原发性干燥综合征患者外周血中IL-10和TGF-β1的表达水平及其临床意义

郑健 王莉 朱蓉 竺红△

(1.宁夏医科大学，宁夏 银川 750004；2.宁夏医科大学总医院风湿科，宁夏 银川 750004)



·实验研究·

原发性干燥综合征患者外周血中IL-10和TGF-β1的表达水平及其临床意义

郑健1王莉2朱蓉2竺红2△

(1.宁夏医科大学，宁夏 银川 750004；2.宁夏医科大学总医院风湿科，宁夏 银川 750004)

目的 探讨白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β1(TGF-β1)在原发性干燥综合征(pSS)发病中的作用。方法 酶联免疫吸附试验(ELISA)测定56例pSS患者(pSS组)及39例健康体检者(正常对照组)血清中IL-10和TGF-β1的表达水平，比较治疗前、后pSS患者与正常健康对照组血清IL-10和TGF-β1表达水平之间的差异及相关性，并比较其与ESR、Ig、C3、C4之间的相关性。结果 pSS患者血清IL-10和TGF-β1表达水平在pSS患者中血清的表达水平显著高于健康对照组正常人(P<0.05)，经治疗后，其血清IL-10和TGF-β1表达水平较治疗前均显著减低，差异有统计学意义(P<0.05)，血清IL-10和TGF-β1表达水平呈正相关性(r=0.613，P<0.05)；血清IL-10和TGF-β1表达水平与ESR呈正相关性(r=0.592，P<0.05；r=0.316，P<0.05)。结论 IL-10和TGF-β1参与pSS的发病过程且与疾病活动性相关。

转化生长因子-β1； 白细胞介素-10； 干燥综合征

原发性干燥综合征 (pSS) 是一种以口干、眼干为特征，主要累及外分泌腺的慢性系统性自身免疫性疾病，可累及肺、肾和神经系统等, 病理上以淋巴细胞浸润为特征[1]。何春华等[2]报道由活化的免疫细胞和一些非免疫细胞经刺激合成、分泌的炎性相关因子，在介导和调节免疫应答及炎症反应方面发挥了重要的作用。调节性B淋巴细胞(Bregs)可以通过产生白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β1(TGF-β1)等负性免疫调节因子，介导免疫耐受，抑制免疫活性细胞的产生。本研究检测了治疗前后pSS患者外周血中IL-10和TGF-β1的表达水平改变，并分析其与ESR、Ig、C3、C4之间相关性，以初步了解其在pSS发病及进程中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2010年4月至2015年4月在宁夏医科大学总医院确诊的56例pSS患者(pSS组)，均为初诊或者未接受糖皮质激素和免疫抑制剂治疗，按照SS疾病活动指数(SSDAI)计分对患者临床活动度进行评估[3]，患者病情均处于活动期。pSS组：男18例，女38例，年龄17～76岁，平均(54.4±12.8)岁。病程2个月至23年，平均(7±4)年。所有病例诊断均符合2002年干燥综合征国际分类诊断标准[4]。排除标准：(1)感染；(2)肿瘤；(3)肾功能衰竭；(4)其他免疫性疾病。选择同期体检的39例健康者(正常对照组)，男性9例，女性30例，年龄13～74岁，平均(51.3±11.9)岁。均无自身免疫性疾病，无其他疾病史及自身免疫病家族史。pSS组与健康对照组性别、年龄、身高、体质量差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经过宁夏医科大学总医院伦理委员会审批，所有入选对象的家属均知情并同意。

1.2 主要试剂与仪器 人IL-10、TGF-β1 ELISA试剂盒购武汉华美cusabio公司，酶标仪购BioTek公司，HF 212UV CO2培养箱。

1.3 试验方法 无菌抽取晨空腹静脉血2 mL分离血清，离心析出血清后300 μL/管分装，置于-70 ℃冰箱冻存备测。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IL-10、TGF-β1的含量，严格按照试剂的说明书进行操作。TGF-β1的活化：在检测TGF-β1之前需要对血清进行酸化和中处理，以激活血清中的TGF-β1。采用BioTek公司的酶标仪检测，在450 nm处测光密度(OD值)，绘制标准曲线，计算IL-10、TGF-β1的浓度值。

2 结 果

2.1 pSS患者血清中IL-10、TGF-β1的表达水平 pSS患者血清中IL-10治疗前表达水平与正常对照组表达水平(t=3.16，P<0.05)及治疗后表达水平比较(t=2.97，P<0.05)差异有统计学意义。pSS患者血清中TGF-β1治疗前表达水平与正常对照组表达水平(t=2.13，P<0.05)及治疗后表达水平比较,差异有统计学意义(t=2.33，P<0.05)。

