外周血淋巴细胞染色体核型分析在男性染色体异常诊断中的作用

邹畅，梁灼健，林秀华，赵鑫，何慧燕，刘利平，戴勇

(深圳市人民医院临床医学研究中心，广东 深圳 518020)

外周血淋巴细胞染色体核型分析在男性染色体异常诊断中的作用

邹畅，梁灼健，林秀华，赵鑫，何慧燕，刘利平，戴勇

(深圳市人民医院临床医学研究中心，广东 深圳 518020)

目的 探讨外周血淋巴细胞染色体核型分析对诊断男性染色体异常的有效性和必要性。方法对2013年1月至2014年12月期间1 332例临床有生育异常病史的男性，抽取外周静脉血3 ml，分离淋巴细胞进行培养，固定、制片、显带，分析染色体核型。结果在1 332例有生育异常病史的男性中，异常染色体315例，占受检者的23.65%，包括常染色体异常233例，性染色体异常82例。其中常染色体数目异常58例，结构异常76例，性染色体数目异常30例，结构异常10例，染色体多态性改变141例，分别占异常核型18.41%、24.13%、9.52%、3.18%、44.76%。结论基于外周血淋巴细胞的染色体核型分析可及时发现生育期男性染色体异常，对于提升优生优育水平有非常重要的作用。

男性；外周血；淋巴细胞；染色体核型分析；诊断

染色体异常疾病无法治疗，因此对出现异常染色体的胎儿及其父母进行早期筛查对于优生优育具有非常重要的现实意义[1]。外周血淋巴细胞染色体核型分析在男性染色体异常疾病检测中有无法替代的重要作用[2]。本研究对在我中心就诊的1 332例有异常生育史的男性进行了外周血淋巴细胞核型分析，统计染色体异常发生率，研究其在育龄男性染色体异常诊断中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2013年1月至2014年12月来我院遗传咨询门诊进行遗传咨询的1 332例男性患者病因包括异常生育史(包括习惯性流产、胚胎停止发育、畸形儿生育史)和男性生殖系统异常(原发不育、无精子症)以及发育异常(智力低下及发育畸形)等。

1.2 外周血淋巴细胞培养 抽取患者外周静脉血3 ml，肝素抗凝，以0.3 ml接种于RPMI1640培养基中，在37℃培养箱中培养72 h，收获前3 h加入终浓度为0.2 mg/ml的秋水仙素，常规收获细胞。

1.3 染色体标本制备 标本均按我室常规方法制片，G显带，必要时行C带和高分辨显带，每例镜下计数20个分裂相，分析4个分裂相，如有异常加倍分析。

2 结 果

2.1 1332例男性外周血染色体核型分析 共检出异常染色体核型315例(23.65%)。其中常染色体异常233例，占异常核型的73.97%；常染色体数目异常58例，占异常核型的18.41%，常染色体结构异常76例，占异常核型的24.13%。检出异常性染色体82例，占异常核型的26.03%，其中性染色体数目异常30例，占异常核型的9.52%，结构异常10例(包括性反转3例)，占异常核型的3.17%，见表1。

2.2 多态性异常核型分布情况 共检出染色体多态性改变141例，占异常核型总数的44.76%。其中常染色体多态性改变99例，占异常核型总数的31.4%，性染色体多态性改变42例，占异常核型总数的13.3%。核型分布情况如表2所示。

2.3 染色体结构异常核型分布情况 共检出染色体结构异常86例，占异常核型总数的27.3%，其中常染色体结构异常76例，占异常核型总数的24.13%，核型分布情况如表3所示。

表1 1 332例外周血染色体核型分析异常核型分布情况（例）

表2 染色体多态性改变核型分布

表3 常染色体结构异常核型分布

3 讨 论

本研究在有不良生育史及生理异常的1 332例男性中，检测出外周血淋巴细胞染色体异常315例，检出率为23.65%，其中包括染色体数目异常、平衡易位、倒位以及染色体多态性异常等核型。

染色体结构异常包括易位、倒位、缺失等，其中平衡易位是最多见的染色体结构异常，如不引起基因片段的变化，多数没有明显临床症状[1]。但不平衡易位，由于DNA插入突变，有可能引起整条染色体失活。更有甚者，易位若造成染色体特殊片段的失活，就会导致流产、胎儿停止发育，甚至发育成为一个严重智力障碍伴先天性畸形的胎儿[1]。

