肿瘤浸润T淋巴细胞在乳腺癌原发灶中的表达与预后的关系

郑益红 温美福 叶新桥 邹欣 邓储婷

肿瘤浸润T淋巴细胞在乳腺癌原发灶中的表达与预后的关系

郑益红 温美福 叶新桥 邹欣 邓储婷

目的 分析肿瘤浸润T淋巴细胞在乳腺癌原发灶中的表达与预后的关系。方法 对105例乳腺癌患者的临床资料和石蜡包埋病理标本进行分析，利用免疫组化检测患者CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴细胞在乳腺癌原发灶中的表达，利用COX多因素和单因素分析患者总生存率和无病生存率的相关因素。结果 CD8+T淋巴细胞浸润和SBR分级具有相关性（P＜0.05）。CD4+T淋巴细胞浸润与HER-2表达、SBR分级有关（P＜0.05），CD3+T淋巴细胞浸润和淋巴结状态、HER-2表达、PR表达、ER表达、SBR分级、临床分期、肿瘤直径、年龄等无关。结论 CD3+T淋巴细胞浸润广泛存在于乳腺癌原发灶中，病变程度受到CD8+T淋巴细胞和CD4+T淋巴细胞浸润的影响，CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴细胞都关系着乳腺癌的较好预后。

肿瘤浸润；T淋巴细胞；乳腺癌；原发灶；预后

肿瘤浸润T淋巴细胞就是从肿瘤组织中分离出的富含肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞，T淋巴细胞是机体重要的抗肿瘤免疫应答细胞，主要介导细胞免疫抑制或杀伤肿瘤细胞[1]。肿瘤浸润淋巴细胞与患者的生存率和手术治疗效果有很大的关系[2]。

1 资料与方法

1.1 一般资料 对本院2013年3月～2015年3月接收的

100例乳腺癌患者的临床资料和石蜡包埋病理标本进行回顾性分析，患者平均年龄（52.61±5.14）岁，所有患者均为原发乳腺癌，手术进行前均没有进行靶向治疗、化疗、免疫调节剂治疗、放疗，都完成了根治乳腺癌的手术，所有资料均完整。

1.2 免疫组化检测 将所有患者的石蜡包埋病理标本切成4μm厚度的薄片，将其中具有明显病灶特征的薄片进行烘烤，利用甲苯脱去表层的蜡，利用梯度酒精对其进行水化，然后用高压将其修复，利用浓度为3%的双氧水对内源性过氧化物酶进行孵育灭活等。然后再加入鼠抗人CD8+、CD4+、CD3+单克隆抗体（均购自福建迈新公司）作为一抗，并在4℃的温度下孵育过夜，再进行漂洗、复温到37℃，加入生物素标记二抗工作液，在温度为37℃的情况下，孵育30 min，采用PBS缓冲液进行漂洗、苏木素复染、DAB显色，在高倍显微镜下进行镜检，并采用PBS替代一抗进行阴性对照。

1.3 结果判定[3]采取高倍视野，在病灶中随机选择五个视野，并保证所选视野分布在病灶的各个部位，CD8+、CD4+、 CD3+染色都定位在淋巴细胞的胞膜之中。（1）对显色强度进行观察：深棕色计3分、棕色计2分、浅棕色或黄色计1分、无显色计0分；（2）对显色面积进行观察：对视野淋巴细胞计数，＞50%计3分，25%～50%计2分，＜25%计1分，＜5%计0分。将显色面积与显色强度得分相乘，≥2分为阳性，＜2分为阴性。

1.4 统计学方法[4]采用SPSS 19.0统计学进行分析，计量资料用“x±s”表示，等级资料采用秩和检验，用Spearman秩对连续变量和分类变量进行相关性分析，Kaplan-Meier法进行生存分析，COX风险比例模型进行单因素分析。α=0.05为检验水准，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌OS和DFS影响因素COX单因素分析 随访期间13例复发，9例死亡，通过Kaplan-Meier法进行分析，5年生存率为84.92%，无病生存率为76.23%。3年生存率为89.93%，无病生存率为81.23%，2年生存率为93.23%，无病生存率为85.45%。将临床及病理相关因素带入COX模型作为自变量，以总生存率（OS）与无病生存率（DFS）分别作为因变量，进行单因素分析，结果显示，OS保护因素为CD8+T淋巴细胞浸润、CD4+T淋巴细胞浸润（HR=0.565、0.622，P＜0.05），OS危险因素为淋巴结转移、HER-2阳性、SBR分级、临床分期（HR=3.024、4.251、3.562、3.251，P＜0.05）。DFS保护因素为CD8+T淋巴细胞浸润、CD4+T淋巴细胞浸润（HR=0.513、0.636，P＜0.05），DFS危险因素为淋巴结转移、HER-2阳性、SBR分级、临床分期（HR=2.105、3.025、2.936、2.351，P＜0.05）。

2.2 CD8+、CD4+、CD3+在乳腺癌原发灶的表达与病理特征的关系 105例患者中，71例（67.62%）为CD8+阳性，55例（52.38%）为CD4+阳性，101例（96.19%）乳腺癌原发灶为

CD3+阳性。CD8+T淋巴细胞浸润和SBR分级具有相关性（P＜0.05）。CD4+T淋巴细胞浸润与HER-2表达、SBR分级有关（P＜0.05），CD3+T淋巴细胞浸润和淋巴结状态、HER-2表达、PR表达、ER表达、SBR分级、临床分期、肿瘤直径、年龄等无关。

