OPN和MMP-9在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

白春侠

OPN和MMP-9在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

白春侠

目的 探讨骨桥蛋白（OPN）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）在膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell carcinoma,BTCC)中的表达及临床意义。方法 选取60例膀胱移行细胞癌患者，同时随机选取20例非肿瘤患者，对其病理组织标本进行检查，观察OPN和MMP-9在膀胱移行细胞癌和正常膀胱组织中的表达以及OPN、MMP-9在膀胱移行细胞癌中的表达与病理特征的关系。结果 OPN主要表达在细胞的细胞浆中，细胞癌组织中总阳性率为80.0%，正常膀胱组织中无阳性表达，OPN在BTCC中的阳性表达水平明显高于正常膀胱组织阳性表达水平，差异有统计学意义（χ2=13.33，P＜0.05）。MMP-9的主要表达在细胞的细胞浆中，正常膀胱组中中无阳性表达，细胞癌组织中总阳性率为68.4%，MMP-9在BTCC中的阳性表达水平明显高于正常膀胱组织阳性表达水平，差异有统计学意义（χ2=6.35，P＜0.05）。OPN在不同病理分级、临床分期、是否复发、肿瘤数量方面的阳性表达率差异均有统计学意义（P＜0.05），MMP-9在病理分级、临床分期、是否复发方面的阳性率差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 OPN和MMP-9在膀胱组织中的表达升高与肿瘤细胞转移和侵袭具有密切关系，检测OPN和MMP-9对膀胱移行细胞癌的诊断和预后判断具有重要参考价值。

膀胱移行细胞癌；骨桥蛋白；基质金属蛋白酶9

膀胱癌是临床常见恶性肿瘤，膀胱移行细胞癌是其中最多发的肿瘤[1]，诱发因素多，发病机制复杂，准确的诊断和预后判断对该病的诊治具有重要意义。骨桥蛋白（OPN）属于一种酸性糖蛋白，生物学功能多样，与多数实体肿瘤细胞的侵袭和繁殖相关[2]。基质金属蛋白酶9（MMP-9)被认为是肿瘤转移、侵袭过程中的一种最重要、最直接的金属蛋白酶。本研究分析了OPN和MMP-9在BTCC中的表达及临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年1月～2014年12月营口市中心医院收治的BTCC患者60例，男38例，女22例，年龄25～84岁，平均（62.5±5.8）岁。患者均经病理学检查确诊，24例为初发肿瘤，36例为复发肿瘤；35例单发，25例多发；17例肿瘤直径＞3 cm，43例肿瘤直径≤3 cm；其中54例行经尿道膀胱肿瘤电切除术，2例行部分膀胱切除术，4例行全膀胱切除术。根据世界卫生组织修订的病理分级：18例G 1、19例G 2、23例G 3。肿瘤分期：21例浅表型、39例浸润型。同时随机选取20例非肿瘤患者的正常膀胱切除组织标本，取自膀胱经活组织检查或开放手术。

1.2 方法 将用作免疫组织化学的玻片在洗洁精术中浸泡24 h，用水流冲洗，蒸馏水漂洗，然后将玻片浸泡在95%乙醇中24 h，蒸馏水漂洗，置入烤箱中彻底干燥。用蒸馏水将多聚-L-赖氨酸溶液稀释10倍，将玻片在稀释液中浸泡1～5 min，45℃烤箱烘干。对所有标本组织进行40%甲醛水溶液处理和石蜡包埋。利用自动切片机将处理好的标本切成4 μm厚的切片3～4张，进行漂片，然后贴附于玻片上，65℃烤箱烘烤4 h。利用梯度乙醇和二甲苯对切片进行逐步脱蜡，用蒸馏水冲洗2次，3 min/次，用PBS冲洗3次，3 min/次。根据抗体说明书，对组织抗原给予相应修复，OPN利用高压高温修复法，MMP-9无需修复。

1.3 结果评价标准 随机选取在400倍光镜下每张切片上的5个视野，每个视野的细胞计数为200，共100个细胞计数；利用显微图像分析系统系统标记具有代表性的阳性视野中的棕黄色颗粒，对所有视野的阳性结果进行标准化检测，蛋白颗粒密度有参数积分光密度表示。细胞无棕色或背景一致为阴性，或阳性细胞＜5%，可判定为阴性：阳性细胞＜25%，判定为阳性；阳性细胞25%～50%为中等阳性；阳性细胞＞50%为强阳性[3]。

