某规模奶牛场隐形乳房炎病原菌分离鉴定及药敏试验

杜海燕　河南省新乡市动物疫病预防控制中心　453000韩俊伟　李 磊　常卫波　河南省新乡市动物卫生监督所 453000

某规模奶牛场隐形乳房炎病原菌分离鉴定及药敏试验

杜海燕河南省新乡市动物疫病预防控制中心453000
韩俊伟李 磊常卫波河南省新乡市动物卫生监督所 453000

奶牛隐形乳房炎是奶牛发生最多的一种亚临床型乳房炎，乳房和乳汁无肉眼可见异常，但在乳汁检查中的体细胞数往往增加，乳中能检出致病菌。隐形乳房炎流行面广，是临床型乳房炎发展的基础。由于隐形乳房炎无临床症状表现，往往被忽视。奶牛乳房炎的发病原因众多，微生物的侵入是引发乳房炎的主要原因，包括细菌、支原体和病毒等，主要由革兰氏阳性菌引起。为了解某规模奶牛场隐形乳房炎的发生情况，对该奶牛场无奶牛乳房炎临床症状的泌乳期奶牛进行检测。现将调查情况汇报如下。

1　材料与方法

（1）奶牛乳房炎的排查。用C.M.T诊断试剂对165份无乳房炎临床症状泌乳期奶牛进行隐形乳房炎排查。随机选取无乳房炎临床症状的泌乳期奶牛的乳样加入到诊断盘中，倾斜诊断盘45°，流出多余乳汁，加入等量C.M.T诊断液，然后平持诊断盘旋转动，使诊断液与乳汁充分混合，于10秒后观察结果。乳汁无变化，不出现凝块为阴性；有微量沉淀，但不久消失为可疑；部分形成凝胶块为弱阳性；完全形成凝胶块，转动时凝胶向中央集中，停止转动时凝块呈凹凸附着于盘底为阳性。完全形成凝胶块，转动时凝块向中央集中，停止转动则恢复原状，并附着于盘底。

（2）乳样的采集。针对 C.M.T检测呈现阳性的奶牛进行乳样收集，先用消毒液清洗乳房，弃去头3把奶，然后以无菌操作方式挤下约10mL左右奶样于灭菌试管中加盖密封，共收集25份阳性乳样进行实验室检测。

（3）细菌的分离培养。将所采集乳样摇匀后，无菌取适量试管中部乳样，涂布于鲜血平板琼脂上，37℃培养24小时，观察细菌的生长情况及其菌落特征。挑取典型菌落，革兰氏染色镜检，根据菌体形态及染色特性初步判定细菌类属，并将其进一步纯化培养和生理生化鉴定。

（4）生化试验。将分离到的细菌接种到相应的生化鉴定培养基中，分别进行培养特性和生理生化鉴定，葡萄球菌通过乳糖试验、兔血浆凝固酶试验、过氧化氢酶试验、甘露醇试验等进行判定；链球菌进行溶血试验、美兰牛乳试验、七叶苷水解试验、马尿酸钠和血清菊糖发酵试验等进行判定。

（5）药敏试验。采用药敏纸片法对主要病原菌进行药物敏感性试验，即将分离鉴定的主要病原菌分别均匀涂布于鲜血琼脂平板上，然后贴药敏纸片于其上，置37℃培养24小时，测量抑菌圈直径。

所选抗菌药有青霉素、氟哌酸、先锋霉素V、红霉素、庆大霉素、利福平、丙氟哌酸、卡那霉素、红霉素和链霉素共10种。

2　结果与分析

（1）细菌分离鉴定结果。对25份阳性乳样进行细菌分离培养和鉴定，分离到各种细菌43株，其中革兰氏阳性菌 37株，所占比例为 77.08％，其他菌占22.92％。在所分离的37株革兰氏阳性球菌中，葡萄球菌21株、链球菌16株。由此可以看出，该规模奶牛场隐形乳房炎的病原菌主要是葡萄球菌，其次是链球菌。

（2）药敏试验结果。对主要病原菌进行药敏试验，结果表明葡萄球菌和链球菌对丙氟哌酸、氟哌酸、先锋霉素V类药物高度敏感，选择敏感性较高的药物对隐型乳房炎主要致病菌具有良好的抑菌效果，而临床上常用的抗生素如青霉素类和链霉素类等的抑菌效果很差。

3　讨论

（1）通过对该规模场奶牛乳样的检测，发现引起该规模场奶牛隐形乳房炎的主要病原菌是葡萄球菌，其次是链球菌。这与已经报道的引起隐形乳房炎致病菌中的菌种一致。引起奶牛隐形乳房炎的发生与牛场的卫生条件和环境因素有关，保持良好的环境卫生，对防止奶牛乳房炎有着重要意义。牛舍运动场地应清洁、干燥，及时清理粪便、积水。定期对运动场和牛舍进行消毒，乳房炎高发季节就加强消毒。牛舍要通风良好，夏季防暑降温，冬季要防风保暖，减少环境应激反应，消除环境因素影响，提高奶牛免疫力，才能有效地预防和控制奶牛隐形乳房炎的发生与流行。

（2）引起隐形乳房炎的主要病原菌对临床上常用的抗生素如青霉素类、链霉素类等的抑菌效果很差，说明病原菌已有很强的耐药性，抗生素作为治疗药物在奶牛乳房炎的控制中起了重要作用，但抗生素的残留导致奶制品的污染。加强奶牛场卫生安全意识，尽量少用或不用各类抗生素类药物。对隐形乳房炎的发病奶牛可采用中草药治疗或中西结合疗法进行治疗。应定期检测奶牛，及时发现隐形乳房炎病牛，并及早治疗。加强疾病的预防，按规定接种疫苗，如接种金黄色葡萄球菌疫苗，降低乳房炎发生率，有效控制该病的发生。