串联质谱用于检测湿疹儿童维生素D水平的临床研究

沈永顺 赖爱萍 凌素环 王虎 程雅婷

串联质谱用于检测湿疹儿童维生素D水平的临床研究

沈永顺 赖爱萍 凌素环 王虎 程雅婷

目的研究分析串联质谱用于检测湿疹儿童维生素D水平的临床应用价值。方法200例儿科门诊治疗的湿疹患儿作为观察组,同期进行体检的200例儿童中作为对照组,对比分析两组的血清维生素D水平以及T淋巴细胞亚群,并分析维生素D水平与T淋巴细胞亚群相关性,予以观察组患儿糠酸莫米松凝胶外用患处,2次/d、口服维生素D3400 IU,1次/d,治疗30 d后再检测观察组治疗后上述指标的变化。结果治疗前两组的总维生素D及维生素D3水平比较差异具有统计学意义(P<0.05)；观察组与对照组CD8+CD28+及CD28+分布为(22.7±2.6)、(64.3±6.8)%和(19.2±4.6)、(44.7±5.3)%,观察组明显高于对照组(P<0.01)；观察组CD8+CD28-百分比为(5.8±2.6)%,明显低于对照组的(8.2±2.3)%(P<0.01)。随着维生素D水平的下降,CD8+CD28+及CD28+的百分比逐渐上升,CD8+CD28-的百分比不断下降,观察组经过治疗后,维生素D水平明显上升。结论串联质谱对于检测湿疹儿童维生素D水平的具有重要的临床应用价值。

串联质谱检测；维生素D；湿疹；儿童

随着社会经济的不断发展,医疗技术随之进步,质谱检测在临床医学检验中的应用价值已经得到广泛的认可。气相、高效液相色谱联用技术以及串联质谱技术很大程度扩展了质谱技术的应用范围,其中串联质谱检测技术已经成为临床生化检验中较为常用的检测手段［1］。儿童湿疹是一种变态反应性皮肤病,也叫过敏性皮肤病,目前临床认为导致本病发生的主要原因是对吸入物、食物以及接触物过敏或不耐受导致,患儿主要的临床表现为起病初期皮肤发红、皮疹,皮肤脱屑,湿疹患儿遇热或遇湿均可加重临床表现［2］。本文主要针对串联质谱用于检测湿疹儿童维生素D水平的临床应用价值进行探究。

1 资料与方法

1.1 一般资料 从2013年5月～2014年5月深圳市大鹏新区妇幼保健医院儿科门诊治疗的湿疹患儿中随机选取200例作为观察组,并同期在深圳市大鹏新区妇幼保健医院进行体检的儿童中随机选取200例作为对照组。观察组男120例,女80例,年龄1～12岁,平均年龄(6.48±3.41)岁；对照组男109例,女91例,年龄1～11岁,平均年龄(6.15±3.67)岁。所有研究对象于研究前2周均未应用皮质类固醇激素以及抗组织胺药物。两组性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.2 仪器与方法 检查仪器：采用的仪器包括Quantum Access型三重四级杆串联质谱仪和Surveyor型高效液相色谱仪。试剂包括去离子水、甲醇、乙酰胺。检查时间：所有的患者均于空腹采集静脉血,静置后离心。

1.3 治疗方法 对观察组患儿进行糠酸莫米松凝胶外用患处［3］,2次/d、口服维生素D3400 IU,1次/d,治疗30 d后再检测观察组治疗后上述指标的变化。

1.4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数± 标准差(±s)表示,采用t检验；计数资料采用χ2检验；相关性检验采用Pearson分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组研究对象血清维生素D水平检测结果 两组研究对象总维生素D及维生素D3水平比较差异统计学意义(P<0.05)。治疗后观察组患者的维生素D水平明显上升。见表1。

2.2 两组T淋巴细胞亚群分析 观察组与对照组CD8+CD28+及CD28+分布为(22.7±2.6)、(64.3±6.8)%和(19.2±4.6)、(44.7± 5.3)%,观察组明显高于对照组(P<0.01)；观察组CD8+CD28-百分比为(5.8±2.6)%,明显低于对照组的(8.2±2.3)%(P<0.01)。见表2。

表1 两组血清维生素D水平检测结果比较(±s,ng/ml)

表1 两组血清维生素D水平检测结果比较(±s,ng/ml)

注：与对照组比较,aP<0.05；与本组治疗后比较,bP<0.05

指标 观察组(n=200) 对照组(n=200) 观察组治疗后(n=200)总维生素D 23.78±2.37ab 31.52±4.20 26.84±3.45维生素D2 4.29±2.48ab 3.29±5.82 3.45±2.05维生素D3 23.03±2.06ab 29.16±4.92 25.79±3.94

表2 两组外周血T淋巴细胞亚群比较 (±s,%)

表2 两组外周血T淋巴细胞亚群比较 (±s,%)

注：与对照组比较,aP<0.01

组别 例数 CD8+ CD8+CD28+ CD8+CD28- CD28+观察组 200 24.5±4.0 22.7±2.6a 5.8±2.6a 64.3±6.8a对照组 200 25.6±4.3 19.2±4.6 8.2±2.3 44.7±5.3观察组治疗后 200 24.9±4.2 20.1±3.0 6.9±2.5 56.3±6.1t1.54 16.32 13.68 33.78P>0.05 <0.01 <0.01 <0.01

