人乳头瘤病毒DNA联合液基薄层细胞学检查在宫颈病变诊断中的应用

刘晓芸, 彭胡丹

(1. 江苏省南京市红十字医院 病理科, 江苏 南京, 210000;

2. 江苏省南京金域医学检验所有限公司, 江苏 南京, 210000)



人乳头瘤病毒DNA联合液基薄层细胞学检查在宫颈病变诊断中的应用

刘晓芸1, 彭胡丹2

(1. 江苏省南京市红十字医院 病理科, 江苏 南京, 210000;

2. 江苏省南京金域医学检验所有限公司, 江苏 南京, 210000)

摘要：目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)DNA联合液基薄层细胞学(TCT)检查在宫颈病变诊断中的应用。方法663例行宫颈癌前病变筛查的女性，分别进行HPV-DNA和TCT检测，所有HPV-DNA检测阳性和TCT检测分级≥非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)者在阴道镜下取组织样本进行病理检查。结果组织学病理检查显示，慢性炎症201例、宫颈内上皮瘤变(CIN)1级167例、CIN2级125例、CIN3级114例、宫颈癌56例。联合检测对≥CIN2级病理的诊断敏感度、特异度、阳性和阴性预测值分别为90.85%、76.90%、75.92%和91.29%，单独HPV-DNA检测对≥CIN2级病理的诊断敏感度、特异度、阳性和阴性预测值分别为80.68%、85.60%、81.79%和84.68%，单独TCT检测对≥CIN2级病理的诊断敏感度、特异度、阳性和阴性预测值分别为81.69%、82.88%、79.28%和84.96%，其中联合检测对病理分级≥CIN2的诊断敏感度高于单独检测；不同病理分级HPV-DNA阳性率和负荷量比较，CIN3级与宫颈癌间无显著差异(P>0.05), 其余各级间差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。此外，TCT结果分级与HPV阳性率二者间呈正相关(r=0.56, P<0.01)。结论HPV-DNA和TCT检测均是筛查宫颈癌前病变的有效方法，联合检测可提高诊断敏感度，病变越严重者HPV阳性率和病毒负荷量越高。

关键词:人乳头瘤病毒; 液基薄层细胞学; 病理检查; 宫颈病变

宫颈癌是临床发病率较高的妇科肿瘤，人乳头瘤病毒(HPV)感染是其主要发病原因，其中HPV16、58、52、33等基因亚型的感染与癌前病变密切相关[1-2]，因此HPV-DNA检测在宫颈癌前病变的诊断中具有重要意义[3]。宫颈具有易暴露、易观察及易取样等解剖学特征，及时发现病变对于病情逆转和治疗具有重要意义。液基薄层细胞学(TCT)检查可提高对异常细胞的诊断率，其诊断准确率较传统的巴氏染色法高[4]。本研究以组织学病理检查结果为金标准，探讨HPV-DNA和TCT在宫颈癌前病变诊断中的应用价值，现报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2013年1月—2015年1月在南京市红十字医院行宫颈癌前病变筛查的女性663例，年龄21～60岁，平均(42.57±3.16)岁，排除急性生殖道炎症、有子宫颈锥切或子宫切除史者。

1.2方法

1.2.1HPV-DNA检测：以宫颈刷取得足量分泌物和脱落细胞，置于洗脱管中送检。采用核酸扩增仪检测系统进行PCR检测，基本步骤如下：洗脱液离心后弃上清，裂解悬浮沉淀，加热后离心，保留上清液。按试剂盒说明进行扩增，再以杂交法对基因进行分型检测，经洗膜、显色，1 h内观察结果。

1.2.2TCT检测：将收集到的细胞经自动制片系统处理后制成涂片，行HE染色后，阅片。采用TBS分类法[5]分为: ① 正常或炎症; ② 非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)及腺细胞(AGSU); ③ 不排除高度病变的非典型鳞状上皮细胞(ASC-H); ④ 低度鳞状上皮内病变(LSIL); ⑤ 高度鳞状上皮内病变(HSIL); ⑥ 鳞状细胞癌(SCG)和腺癌。

