复方紫草油对湿疹模型小鼠血清IL-2、TNF-α水平的影响

章 莉 高宜云 顾科峰 傅伟浩

复方紫草油对湿疹模型小鼠血清IL-2、TNF-α水平的影响

章 莉 高宜云 顾科峰 傅伟浩

目的观察复方紫草油对湿疹模型小鼠血清IL-2、TNF-α水平的影响，探讨复方紫草油治疗湿疹的作用机制。方法将60只健康小鼠分为正常组、中药高浓度组、中药低浓度组、西药组、模型组，每组12只，建立湿疹小鼠模型，观察各组治疗前后小鼠耳片重量、厚度变化，ELLES法测血清IL-2、TNF-α变化。结果中药高浓度组小鼠平均耳片质量差（3.56±0.60）mg、厚度差（0.20± 0.09）mm以及血清IL-2、TNF-α[（5.01±0.54）pg/mL，（74.13±3.91）pg/mL]水平均低于中药低浓度组[（5.46±1.24）mg，（0.40±0.17）mm，（5.66±0.48）pg/mL，（78.12±2.02）pg/mL]和模型组[（8.78±1.12）mg，（0.54±0.16）mm，（6.43±0.63）pg/mL，（85.61±5.10）pg/mL]（P均＜0.05），与西药组 [（2.86±0.69）mg，（0.10±0.07）mm，（4.80±0.58）pg/mL]比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论中高剂量复方紫草油能降低湿疹模型小鼠的炎症反应，并能降低血清IL-2、TNF-α水平。

小鼠；湿疹；复方紫草油；IL-2；TNF-α

1 实验材料

1.1 实验动物 ICR系小鼠，雄性，平均体质量25.811.55g，浙江中医药大学实验动物中心提供，合格证：SCKX（沪）2013-0016。

1.2 实验药物 2、4二硝基氯苯（DNCB）（东京仁成工业株式会社，批号C0162），适量DNCB加入丙酮配制成7%、0.1%浓度的两种溶液。丁酸氢化可的松软膏（天津金耀药业有限公司,批号1503559）。复方紫草油（紫草、黄芩、生大黄、麻油、亚麻籽）加热80℃，15～20min（以紫草轻度变焦炭为度），待油冷却后过滤，备用。

1.3 仪 器 离心机：北京医用离心机厂，FA-B型电子天平：湖北好美佳仪器设备有限公司，皮肤圆形打孔器（直径8mm）：上海医疗设备厂，电子数显卡尺：桂林量具刃具厂。

1.4 试 剂 鼠IL-2、TNF-α试剂盒（批号E20151 20903、E2015120907）。

2 实验方法

2.1 造 模 参照文献[1]方法，取小鼠60只，按完全随机设计原则，分为空白对照组（空白组）、2，4-二硝基氯苯模型组（模型组）、50%中药低浓度组（中低组）、100%中药高浓度组（中高组）、丁酸氢化可的松乳膏西药对照组（西药组），每组12只，用7%的2,4-DNCB溶液在小鼠的背部及腹部剪毛区域致敏，第二天加强致敏1次。5天后，小鼠左耳廓均匀涂1% DNCB溶液，每隔3天激发1次，共激发4次，并分别于每次激发后24h用螺旋测微器测定小鼠耳肿胀度。中低组、中高组和西药组分别以相应浓度的药液给小鼠耳部外涂治疗，每天2次，连续12天，空白组以及模型组未给予特殊处理。

2.2 观察指标 末次给药后2h，剪下小鼠双耳，用直径8mm的皮肤打孔器分别在左右耳对称部位打下圆形耳片,测量圆形耳片厚度,称重,分别记录左右耳片的厚度、质量，计算耳片厚度差和质量差。采血测IL-2、TNF-α（ELISA法）水平（详细操作按试剂盒说明书进行）。

2.3 统计学方法 所得数据用SPSS19.0统计软件进行方差分析，组间差异用q检验。

3 实验结果

3.1 各组小鼠耳片质量及厚度比较 中高组小鼠耳片重量和厚度差与中低组和模型组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），与西药组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 各组小鼠耳片质量和厚度差比较（±s）