2.3 维生素D水平与T淋巴细胞亚群相关性 随着维生素D水平的下降,CD8+CD28+及CD28+的百分比逐渐上升,CD8+CD28-的百分比则在不断的下降。见表3。可见CD8+与维生素D水平无相关性,CD8+CD28+、CD28+淋巴细胞亚群百分比与维生素D水平呈负相关,CD8+CD28-则与维生素D水平呈正相关。见表4。

表3 各组外周血T淋巴细胞亚群比较(±s,%)

表3 各组外周血T淋巴细胞亚群比较(±s,%)

组别 例数 CD8+ CD8+CD28+ CD8+CD28- CD28+观察组1 18 22.8±3.8 23.5±3.9 5.5±1.8 69.2±7.5观察组2 60 22.8±3.6 22.7±2.7 5.8±1.5 66.9±8.6观察组3 122 24.6±3.7 21.5±2.5 7.2±3.5 58.6±7.1对照组 200 25.6±3.3 18.6±2.8 8.7±3.6 47.2±6.5t1.44 15.12 12.78 35.10P>0.05 <0.01 <0.01 <0.01

表4 不同T淋巴细胞亚群与维生素D水平的Pearson分析

3 讨论

维生素D是机体生长发育所必需的一类物质,其来源主要为从食物获取以及由机体皮肤合成［4］。机体维生素D经过肾脏以及肝脏等在体内羟化作用后,生成25(OH)D3以存在于机体血液循环中。25(OH)D3经1α-羟化酶进一步进行羟化作用,可变为生物活性更为强大的1,25(OH)2D3。正常情况下机体内的单核细胞可在1,25(OH)2D3的介导作用下进一步的分化和成熟,逐渐转变为免疫活性更强的巨噬细胞。同时在1,25(OH)2D3的刺激作用下,巨噬细胞产生分泌产生前列腺素E2,从而对趋化因子以及炎症细胞因子的分泌起到抑制性作用。维生素D对机体树突状细胞的作用同时具有一定的调节性。机体的抗原递呈主要依靠树突状细胞,根据树突状细胞的来源可将其分为淋巴系以及髓系两大类。1,25(OH)2D3可对机体树突状细胞的分化以及成熟起到一定程度的抑制性作用,使树突状细胞处于未成熟状态,从而使共刺激分子以及主要组织相容性抗原-Ⅱ(MHC-Ⅱ)的表达水平下调,进一步抑制白细胞介素-2(IL-2)以及干扰素-γ(IFN-γ)的分泌作用,促使白细胞介素-10(IL-10)的分泌。从而使得机体树突状细胞凋亡,对机体的Th1反应起到间接性的抑制作用。另外,活化T细胞的分化也受到机体1,25(OH)2D3的影响。上述指出,1,25(OH)2D3可抑制机体IL-2以及IFN-γ的分泌作用,对机体的Th1细胞反应产生抑制,同时其还可通过促使机体IL-4、IL-5以及IL-10等的产生,起到对Th2细胞反应的增强作用。在1,25(OH)2D3对机体Th1/Th2细胞反应进行相关调节的同时,间接对B细胞的活化增殖起到抑制作用,同时降低机体Ig的分泌产生。维生素D在机体的免疫调节中起到极为重要的作用。

儿童湿疹的发生主要与机体的免疫细胞反应相关,湿疹患儿主要存在体液免疫以及细胞免疫的失衡状态。当Ⅰ型速发型变态反应发生时,受到致敏物质的刺激作用,IgE抗体不断产生,与朗格汉斯细胞表面的IgE受体结合并作用,产生砌墙的致敏状态,诱发湿疹皮损。Ⅳ型迟发性变态反应发生时,T细胞受到抗原刺激而致敏,机体的Th1/Th2细胞的动态平衡状态受到严重破坏,机体细胞因子的分泌处于极度紊乱状态,从而诱发湿疹炎症性反应的发生以及不断发展。而维生素D具有对机体IgE水平以及Th1/Th2细胞反应的动态平衡状态进行调节的作用,因此通过对机体维生素D水平高低的检测可在一定程度上反应儿童湿疹发生的状态。

本次研究结果显示,采用串联质谱检测血清维生素D发现,患有湿疹的患儿血清维生素D水平明显低于健康儿童,并且湿疹患儿经过治疗后,血清维生素水平升高,此外两组T淋巴细胞亚群比较,观察组患儿CD8+CD28+及CD28+百分比均高于对照组,而CD8+CD28-百分比则较对照组低(P<0.01)。并且随着维生素D水平的下降,CD8+CD28+及CD28+的百分比逐渐上升,CD8+CD28-的百分比则在不断的下降。并且经过治疗后观察组维生素D水平明显上升。

综上所述,串联质谱在检测湿疹儿童维生素D水平具有重要的应用价值。

［1］郭守东,崔华东,桑慧,等.液相串联质谱法检测糖尿病患者血浆25-羟基维生素D3.泰山医学院学报,2014,35(3):161-164.

［2］Allen KJ,Koplin JJ,Ponsonby AL,et al.Vitamin D insufficiency is associated with challenge-proven food allergy in infants.Journal of Allergy & Clinical Immunology,2013,131(4):1-6.

［3］Wang SS,Hon KL,Kong APS,et al.Eczema phenotypes are associated with multiple vitamin D pathway genes in Chinese children.Allergy,2014,69(1):118-124.

［4］黄新文,杨建滨,童凡,等.串联质谱技术对新生儿遗传代谢病的筛查及随访研究.中华儿科杂志,2011,49(10):765-770.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.20.123

2016-09-28］

518120 深圳市大鹏新区妇幼保健院儿科(沈永顺赖爱萍 凌素环 王虎)；广州金域医学检验中心(程雅婷)