MMP-7及TIMP-1在胎膜组织中的定位及其表达

郭秀玲，孙会青，张　妍

(山东省枣庄市妇幼保健院1.妇产科；2.儿科；3.病理科； 山东 枣庄　277100)



临床医学研究

MMP-7及TIMP-1在胎膜组织中的定位及其表达

郭秀玲1，孙会青2，张妍3

(山东省枣庄市妇幼保健院1.妇产科；2.儿科；3.病理科； 山东 枣庄277100)

[摘要]目的 探讨基质金属蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7，MMP-7)及其组织学抑制物-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1，TIMP-1)在胎膜早破(premature rupture of the membranes，PROM)发病中的作用。方法 选取2011年1~12月入我院的40例孕产妇，按照是否PROM分为两组，PROM组20例(未足月及足月PROM组各10例)和对照组20例(足月胎膜完整产妇)。采用SP法检测上述两组患者胎膜组织中的MMP-7及TIMP-1的表达情况。结果 ①PROM组胎膜组织中MMP-7的表达明显高于对照组(P<0.01)，差异有显著统计学意义；②PROM组胎膜组织中TIMP-1低于对照组，两组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 在PROM患者中胎膜组织中MMP-7及TIMP-1表达失衡，导致胎膜细胞间质降解，细胞间连接强度减弱，最终发生胎膜早破。

[关键词]基质金属蛋白酶-7；基质金属蛋白酶抑制物-1；胎膜早破；作用

胎膜在临产前自然破裂，临床上称为PROM[1]，未足月PROM是指孕龄<37孕周，而足月PROM是指孕龄≥37孕周。PROM是产科并发症中发生率较高的，可显著增高早产率、围产儿死亡率及宫内感染率的发生，对孕妇及新生儿产生不良的临床后果[2]。随着围产医学的发展，PROM的研究越来越深入，迄今为止，关于其机制研究甚多[3]，主要研究发现其与感染、细胞凋亡、微量元素、临床引产史、胎位异常、酶类作用及医源性创伤等多种因素有关，但其确切机制及明确病因尚未明晰，因此，临床上难以进行准确的预测和有效的治疗，有学者认为[4]，MMP-7及TIMP-1在PROM中起着一定作用[4]，但其具体作用机制尚不清晰，本研究采用SP法，观察MMP-7和TIMP-1在PROM及正常妊娠孕妇胎膜中的定位并分析其表达情况，探讨两者在PROM发病中的作用，为PROM的早期临床诊断提供可靠的数据资料。

1对象与方法

1.1研究对象选取2011年1月至12月入山东省枣庄市妇幼保健院的40例孕产妇，按照是否PROM分为两组，①20例为PROM组，其中未足月PROM产妇10例，平均年龄(25.8±2.2)岁，孕(33.1±1.4)周；足月PROM产妇10例，平均年龄(28.1±3.1)岁，孕周(39.1±0.8)周；②对照组为足月临床胎膜完整产妇20例，平均年龄(26.1±2.2)岁，孕周(39.0±0.7)周。两组研究对象的基本情况(见表1)。

表1两组研究对象的基本情况

组别平均年龄(岁)孕(周)PROM组(未足月及足月组)26.5±2.636.5±1.1对照组26.1±2.239.0±0.7*

*P<0.05，PROM组与对照组相比

两组孕产妇均无内科及合并相关产科疾病，且均为单胎妊娠者。上述各组因素(年龄、内科及产科情况及胎数)相比，差异无统计学意义(P>0.05)，而孕周存在统计学差异的原因是选取的标本是根据足月和未足月来分组的，具有选择偏倚，而此偏倚是由于未足月所致，足月PROM组与对照组无统计学意义(39.1±0.8 vs 39.0±0.7，P>0.05)。因此，两组之间比较具有可行性(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1标本采集取分娩后产妇的胎膜组织(包括未足月PROM组、足月PROM组及对照组)，大小为2cm×2cm，用无水生理盐水冲洗后，再用10%甲醛固定24h以上，以备用。

1.2.2MMP-7及TIMP-1的定位MMP-7及TIMP-1定位在胞浆呈现棕黄色，细胞核和细胞膜上未见着色的为阳性，表达若非上述所述位置的为非特异性表达，为假阳性的表现，需要摒弃。

1.2.3 MMP-7及TIMP-1的检测采用免疫组织化学SP法检测两组胎膜组织中MMP-7及TIMP-1的表达情况。购自武汉博士德生物工程有限公司，工作浓度为1∶200的MMP-7兔抗人单克隆抗体；购自北京中杉生物技术公司，工作浓度1∶50为TIMP-1兔抗人单克隆抗体。