表1 各组小鼠耳片质量和厚度差比较（±s）

注：与正常组比较，*P＜0.05；与中高组比较，△P＜0.05；中低组：中药低浓度组，中高组：中药高浓度组，西药组：丁酸氢化可的松乳膏组

组别正常组中低组中高组西药组模型组只数12 12 12 12 12耳片质量差（mg）1.62±0.46 5.46±1.24*△3.56±0.60* 2.86±0.69* 8.78±1.12*△耳片厚度差（mm）0.02±0.05 0.40±0.17*△0.20±0.09* 0.10±0.07* 0.54±0.16*△

3.2 各组小鼠血清IL-2、TNF-α含量比较 中高组小鼠血清IL-2、TNF-α低于中低组和模型组（P＜0.05），与西药组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 各组小鼠血清IL-2、TNF-α含量比较（pg/mL±s）

表2 各组小鼠血清IL-2、TNF-α含量比较（pg/mL±s）

注：与正常组比较，*P＜0.05；与中高组比较，△P＜0.05；中低组：中药低浓度组，中高组：中药高浓度组，西药组：丁酸氢化可的松乳膏组

组别正常组中低组中高组西药组模型组只数12 12 12 12 12 IL-2 3.57±0.51 5.66±0.48*△5.01±0.54* 4.80±0.58* 6.43±0.63*△TNF-α 12.40±1.22 78.12±2.02*△74.13±3.91* 71.20±1.78* 85.61±5.10*△

4 讨论

湿疹为皮肤科常见疾病，中医称之为“浸淫疮”，“湿毒疮”，等。病因病机总属湿热内外相搏，蕴蒸外发，浸淫肌肤,滋水流溢成疮。

复方紫草油为我院名中医高宜云医师验方。方中主药紫草凉血，活血，解毒透疹，在清代《疡医大全》中早有记载紫草膏治小儿胎毒，疥癣。黄芩清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎。生大黄清湿热、泻火、凉血。亚麻籽又称大胡麻能润燥，祛风，止痒。麻油清热、润滑、收敛、润肤，作为油膏制剂之溶媒可补气行气、健脾生肌。诸药合用有清热凉血，燥湿止痒，润肤之效。药理研究表明，紫草含萘醌类色素和多糖类化合物，具有抗细菌、抗真菌作用，并具有明显抗炎，抑制组胺释放等作用，同时能抑制TNF-α的表达[2-4]。黄芩具有抗菌、抗病毒、抗炎作用同时对多种变态反应有不同程度的抑制作用[5]。生大黄具有抗菌，抗炎等作用，同时能抑制炎症细胞因子TNF-α表达[6]。亚麻籽含大量亚油酸和亚麻酸等成分[7]，是维持皮肤和毛发生长不可缺少的成分，能促进损伤组织的修复。麻油含有多种脂溶性维生素E，能维护毛细血管的通透性，改善周围血液循环[8]。全方有抗菌，抗炎，抗过敏，抑制渗出，减少水肿的作用。

湿疹致病原因复杂，其发病机制可能与Ⅳ型变态反应有关，Ⅳ型变态反应与致敏的T淋巴细胞有关，其产生一系列淋巴因子，各种炎症细胞活化因子共同引起血管扩张，血管壁通透性增强从而形成皮肤湿疹样改变[9]，湿疹发生发展过程中，炎症介质的相互作用和变化能影响湿疹的发展和预后。TNF-α属于促炎因子之一，TNF-α含量增高不仅可促进炎症部位血管扩张、血管壁通透性增加、趋化白细胞引起炎症部位组织损伤，导致炎症程度加重，同时，还可引起IL-1、IFN-γ等促炎因子含量增加，进一步加重湿疹皮损的炎症反应[10]。IL-2能促进白介素-2受体（IL-2R）的表达，还可刺激其他细胞因子（TNF、IFN-γ）分泌，引起组织的以淋巴细胞和单核细胞系浸润为主的渗出性炎症，从而导致湿疹加重[11]。本实验中小鼠经DNCB致敏和多次激发后，耳廓明显肿胀，皮损严重，并形成明显结痂，呈现典型Ⅳ变态反应免疫模型。本实验中发现中高组复方紫草油能显著改善皮损肿胀、红斑、渗出和结痂现象，对血清中炎症细胞因子IL-2、TNF-α有明显的抑制作用，疗效好于低浓度组，且与西药阳性组无差异。

［1］李春光，王月飞，赵红晔，等.化湿汤结合润肤止痒膏对湿疹小鼠细胞免疫功能的影响［J］.中国药物警戒，2015，12 （3）：137-143.

