趋化因子CCL17、CCR4、CXCL12在先兆流产中的表达

李 萍，何国英，王凤莲，刘洪珍

（泰山医学院附属医院，山东 泰安 271000）

趋化因子CCL17、CCR4、CXCL12在先兆流产中的表达

李 萍，何国英，王凤莲，刘洪珍

（泰山医学院附属医院，山东 泰安 271000）

目的研究先兆流产者绒毛和蜕膜组织中人胸腺活化调节趋化因子17(CCL17)、基质细胞衍生因子(CXCL12)与CC趋化因子受体4(CCR4)的表达，探讨先兆流产发生的相关免疫学机制。方法应用实时荧光RT-PCR法检测早期妊娠先兆流产和正常早期妊娠行负压吸引清宫术者各30例的绒毛和蜕膜组织中CCL17、CCR4、CXCL12-mRNA的表达水平。结果先兆流产组绒毛、蜕膜组织CCL17-mRNA的表达量为较对照组显著升高差异有统计学意义(P＜0.05)；CXCL12-mRNA的表达量较对照组显著降低(P＜0.05)；CCR4-mRNA的表达量为较对照组显著升高差异有统计学意义(P＜0.05)。结论CCL17、CCR4、CXCL12可能参与在早期流产的发生，并在此过程中发挥了重要作用。

人胸腺活化调节趋化因子；CC趋化因子受体4；基质细胞衍生因子；流产

早期妊娠流产的病因众多，大部分患者首先表现为先兆流产，大多数先兆流产患者首先表现为少量阴道流血或者出现超声提示的宫腔内液性暗区，这两种情况的出现一般是由于绒毛与蜕膜剥离、出血而造成的。该研究旨在探讨趋化因子CCL17、CCR4、CXCL12与早期妊娠先兆流产发生的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年1～6月在泰山医学院附属医院自愿要求终止妊娠的早期妊娠60例，年龄20～35岁，无稽留流产、胚胎发育不良、死胎、死产等不良孕产史，终止妊娠前半年内未使用过甾体激素类药物，流产孕周均在6～9周，其中 30例术前有少量阴道流血，无妊娠物排出，妇科检查无宫颈口扩张或妊娠物排出，B 超示孕囊周围可见液性暗区或提示“先兆流产”，后行负压吸引清宫术者为先兆流产组；B 超提示无任何异常行负压吸引清宫术的正常早期妊娠妇女为对照组。所有对象妇科检查均排除阴道炎症、急慢性宫颈炎等其他炎性病变，签署知情同意书后纳入本研究。两组研究对象的基本情况比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 研究方法

（1）于负压吸引清宫术中无菌条件下选取新鲜绒毛、蜕膜组织约0.3g，立刻用焦碳酸二乙酯水冲洗，然后投入液氮保存。（2）提取总RNA。（3）按RTPCR试剂盒说明进行逆转录，获得cDNA，用实时荧光定量PCR仪（Roche公司）完成定量检测；β-肌动蛋白由天津六合通生物技术有限公司合成，并作为内参；应用Gene runner软件系统设计特异性引物和探针。引物序列如下: CXCL12: FW:AGATGCCCATGCCGATTCTTC RV:G C A C A C T T G T C T G T T G T T G T T C T T C; C C L 1 7: F W: G G G A G T G C T G C C T G G A G TA C R V: T A C A A A A A C G A T G G C A T C C C T；CCR4:FW: GCCTCCAAGACAGACTTCCTTG RV: GCGTTCGGTTCTAGTTTCCAC。

1.3 统计学方法

应用SPSS 13.0统计软件分析处理，所得计量数据以“±s”表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组研究对象绒毛、蜕膜组织CXCL12–mRNA表达量的比较

先兆流产组绒毛组织中CXCL12–mRNA表达量均显著低于对照组，先兆流产组蜕膜组织中CXCL12–mRNA表达量亦显著低于对照组差异有统计学意义（P＜0.05)。详见表1。

表1 两组绒毛、蜕膜CXCL12–mRNA表达量比较（x+s）

2.2 两组研究对象绒毛、蜕膜组织CCL17–mRNA表达量的比较

先兆流产组绒毛组织中CCL17–mRNA表达量显著高于对照组，先兆流产组蜕膜组织中CCL17–mRNA表达量亦显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05)。详见表2。

表2 两组绒毛、蜕膜CCL17–mRNA表达量比较（x+s）

2.3 两组研究对象绒毛、蜕膜CCR4–mRNA表达量的比较

先兆流产组绒毛组织中CCR4–mRNA表达量显著高于对照组，先兆流产组蜕膜组织中CCR4–mRNA表达量亦显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05)。

3 讨 论

研究表明[1]母胎界面免疫耐受异常是流产发生原因之一，免疫耐受平衡遭到破坏可以导致流产的发生。本研究结果显示，趋化因子CCL17、CXCL12、CCR4-mRNA在人早期妊娠绒毛和蜕膜组织中均有的表达。CXCL12主要在滋养细胞的增殖、分化和侵蚀中发挥作用，并且可以趋化滋养细胞定向移动到蜕膜间质及血管，从而在囊胚的植入过程中发挥协助作用[2]；同时CXCL12还参与了蜕膜中CD16-CD56+NK细胞亚群的募集和迁移，而该细胞亚群对胚胎可以起到免疫耐受和营养作用。CCL17是Th2 细胞的特异性趋化因子，可以通过募集更多的CD4+CD25+Treg 到母胎界面，从而限制效应性T细胞或清除抗原特异性T 细胞使母胎免疫耐受成功发挥作用而维持正常妊娠[3]。CD4+CD25+T 细胞可大量表达CCR4，CCR4作为CCL17的高亲和力受体，通过与CCL17 结合来完成趋化作用，二者结合后引起分子构象的改变，导致胞质内Ca2+浓度增高及蛋白激酶C活化，引起靶细胞效应，参与免疫细胞的调节分化，在滋养层细胞侵入、蜕膜化反应和血管重铸等关键环节促成了局部免疫耐受状态的建立和维持。

本研究结果表明先兆流产患者中CCL17、CXCL12、 CCR4的调节异常可能影响了母胎界面淋巴细胞表型，数量及功能，尤其使得巨噬细胞数量和免疫活性及功能发生异常，Th1/Th2平衡失调，NK细胞的功能异常，使得具有免疫排斥功能的CD16+CD56+NK细胞占优势，从而不利于维持正常妊娠的母胎界面免疫微环境出现，利于正常妊娠维持的免疫耐受环境遭到破坏，诱发了母体对囊胚的排斥反应，导致先兆流产的发生。

总之，CCL17、CXCL12、CCR4是对正常妊娠维持非常重要的细胞因子，本研究发现CCL17、CXCL12、CCR4在先兆流产中的异常表达，可能参与了先兆流产的发生，但在流产发生中的具体作用机制我们尚不清楚，有待于进一步研究来验证。

[1] Orie N. Children immunology, what can we learn from animals studies: decidual cells induce specific immune system of fetomaternal interface. J Toxicol Sci, 2009, 34(2):SP331-9.

[2] 顾 艳,张慧琴.趋化因子及其受体与复发性流产(J).生殖与避孕,2014,7(7):548-554.

[3] 刘玉昆,刘梅兰,王蕴慧,等.母胎界面树突状细胞CCL17和CCL22表达在母胎免疫耐受中的作用[J].中国病理生理杂志,2012,28(6):1061-1065．

R714.21

A

ISSN.2095-8803.2016.12.017.02