3 讨论

T淋巴细胞主要由重要TILs组成，并且各亚群在肿瘤免疫中都发挥着重要作用[5]。CD8+T淋巴细胞对杀死和溶解肿瘤细胞、微生物、异体细胞有直接的作用，是机体细胞免疫的一种主要力量[6]。CD4+T淋巴细胞在乳腺癌灶内的作用对抗肿瘤免疫有很大的帮助作用，并和CD8+T淋巴细胞的表达相符[7]。在大肠癌组织中，CD8+T淋巴细胞浸润与组织分型、临床分期等有关，其恶性程度越高，CD8+细胞的表达越高，CD8+T淋巴细胞浸润程度越高，预后也相应的越好[8]。

本研究结果显示，OS保护因素为CD8+T淋巴细胞浸润、CD4+T淋巴细胞浸润（HR=0.565、0.622，P＜0.05），OS危险因素为淋巴结转移、HER-2阳性、SBR分级、临床分期（HR=3.024、4.251、3.562、3.251，P＜0.05）。DFS保护因素为CD8+T淋巴细胞浸润、CD4+T淋巴细胞浸润（HR=0.513、0.636，P＜0.05），DFS危险因素为淋巴结转移、HER-2阳性、SBR分级、临床分期（HR=2.105、3.025、2.936、2.351，P＜0.05）。CD8+T淋巴细胞浸润和SBR分级具有相关性（P＜0.05）。CD4+T淋巴细胞浸润与HER-2表达、SBR分级有关（P＜0.05），CD3+T淋巴细胞浸润和淋巴结状态、HER-2表达、PR表达、ER表达、SBR分级、临床分期、肿瘤直径、年龄等无关。

综上所述，CD3+T淋巴细胞浸润广泛存在于乳腺癌原发灶中，病变程度受到CD8+T淋巴细胞和CD4+T淋巴细胞浸润的影响，CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴细胞都关系着乳腺癌的较好预后。

[1] 于海明,焦顺昌,杨俊兰,等.乳腺癌原发灶T淋巴细胞浸润与预后的关系[J].中国医学科学院学报,2013，35(2)：199-206.

[2] 于海明,杨俊兰,焦顺昌,等.乳腺癌原发灶B淋巴细胞浸润与预后的关系[J].南方医科大学学报,2013，33(5)：750-755.

[3] 争鸣,张欣,郭慧芳,等.CD147介导CD4+肿瘤浸润淋巴细胞促进乳腺癌进展[J].细胞与分子免疫学杂志,2015，31(7)：961-964.

[4] 何建明,黄湛,吴家豪,等.CD8+肿瘤浸润淋巴细胞与乳腺癌预后的关系[J].中国普通外科杂志,2013，22(11)：1475-1478.

[5] 任伟民,张友元,董军明,等.老年女性原发乳腺浸润性导管癌中FoxP3表达与淋巴结转移的相关性[J].中国老年学杂志,2014，34(2)：385-387.

[6] 薛聪,彭柔君,安欣,等.CD8+淋巴细胞浸润对可手术乳腺癌预后的影响[J].临床肿瘤学杂志,2014，19(10)：896-900.

[7] 于海明,杨俊兰,焦顺昌,等.增殖诱导配体在乳腺癌原发灶表达及与预后的关系[J].南方医科大学学报,2015，35(2)：185-190.

[8] 付云霞,王弦,朱敬凤,等.乳腺癌间质中肿瘤相关性巨噬细胞和T细胞浸润及其临床病理意义[J].实用医学杂志,2015，31(2)：256-258.

Objective To analyze the relationship between the expression of tumor inf i ltrating T lymphocytes in breast cancer and prognosis. Methods The clinical data of 100 patients with breast cancer

from March 2013 to March 2015 were analyzed. The expression of CD3+T, CD4+T, CD8+T lymphocytes in the primary foci of breast cancer were detected by immunohistochemistry. The correlation factors were analyzed by COX multiple factors and single factor analysis. Results CD8+T lymphocyte inf i ltration and SBR classif i cation had correlation (P＜0.05). CD4+T lymphocyte inf i ltration and HER -2 expression, SBR grade (P＜0.05), CD3+T lymphocyte inf i ltration and lymph node status, HER-2 expression, PR expression, ER expression, SBR grading, clinical staging, tumor diameter, age, etc. Conclusion CD3+T lymphocyte inf i ltration was found in the primary foci of breast cancer, and the extent of lesion was affected by the inf i ltration of CD8+T lymphocytes and CD4+T lymphocytes, CD3+T, CD4+T, and CD8+T lymphocytes were related to the prognosis of breast cancer.

Tumor inf i ltration; T lymphocyte; Breast cancer; Primary tumor; Prognosis

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.32.009

探讨应用免疫组化标记检测乳腺髓样癌周边淋巴细胞亚群及临床意义 (G220142SF274)

江西 341000 江西省赣州市市立医院病理科 （郑益红）342700 江西省赣州市石城县人民医院普外科 （温美福） 341000 江西赣州市立医院胸外科（叶新桥） 赣州市立医院病理科（邹欣 邓储婷）