ER和PR状态中，ER和PR阴性患者中HER－2高表达，这可能与ER和PR阴性也是乳腺癌预后不良的因素有关，ER和PR阳性通常乳腺癌发展比较缓慢，分化好，术后生存率高[10－11]。王鸿雁等[12]已经报道HER－2基因的扩增与ER和PR阴性有显著的相关性。李春艳等[13]报道，ER及PR和HER－2均阴性乳腺癌的侵袭性更强，预后更差。目前，HER－2也成为乳腺癌的治疗靶点，出现了曲妥珠单抗、拉帕替尼等药物，目前还有有关数种新型HER－2靶向药物单一或联合治疗的试验正在进行，有望为HER－2靶向治疗带来新的改观。

综上所述，TIMP－1和HER－2可作为预测指标对乳腺癌患者的预后进行预测，TIMP－1高表达者可能抑制肿瘤细胞的扩散，但同时来源于内源性的TIMP－1有可能会促进肿瘤细胞的增殖、扩散，在对患者进行预后预测时需要综合考虑相关因素。HER－2高表达患者5年生存率较低，预后较差，综合考虑 TIMP－1和HER－2可以较好的预测乳腺癌患者的预后。但HER－2表达水平与临床病理相关性还存在不同的认识，TIMP－1对乳腺癌患者的预后也存在不确定性，还有待进一步深入研究。

[1]樊 嵘，金冶宁．TIMP－1在乳腺癌中的作用机制和临床意义[J]．现代肿瘤医学，2009，17（1）：154－156．

[2]Wurtz SØ，Schrohl AS，Moundsen H．TIMP－1 as a tumor marker in breast cancer－an update[J]．ActaOncol，2008(47)：580－590．

[3]郭 通，庞 达．KiSS－1、TIMP－1在乳腺癌中的表达及在淋巴结转移中的意义[J]．齐齐哈尔医学院学报，2010，31(7)：1 012－1 014．

[4]Daniele A，Lito AF，Giannelli G，et al．Expression of metal－loproteinases MMP－2 and MMP－9 in sentinel lymph node and serum of patients with metastatic and non－metastatic breast cancer[J]．Anticancer Res，2010，30（9）:3 521－3 528．

[5]刘 君，杨艳芳，傅西林，等．基质金属蛋白酶抑制因子1和nm－23在人表皮生长因子受体2阳性乳腺癌中的表达及意义[J]．中华肿瘤杂志，2012，34(8)：600－602．

[6]张绍坤，郭 冰，王 雷，等．金属蛋白酶组织抑制因子员在乳腺癌组织中的表达及其与多种生物学指标的关系[J]．中华乳腺病杂志（电子版），2011，5（5）：542－544．

[7]韩晓红，石远凯，马 丽，等．应用FISH和IHC技术检测中国乳腺癌患者HER－2基因状态及蛋白表达的前瞻性多中心研究[J]．中华检验医学杂志，2010，33（7）：655－657．

[8]杨 黎，朱 霞，冉 立．HER－2、PCNA、Bcl－2、Bax在乳腺癌组织中的表达与预后的关系[J]．癌症，2007，26（7）：756－761．

[9]王 言，姚 璐，刘 毅，等．人表皮生长因子受体2表达对腋淋巴结阳性和阴性乳腺癌患者预后的不同影响[J]．中华肿瘤杂志，2010，2（7）：511－513．

[10]张 青，李小欢，杨 真，等．110例乳腺癌患者HER－2基因扩增状况及其与临床病理特征的关系[J]．中国医药导报，2013，10（11）：86－88．

[11]杨丽丽，梁莉萍，赵 峰．ER、PR、HER－2、Ki67、Nm23、P53在多中心性乳腺癌中的表达及临床意义[J]．重庆医科大学学报，2012，37（11）：964－966．

[12]王鸿雁，张学斌，蒋伊娜，等．乳腺癌HER－2基因扩增的临床病理意义[J]．肿瘤防治研究，2010，37（11）：1 264－1 268．

[13]李春艳，张 晟，刘 艳，等．三阴型乳腺癌159例临床病理特征分析[J]．实用癌症杂志，2012，27（6）：624－626．

Clinical Significance of TIMP－1 and HER－2 Expression in Breast Cancer Patients

Pang Jingchun,Fan Jing
(The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing,China 400021)

Objective To investigate the clinical significance of tissue inhibitors of metalloproteinase－1 (TIMP－1)and human epidermal growth factor receptor 2(HER－2)expression in breast cancer patients．Methods 98 breast cancer patients from January 2006 to December 2007 were collected and followed－up for 5 years,then the relations between TIMP－1,HER－2 and clinical pathological features of breast cancer patients were analyzed,and the overall survival(OS)was applied to assess the patients′prognosis．Results The rate of TIMP－1 positive expression was 57．14%,and HER－2 was 42．86%．The TMP－1 and HER－2 expressions and patient age,tumor size,clinical stage and histological type were irrelevant(P＞0．05);TIMP－1 expression and lymph node metastasis,histological grade were relevant(P＜0．05);HER－2 and ER,PR status information were relevant(P＜0．05),the 5－year survival rate of patients with TIMP－1 expression(61．79%)was less than that of patients with no TIMP－1 expression(66．64%),and there was no statistical difference(P＞0．05);the 5－year survival rate of patients HER－2 expression(56．43%)was significantly lower than that of patients with the negative HER－2 expression(64．32%),and there was statistical difference(P＜0．05)．Conclusion TIMP－1 expression is related to lymphatic metastasis and tissue differentiation but it may be not an independent predictor of poor prognosis．The 5－year survival rate of HER－2 positive expression is significantly lower,which could be used as an adverse prognostic indicator．

metalloproteinase inhibitor;TIMP－1;HER－2;malignant breast tumors

R730．231；R737．9

A

1006－4931(2016)03－0021－04

2015－07－31)