1.2.3组织病理检查：所有HPV-DNA检测阳性和TCT检测分级≥ASCUS的女性均进一步行阴道镜检查，在图像异常区域和碘试验阴性区域取组织，制片，行HE染色，阅片。检查结果分为慢性炎症，宫颈内上皮瘤变(CIN)1级、2级、3级及宫颈癌。

1.3观察指标

① 记录3种检查方法的结果，以组织学病理检查结果为金标准，分别计算HPV-DNA、TCT及联合检测的诊断敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。② 观察不同程度宫颈病变与HPV-DNA负荷量的关系。③ 观察不同程度TCT结果与HPV感染的关系。

1.4统计学方法

2结果

2.1HPV-DNA、TCT及联合检测的诊断结果

663例样本中，组织学病理检查结果：慢性炎症201例、CIN1级167例、CIN2级125例、CIN3级114例、宫颈癌56例，其中≥CIN2级295例，其余分级368例。单独HPV-DNA检测结果：阳性291例，阴性372例，其中对≥CIN2级病理检测阳性238例，阴性57例；TCT检测结果：阳性(分级≥ASCUS)304例，阴性(正常或炎症)359例；其中对≥CIN2级病理检测阳性241例，阴性54例；联合检测结果：阳性353例，阴性310例，其中对≥CIN2级病理检测阳性268例，阴性27例。

单独HPV-DNA检测对≥CIN2级病理的诊断敏感度80.68%(238/295)，特异度85.60%(315/368)，阳性预测值81.79%(238/291)，阴性预测值84.68%(315/372)；单独TCT检测对≥CIN2级病理的诊断敏感度81.69%(241/295)，特异度82.88%(305/368)，阳性预测值79.28%(241/304)，阴性预测值84.96%(305/359)；HPV-DNA联合TCT检测对≥CIN2级病理的诊断敏感度90.85%(268/295)，特异度76.90%(283/368)，阳性预测值75.92%(268/353)，阴性预测值91.29%(283/310)。联合检测的诊断敏感度高于单独检测。

2.2不同程度宫颈病变与HPV感染的关系

随着病变程度分级的增加，HPV阳性率及负荷量均随之增加。CIN3级与宫颈癌HPV阳性率、负荷量无显著差异(P>0.05)，其余各级间HPV阳性率、负荷量差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。见表1。

表1　不同程度宫颈病变与HPV感染的关系

与慢性炎症比较, *P<0.05, **P<0.01;

与CIN1级比较, ##P<0.01;

与CIN2级比较, △P<0.05, △△P<0.01。

2.3不同程度TCT结果与HPV感染的关系

TCT阳性病例中，ASCUS/AGSU分级40例，HPV阳性率30.00%(12/40)；ASC-H分级54例，HPV阳性率33.33%(18/54)；LSIL分级81例，HPV阳性率51.85%(42/81)；HSIL分级104例，HPV阳性率73.08%(76/104)；SCG/腺癌25例，HPV阳性率96.00%(24/25)。经Spearman等级秩相关分析，TCT结果分级与HPV阳性率二者间呈正相关(r=0.56，P<0.01)，即随着TCT结果分级的增加，HPV阳性率也随之增加。

3讨论

宫颈癌发病率在妇科恶性肿瘤中居于第2位，早期检查和确诊对提高治疗效果，降低死亡率具有重要意义[6]。宫颈细胞学检查最初始于巴氏涂片，但该方法假阴率较高，TCT技术的出现较好地解决了涂片质量问题，使检查结果更加精确[7]。

目前研究[8-9]表明，HPV感染是宫颈病变的主要因素，尤其是高危型HPV与CIN的发生发展关系密切。大多数女性一生中均会发生至少一次的HPV感染，但这种感染大多为“一过性”，可自行清除，但年龄在30岁以上的女性，发生持续性感染的可能性增加，如HPV亚型为高危型，应高度重视。HPV检测方法有细胞形态学检查、免疫组化、PCR法等，本研究采用PCR法，获得了较高的诊断敏感度、特异度及阳性和阴性预测值。近年来，国内外已普遍开展TCT和HPV-DNA检查，两者联合应用可大大提高宫颈病变的检出率，筛查出更多高危患者[10-11], 一旦出现较高级别的病变，立即在阴道镜下行组织病理学检查，及时确诊病情。