［2］李治建，周凡，斯拉甫·艾白，等.紫草药理作用研究进展［J］.中国中医药信息杂志，2010，17（11）：110-112.

［3］赵雪梅，王桂玲，费洪荣，等.紫草有效成分的提取及其抗炎作用研究［J］.中药药理与临床，2008，24（4）：36-38.

［4］Eun Kyong K，Eun Young K，Phil-Dong M，et al.Lithospermi radix extract inhibits histamine release and production of inflammatory eytokine in mst cells［J］.Biosci Biotechnol Biochem，2007，71（12）：2886-2892.

［5］张瑜，武斌，许建卫.黄芩药理作用的研究进展［J］.医学综述，2013，19（6）：1091-1093.

［6］黄伟，乔健，李成万，等.生大黄对重症颅脑损伤并发NPE患者血清TNF-α、IL-6水平的影响［J］.山东医药，2011，51（2）：3-4.

［7］李高阳，丁霄霖.亚麻籽油中脂肪酸成分的GC-MS分析［J］.食品与机械，2005，21（5）：30-32.

［8］王海荣，陈宁，李海玲.小磨麻油外涂预防产后乳头皲裂［J］.天津护理，2007，15（5）：302.

［9］陆丽明，陈楷涛.湿疹发生机理的研究进展［J］.亚太传统医药，2007，3（9）：76-79.

［10］Sun G，Wang Y，Yin B，et al.Tumor necrosis factor-α，monocyte chemoattractant protein-1 and intercellular adhesion molecule-1 increase during the development of a 2，4-dinitrofluorobenzene induced immediate-type dermatitis in rats［J］.Inflamm Res，2013，62（6）：589-597.

［11］黎昌强，杨西群，陈德宇，等.湿疹患者血中IL-2、IL-5、IL-10和EOS的检测及意义［J］.中国皮肤性病学杂志，2007，21（9）：537-538.

（收稿：2015-12-22 修回：2016-02-25）

Effects of Compound Zicao Oil on Serum IL-2 and TNF-αin Eczema Mice

ZH ANG Li,GAO Yiyun,GU Kefeng,FU Weihao.Department of Dermatology,Xiaoshan Demertosis Hospital,Hangzhou(311200),China

ObjectiveTo investigate the effects of compound Zicao oil on the levels of serum IL-2 and TNF-αin eczema mice model and the underlying mechanism.MethodsSixty healthy mice were randomly divided into blank control group,traditional Chinese medicine groups（high-and low-dosages）,western medicine group,and model group,with 12 mice in each group.Eczema The thickness and weights of mouse ears were measured.The levels of serum IL-2 and TNF-αwere determined by ELISA method.ResultsIn high-dose traditional Chinese medicine group,the weights and thickness of ears were 3.56±0.60 mg and 0.20±0.09 mm and the levels of serum IL-2 and TNF-α were 5.01±0.54 pg/mL and 74.13±3.91 pg/mL,respectively,which were significantly decreased than those in low-dose traditional Chinese medicine group（5.46±1.24 mg,0.40±0.17 mm,5.66±0.48 pg/mL,78.12± 2.02 pg/mL）and model group（8.78±1.12 mg,0.54±0.16 mm,6.43±0.63 pg/mL,85.61±5.10 pg/mL）,with all P＜0.05 and did not differ from those of western medicine group（2.86±0.69 mg,0.10±0.07 mm,4.80±0.58 pg/mL,4.80± 0.58 pg/mL;all P＞0.05）.ConclusionCompound zicao oil at a certain concentration can suppress the inflammatory response in mice with eczema,with a decrease in the level of serum IL-2 and TNF-α.

mice;eczema;compound zicao oil;IL-2;TNF-α湿疹是皮肤科常见病，病情迁延难愈。目前常用的皮质类固醇激素、抗组胺药等药物控制症状效果良好，但停药后易复发。我院采用复方紫草油治疗成人以及婴儿湿疹临床取得良好疗效，现用小鼠建立湿疹动物模型，探讨其作用机制，报道如下。

杭州市卫生科技计划项目（No.2010B072）；萧山社会发展重大科技攻关项目（2014308）

杭州市萧山区皮肤病医院皮肤科（杭州 311200）

章莉，Tel：0571-82670363；E-mail：wall1979@163.com