2.2 pSS患者血清中IL-10、TGF-β1的相关性 pSS患者血清中IL-10和TGF-β1呈正相关性，差异有统计学意义(r=0.613，P<0.05)。

2.3 pSS患者治疗前血清中IL-10、TGF-β1与相关检测指标之间的相关性分析 pSS患者相关检测指标：ESR：(32±24) mm/h，RF：(39±17) U/mL，IgG：(20.16±7.28) g/L，IgA：(2.93±1.27) g/L，IgM：(1.37±0.73) g/L，C4：(0.27±0.03) g/L，C3:(1.26±0.32) g/L。相关性分析，显示pSS患者血清IL-10与ESR(r=0.592，P<0.05)呈正相关、IgG浓度(r=0.531，P<0.05)、补体C4(r=-0.271，P<0.05)呈负相关性。血清TGF-β1与ESR呈正相关性(r=0.316，P<0.05)，而TGF-β1与IgA、IgM、补体C3、C4、RF、IgG浓度无相关性。

2.4 治疗 56例pSS患者，经醋酸泼尼松5～10 mg 次/d口服或者醋酸泼尼松5～10 mg 次/d联合硫酸羟氯喹0.2 g qd 口服治疗，39例症状改善明显，17例病情未进展。

3 讨 论

pSS是一种由淋巴细胞介导的主要损伤外分泌腺(泪腺、唾液腺等)的全身性自身免疫病，免疫及炎性相关因素在pSS的发病过程中起了重要作用，细胞因子在介导和调节免疫应答及炎症反应方面有极其重要的作用。Bregs细胞是一类具有免疫抑制作用的B细胞亚群，可以通过分泌IL-10和TGF-β1等细胞因子，抑制包括Th1型和Th2型炎症效应在内的T细胞依赖性的免疫效应，调节Th1和Th2之间的平衡，抑制部分自身免疫性疾病和过敏性疾病的发生进展等。

IL-10作为一种细胞因子，可以通过阻断促炎因子、趋化因子等作用，发挥抗炎效应。IL-10可以抑制Th1及Th2分泌细胞因子，激活B淋巴细胞，从而产生机体[5]。作为一种多功能负性调节因子，具有下调炎症反应，拮抗炎症介质的作用。本组治疗前血清中IL-10的表达水平与ESR呈正相关性(r=0.592，P<0.05)，从而说明IL-10与炎症反应有关。本研究发现，pSS治疗前血清IL-10表达水平较健康对照组的血清IL-10表达水平高，可以抑制免疫过度活化，发挥免疫下调的作用，利于患者病情的好转，随着病情的缓解，炎症反应减轻，治疗后pSS血清IL-10表达水平下降。有文献报道[6]IL-10的单克隆抗体能抑制炎症反应的程度，从而达到治疗疾病的目的。因此通过调节pSS患者体内IL-10水平，从而发挥Bregs细胞的调节作用，可以有效地控制病情变化。

TGF-β1作为一种负性免疫调节因子，能抑制免疫活性细胞的增殖和分化，以及细胞因子和抗体的产生，具有免疫抑制效应[7]。本组治疗前血清中TGF-β1表达水平与ESR呈正相关性(r=0.316，P<0.05)，说明TGF-β1与pSS的疾病活动有关，在疾病的活动期，患者体内炎症反应增强，TGF-β1含量升高，抑制免疫反应，从而发挥抗炎效应。文献报道[8]， TGF-β1的免疫抑制功能较其他细胞因子更强，广泛参与免疫细胞之间的相互作用，抑制免疫活性细胞的增殖和分化，有效抑制细胞因子及抗体的产生[9]。本组治疗前pSS患者外周血中TGF-β1的表达水平高，考虑为机体反馈性抑制免疫反应的结果。张志强等[10]报道TGF-β1与IL-10可以共同作用，通过抑制一氧化氮(NO)的产生而干扰IFN-r对巨噬细胞的活化。治疗后炎症反应减轻，TGF-β1表达水平降低，提示TGF-β1作为机体重要的负性调节因子，为疾病的转归起到了推动作用。本研究结果显示，pSS患者在治疗前血清中IL-10和TGF-β1表达水平呈正相关性(r=0.61，P<0.05)，提示IL-10和TGF-β1与pSS的疾病活动性有关。

总之，pSS患者治疗前血清中IL-10和TGF-β1高表达，且疾病活动，炎症指标升高，推测因炎症反应，Bregs细胞分泌的IL-10和TGF-β1增多，经治疗后，pSS患者血清中IL-10和TGF-β1表达水平降低，炎症指标下降，提示相关炎性细胞因子产生减少，炎症反应被有效阻断，提示IL-10和TGF-β1参与pSS发病过程，并与疾病活动性相关。

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宁夏医科大学重点孵育项目(XZ2013)

R593.2

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1000-744X(2016)05-0474-02

2015-07-18)

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