本研究结果表明，HPV-DNA联合TCT检测诊断宫颈癌前病变的敏感度较单纯采用一种方法高，临床上可根据患者实际情况灵活选用检测方法。此外，本研究还发现，TCT结果分级越高，HPV阳性率也越高，与刘国忠等[12]报道一致。同时，CIN级别越高，患者HPV阳性率越高，也证实了HPV感染在CIN进展中的作用，与国外相关报道[13-14]一致。鉴于大多数女性都可能“一过性”感染HPV，而在6～12个月内复查的成本较高，患者的依从性也无法保证，因此单纯以HPV阳性来筛选宫颈癌的高危人群可能存在诸多局限，部分学者[15-18]尝试分析HPV病毒载量与宫颈疾病的关系，但目前国内外学者对病毒载量是否与宫颈病变程度相关仍存在争议。本研究结果表明，随着病变程度分级的增加，HPV-DNA负荷量与HPV阳性率同步增加，提示病毒载量的检测可能会作为宫颈病变程度的参考指标之一[19-20]。

综上所述, HPV-DNA和TCT检测均是筛查宫颈癌前病变的有效方法，联合检测可提高诊断敏感度，病变越严重，HPV阳性率和病毒负荷量越高。

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Application of human papillomavirus DNA combined with thinprep cytologic test in the diagnosis of cervical lesions

LIU Xiaoyun1, PENG Hudan2

(1.PathologyDepartment,NanjingRedCrossHospital,Nanjing,Jiangsu, 210000;

2．NanjingKingmedDiagnosticsCo.,Ltd,Nanjing,Jiangsu, 210000)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the application of human papilloma virus (HPV) DNA combined with thinprepcytologictest (TCT) in the diagnosis of cervical lesions. MethodsA total of 663 women underwent screening of cervical precancerous lesion were given HPV-DNA and CTC detections. The sample tissues of all the patients with positivity of HPV-DNA detection and grading ≥atypical squamous cells of undetermined significance (ASCUS) detected by TCT were collected for pathological examination under colposcope. ResultsHistopathological examination revealed that there were 201 cases of chronic inflammation, 167 cases of grade 1 cervical intraepithelial neoplasia (CIN), 125 cases of grade 2 CIN, 114 cases of grade 3 CIN and 56 cases of cervical cancer. The diagnostic sensitivity, specificity, positive and negative predictive value of combined detection in grade 2 CIN were 90.85%, 76.90%, 75.92% and 91.29% respectively, which were respectively 80.68%, 85.60%, 81.79% and 84.68% by HPV-DNA detection alone in grade 2 CIN and respectively 81.69%, 82.88%, 79.28% and 84.96% by TCT detection alone in grade 2 CIN. Among them, the sensitivity of combined detection in grade 2 CIN was higher than that of HPV-DNA detection alone and TCT detection alone. There was no significant difference between grade 3 CIN and cervical cancer by comparison to the HPV-DNA positive rates and load capacity in patients with different pathological gradings (P>0.05), and significant differences were presented among other gradings (P<0.05 or P<0.01). Additionally, there was a positive correlation between grading of TCT Resultsand the positive rate of HPV (r=0.56, P<0.01). ConclusionBoth HPV-DNA and TCT detections are effective methods in the screening of cervical precancerous lesion, and combined detection can improve the diagnostic sensitivity. The more serious the lesions are, the higher the positive rate of HPV and viral load capacity are.

KEYWORDS:human papilloma virus; thinprepcytologictest; pathological examination; cervical lesion

基金项目:中国高校医学期刊临床专项资金(11523958)

收稿日期:2015-11-13

中图分类号:R 711.74

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2016)03-091-04

DOI:10.7619/jcmp.201603028