1.2.4结果判定对阳性反应情况采用双盲法进行判定，参照Fromowitz综合计分法[5]进行半定量分析。MMP-7及TIMP-1阳性标准表现如下：胞浆呈现棕黄色，细胞核和细胞膜上未见明显着色。根据显色深浅及阳性细胞百分数评分。①染色深浅：0(不显色或是显色不清)，1(浅黄色)，2(棕黄色)，3(深褐色)；②阳性细胞百分率：0(无细胞显色)，1(<25%细胞显色)，2(25%~50%细胞显色)，3(>50%细胞显色)[1]。计分为两项之和累积：(-)0~1分，(+)2~3分，(++)4~5分，(+++)6分以上。

2结果

2.1MMP-7及TIMP-1在胎膜组织中的定位在光学显微镜下的表现(见图1)，由图1可见PROM组胎膜组织中均有MMP-7及TIMP-1的阳性表达，参见上述阳性标准进行数据判断。

A、B：PROM组的MMP-7,TIMP-1;C、D:对照组的MMP-7,TIMP-1。　　图1　MMP-7及TIMP-1在胎膜组织中的免疫组化结果(SP，×200)

2.2MMP-7及TIMP-1在胎膜组织中的表达情况PROM组MMP-7在胎膜组织中的表达水平明显高于对照组，差异有显著统计学意义(P<0.01)；PROM组胎膜组织中TIMP-1表达水平低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05，见表2)。

表2MMP-7及TIMP-1在两组胎膜组织中的表达情况(n=20)

组别MMP-7-++++++阳性率(%)TIMP-1-++++++阳性率(%)PROM组02612601262040对照组686001064050Z102.142P0.0000.012

3讨论

PROM是常见的产科并发症，发病率占分娩总数的3.03%~21.9%[6]，严重危害围产期母婴健康。胎膜是由细胞外基质相连的羊膜、蜕膜及绒毛膜四者组成的。细胞外基质中的胶原成分是维持胎膜弹性的主要成分，其通过持续滑动调动妊娠过程中相应的张力及容量变化[7-8]。近年来研究表明[2]，胎膜的完整性及其强度中起重要作用的主要成分为胶原(其分解依赖于胶原酶)，MMP是可降解胶原成分的一组调节细胞外基质结果和含量依赖性内肽酶，导致PROM的发生，TIMP是MMP的抑制物，能够减少胶原的降解，减少PROM的发生。因此认为，MMP-7及TIMP-1在维持胎膜完整性方面起着相当重要的作用。本研究选取PROM组和正常妊娠组中的胎膜组织，通过免疫组织化学法分析，得到MMP-7及TIMP-1的不同表达结果，推断MMP-7及TIMP-1在PROM中的可能作用。

本研究表明MMP-7在PROM组表达量明显高于对照组(P<0.01)，TIMP-1在PROM组在PROM组表达量低于对照组(P<0.05)与国内外多种研究表明的MMP及TIMP在PROM中的作用相符[2-5,9-12]。因此我们认为，在PROM中胎膜组织中的MMP-7蛋白表达的增加及TIMP-1蛋白表达的降低[13]，使其对MMP-7的抑制作用减弱，使胎膜组织中MMP-7/TIMP-1失衡，导致其向降解细胞外基质的方向发展，导致胎膜强度和完整性受到破坏，引起PROM的发生。因此，临床上可以把MMP-7作为一种可靠的检测指标来预测PROM，同时有望通过MMP抑制物(TIMP-1)的使用来达到预防PROM发生的目的。

[参考文献]

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[收稿2015-12-02;修回2016-01-10]

(编辑：王福军)

Matrix metalloproteinase-7 and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 localization and expression in premature rupture of the membranes

GuoXiuling,SunHuiqing,ZhangYan

(1.Department of Obstetrics and Gynecology; 2.Department of Pediatrics ; 3.Department of Pathology， Maternal and Child Health Care Hospital of Zaozhuang in Shandong Province,Zaozhuang Shandong 277100,China)

[Abstract]Objective To investigate the role of matrix metalloproteinase-7 (MMP-7) and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 (TIMP-1) in premature rupture of the membranes. Methods Select 40 case of pregnant women from Jan 2011 to December 2011, randomly divided them into 2 groups, 20 women with PROM (Term PROM n=10 and Preterm PROM n=10), and 20 of non-PROM pregnancies were recruited as control group. The expression of MMP-7 and TIMP-1 in the 2 groups of patients were detected by immunohistochemical SP method. Results (1) In PROM group MMP-7 expression in membrane were apparently higher than those of the control group (P<0.01); (2) In PROM group TIMP-1 expression in membrane were apparently lower than those of the control group (P<0.05). Conclusion In PROM group, the expression of MM9-7 and its inhibitor TIMP-1 is imbalanced, leading to increased extracellular matrix degradation, and weakening of the fetal membranes,eventually causing premature rupture of the membranes.

[Key words]MMP7; TIMP-1; PROM; role

[中图法分类号]R714.4

[文献标志码]A

[文章编号]1000-2715(2016)01-0044-03

[基金项目]山东省枣庄市科技卫生发展计划项目(NO：201206320443)。