1.4 统计学方法 应用SPSS 18.0统计学软件处理数据。计量资料采用“x±s”表示，组间比较采用t检验；计数资料用例数（n）表示，计数资料组间率（%）的比较采用χ2检验；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 OPN的表达 OPN主要表达在细胞的细胞浆中，呈棕黄色颗粒，少见细胞核着色[4]。正常膀胱组织中无阳性表达，细胞癌组织中12例阳性表达（20.0%）、12例阴性（20.0%）、14例中等阳性（23.3%）、22例强阳性（36.7%），总阳性率为80.0%。OPN在BTCC中的阳性表达水平明显高于正常膀胱组织阳性表达水平，差异有统计学意义（χ2=13.33，P＜0.05）。

2.2 MMP-9的表达 MMP-9的主要表达在细胞的细胞浆中，呈棕黄色颗粒，未见细胞核着色[5]。正常膀胱组中中无阳性表达，细胞癌组织中19例阴性表达（31.7%）、14例阳性（23.3%）、8例中等阳性（13.3%）、19例强阳性（31.7%），总阳性率为68.4%。MMP-9在BTCC中的阳性表达水平明显高于正常膀胱组织阳性表达水平，差异有统计学意义（χ2=22.57，P＜0.05）。

2.3 OPN、MMP-9在BTCC中的表达与病理特征的关系OPN在不同性别、肿瘤直径方面的阳性表达率差异无统计学意义；在不同病理分级、临床分期、是否复发、肿瘤数量方面的阳性表达率差异均有统计学意义（P＜0.05），G 1与G 2、G 1与G 3间的阳性率差异有统计学意义（P＜0.05），G 2与G 3间阳性率差异无统计学意义。MMP-9在性别、肿瘤数量、肿瘤大小方面的阳性率差异无统计学意义，在病理分级、临床分期、是否复发方面的阳性率差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

3 讨论

膀胱癌是临床常见泌尿系恶性肿瘤，其中BTCC是发生率最高的肿瘤，具有容易复发、浸润性生长、多中心的特点[6]，随着病情发展，最终可能成为转移性或肌层浸润性细胞癌。相关研究发现，肿瘤侵袭是由多种细胞因子和蛋白基因所决定的[4]，涉及细胞黏附、迁移、增殖等环节。目前临床多通过BTCC的临床分期和病理分级对预后进行评估判断[7]，但肿瘤细胞的转移和浸润是一个复杂的过程，因此预后判断的准确性并不理想。

找到能够准确预测BCTT肿瘤复发、转移、浸润的相关指

标，给予相应治疗，有助于降低复发率、提高患者的生存质量。本研究结果显示，OPN和MMP-9在BTCC组织中的表达高于其在正常膀胱组织中的表达，说明两者在肿瘤细胞转移、浸润过程中发挥一定作用。本研究中，OPN的阳性表达与患者性别、肿瘤数量、肿瘤大小无关，但与病理分级、临床分期及复发情况等有密切联系，在G 2、G 3中的表达明显高于在G 1中的表达，说明OPN在高分化肿瘤组织中的表达低于低分化肿瘤，提示BTCC的病变程度与OPN表达相关。同时，OPN在浅表型肿瘤的表达低于浸润型肿瘤，说明OPN表达与肿瘤细胞的浸润和增殖能力相关。相关研究显示，MMP-9在多种恶性肿瘤中的阳性表达率均较高[8]。本研究中，MMP-9的在BTCC肿瘤组织中的阳性表达率随着肿瘤病理分级的增高而上升，且在浸润型肿瘤中的表达水平更高，说明MMP-9的表达和患者疾病临床分期之间有密切联系。

综上所述，OPN和MMP-9是评估BTCC复发和恶性程度的重要指标，为膀胱癌的临床诊治提供了科学的依据。

[1] 赵建华，王晨宇，罗勇，等.MMP-2、MMP-9在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义[J].国际泌尿系统杂志，2013，33（2）:194-197.

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[3] 段波，梁培禾，吴刚，等.骨桥蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义[J].重庆医学，2007，36（14）：1372-1374.

[4] 戴宇，焦伊胜，王永来，等.骨桥蛋白和基质金属蛋白酶9在上皮性卵巢癌中的表达及二者相关性[J].中国医科大学学报，2009，38（10）：775-776.

[5] 杨立华，尚小领，张凡，等.喉鳞状细胞癌中OPN、MMP-9的表达及意义[J].临床与实验病理学杂志，2012，28（4）：403-405.

[6] 张东涛，袁静，杨力.OPN、IKK-13、NF-κB、 p 65和MMP-9在胃癌细胞中的表达及意义[J].实用医学杂志，2009，25（9）：1359-1361.

[7] 詹自力，苟欣.P 27、cyclin D 1及膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义[J].当代医学，2010，16（24）：31-33.

[8] 杨丽君，陈钟.OPN和MMP-9在结直肠癌中的表达及其与肝转移的相关性[J].当代医学，2012，18（12）：7-9.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.1.013

辽宁 115000 营口市中心医院病理科 （白春侠）