传统观点认为异染色质与异常表型无相关性。近年的研究表明，异染色质异常有可能影响减数分裂时染色体配对联会，乃至配子形成，从而导致不孕不育[3-5]。本研究中检出染色体多态性123例，其中性染色体多态性42例，这些就诊者大都以生殖异常(流产、性发育异常)为主，有的还伴随智力发育障碍等临床症状，说明染色体多态性改变可能与生殖异常有相关性。更有意思的是，有研究表明，常染色体多态性可能导致异染色质的斑点化，可能造成相关区域内基因表达抑制，从而引起一系列的生殖异常[6-7]。本研究检出常染色体多态性改变81例，其中近一半以上既往有异常生育史。这提示我们，在染色体核型分析检测时特别是对有异常生育史的男性进行核型分析时，如发现染色体多态性改变，应该结合临床进行进一步分析，以降低异常生育的发生，提高优生优育的水平。

9号染色体臂间倒位属于染色体多态性改变还是结构异常，不同的研究一直有不同的结论[8]。然而，近年来越来越多的研究报道，臂间倒位携带者伴有遗传效应[9-11]。本次研究我们共检测出55例9号染色体臂间倒位，都是因为有反复流产或死胎等异常生育史来我中心就诊，占此类患者的4.2%，明显高于正常人群发生率1%[10]，这也提示9号染色体臂间倒位与临床生育异常的相关性。基于本次研究的核型分析结果和临床病史分析，我们将9号染色体臂间倒位归入染色体结构异常。然而，这种臂间倒位是否是这些异常生育史的直接原因，如果是的话能从多大程度上影响妊娠和生育，需要通过前瞻性的临床试验研究做更为深入的探讨。

胚胎染色体异常是反复自然流产(Recurrent spontaneous abortion，RSA)主要的发病原因之一[11]。本研究共从1 332例受检者中检出86例染色体结构异常，其中有60例受检者的配偶有反复流产生育史，检出率高达4.5%，其中Y染色体结构异常10例。这一结果提示，通过细胞遗传学方法，对男方进行外周血淋巴细胞染色体核型分析，对于寻找流产的病因及预防染色体病儿的出生具有非常重要的临床意义。

综上所述，利用细胞遗传学技术进行外周血淋巴细胞染色体核型分析仍是检测男性染色体异常的主要方法，对于智力低下、不良生育史、性发育异常等疾病的细胞遗传诊断具有不可替代的临床价值。结合目前发展迅猛的分子遗传学技术，基于外周血淋巴细胞的染色体核型分析在遗传疾病的早期筛查和优生优育方面将发挥越来越重要的作用。

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Roles of chromosomal karyotype analysis of peripheral blood lymphocytes in the diagnosis of male sex chromosome abnormalities.

ZOU Chang,LIANG Zhuo-jian,LIN Xiu-hua,ZHAO Xin,HE Hui-yan,LIU Li-ping,DAI Yong.Clinical Medical Research Centre,People's Hospital of Shenzhen City,Shenzhen 518020,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo explore the significance and necessity of chromosomal karyotype analysis of peripheral blood lymphocytes in the diagnosis of male sex chromosome abnormalities.MethodsA total of 1 332 male patients with a history of abnormal birth history between January 2013 and December 2014 were selected.Peripheral venous blood(3 ml)was extracted,and lymphocytes were isolated,cultured,fixed,and produced,banded for karyotype analysis.ResultsA total of 315 cases of abnormal karyotypes were found in the 1 332 samples,which accounted for 23.65%out of total subjects,including 233 cases of autosomal abnormalities,82 cases of sex chromosome abnormalities.Among autosomal abnormalities,there were 58 cases of chromosome number abnormality and 76 cases of structural abnormality,accounting for 18.41%,24.13%.Among the sex chromosome abnormalities,there were 30 cases of chromosome number abnormality,10 cases of structural abnormality,and 141 cases of chromosomal polymorphism change, which accounted for 9.52%,3.18%,44.76%,respectively.ConclusionKaryotype analysis of peripheral blood lymphocytes could timely detect male sex chromosome abnormality in child-bearing period,which has significant importance for improving the level of prepotency.

Male;Peripheral blood;Lymphocytes;Chromosome karyotype analysis;Diagnosis

R394.2

A

1003—6350（2016）07—1042—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.07.004

2015-11-24)

国家自然科学基金(编号：81402370)；广东省自然科学基金(编号：2015A030313829)；深圳市科技创新项目(编号：JCYJ20150403101028198)

邹畅。E-mail：alexzou2008@outlook.com