EDTA依赖性假性血小板减少原因分析及纠正方法

曹锦梅，王兵

(南京医科大学附属淮安第一人民医院检验科，江苏 淮安 223300)

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EDTA依赖性假性血小板减少原因分析及纠正方法

曹锦梅，王兵

(南京医科大学附属淮安第一人民医院检验科，江苏 淮安 223300)

目的 分析偶尔发生在血常规检测过程中出现乙二胺四乙酸盐(EDTA)依赖性假性血小板减少症(EDTA-PTCP)的现象和纠正措施。方法分别使用末梢血稀释法、抗凝剂替换法、网织红细胞通道计数法、外周血涂片染色法等检测方法，对淮安市一院2例EDTA-PTCP患者的标本进行测定。结果EDTA抗凝常规通道检测血小板数减少，分别为14×109/L和7×109/L、枸橼酸钠抗凝法分别为122×109/L，99×109/L、末梢血稀释法分别为116× 109/L，95×109/L、网织红细胞通道计数法分别为127×109/L，105×109/L，血小板计数基本正常，直接外周血涂片染色血小板分布正常。结论EDTA依赖性假性血小板减少现象，可通过末梢血稀释法、抗凝剂替代法、网织红细胞通道计数法、外周血涂片染色法等方法加以纠正。

乙二胺四乙酸盐；枸橼酸钠；血小板计数；血小板假性减少症

血小板是血液的重要形态之一，在止血和凝血过程中发挥重要作用。因此，血小板的数量及功能在疾病诊断中显得相当重要。目前血小板计数临床各实验室普遍使用的是全自动血细胞分析仪，其具有操作简便、重复性好、准确度高、结果稳定等优点，被广泛普及。EDTA在实验室血常规检查中被定为首选的抗凝剂，其对血细胞的形态和血小板的计数影响都很小，因此，被广泛使用。但近年来，由此抗凝剂引起的假性血小板减少的现象时有报道，淮安市一院从2015年7月至12月就发现2例，本文分析其原因并探讨其纠正方法。

1 资料与方法

1.1 一般资料 病例1：女，26岁，2015年7月2日卵巢囊肿术后来我院复查。辅助检查：(1)无肝脾，淋巴及肿大；(2)心电图正常；(3)超声：子宫的大小和形态正常，子宫肌层光点均匀分布，附件无异常；(4)肝肾功能正常，血象检查结果：白细胞3.59×109/L，血红蛋白96 g/L，红细胞3.47×1012/L，血小板18×109/L。病例2：男，85岁,糖尿病住院患者，2015年12月2日血常规检查结果：白细胞5.57×109/L，血红蛋白93 g/L，红细胞3.17×1012/L，血小板5×109/L。全身无出血症状，其他辅助检查：(1)无肝脾，淋巴及肿大；(2)心电图正常；(3)凝血功能正常，肝肾功能正常，治疗后血糖也控制在正常范围内，为4.8 mmol/L。2例患者血小板检测结果与临床症状不符，在征得患者同意的情况下分别用末梢血稀释法、抗凝剂替代法、网织红细胞通道法、外周血涂片瑞氏染色法等方法予以纠正。

1.2 仪器与材料 采用日本SysmesXE-2100全自动血球分析仪及配套试剂，奥林巴斯双筒显微镜；草酸铵稀释液，瑞氏染液，清洁干燥无尘无油脂载玻片、EDTA-K2抗凝管、枸橼酸钠抗凝管。

1.3 方法 两例患者分别EDTA-K2抗凝负压管，枸橼酸钠抗凝负压管抽取静脉血2 mL，颠倒混匀后放置10 min分别用常规通道和网织红通道各计数3次。同时各吸取末梢血20 μL加添到0.38 mL草酸铵稀释液中，混匀后冲入计数池静置15 min，显微镜下分别计数3次。另外再次末梢血直接涂片，EDTA-K2抗凝血涂片，瑞氏染色后显微镜观察。

2 结 果

末梢血直接涂片瑞氏染色镜检显示血小板形态、分布正常；EDTA-K2抗凝血涂片瑞氏染色镜下看到血小板分布不均，片尾有微弱聚集，还可见到卫星现象[1]；EDTA-K2抗凝法实验结果：常规通道血小板数异常；网织红通道血小板数正常；枸橼酸钠抗凝计数结果：常规通道、网织红通道血小板数基本正常；末梢血草酸铵稀释法结果基本在正常范围，结果见表1，血小板数正常参考范围(100～300×109/L)。EDTA-K2抗凝血涂片瑞氏染色镜下可看到卫星现象，见图1；外周血直接涂片瑞氏染色镜检可见正常分布的血小板，见图2(×1 000倍)。

表1 两例患者不同检测通道的PLT计数结果(×109/L)

图1 血小板围绕在白细胞周围的卫星现象

图2 正常散在分布的血小板

3 讨 论

全自动血细胞分析仪利用电阻抗法或化学发光法原理来计数血小板，由于EDTA二钾抗凝剂基本不影响细胞形态，对细胞数目及大小也无改变等优点，被国际血液学标准委员会认定并广泛普及使用。而此抗凝剂所致的血小板假性减少现象屡见报道，引起人们广泛关注。对患者发生EDTA-PTCP的可能原因，有资料表明是一种隐蔽性抗原存在于血小板的表面，EDTA可促进血小板活化，使血小板表面的隐蔽抗原和血浆中的自身抗体相结合产生一些活性物质，这些活性物质具有活化血小板纤维蛋白原受体的功能，从而使血小板聚集成一团[2]。血细胞分析仪常规通道计数原理是：不同大小体积的细胞，通过计数小孔时电阻值增加，从而引起电压改变产生一个脉冲，根据脉冲的振幅大小来区分细胞大小，根据产生脉冲的数目来计数细胞多少。仪器只能辨别细胞大小，而辨别不了细胞类型，从而导致多个聚集成一团的血小板被当成了单个细胞计数或被划入其他细胞计数范围，导致血小板数目减少。

临床上此类患者的发病率较低，为0.09%～0.21%[3]，这个现象可见于健康的人群中，也可见于某些疾病如癌症、自身免疫性疾病、糖尿病、肝病及一些原因不明的病症[4]。以上列举了4种临床上便于接受、操作简单的纠正EDTA-PTCP的方法，经实验证实是可行的，虽也出现过个别病例枸橼酸钠抗凝后也发生血小板聚集现象的报道[5]，但总体上枸橼酸钠抗凝作为纠正EDTA-PTCP的方法之一仍比较常用。另外在末梢血草酸铵稀释法计数血小板时，使用的器材必须规范，混悬液滴入计数池后应静置15 min后再计数，并在1 h内完成。时间过短，血小板未完全沉下；时间过长，血小板被破坏，都会使结果偏低[6]。EDTA-K2抗凝血在SysmesXE-2100全自动血细胞分析仪网织红细胞通道检测的血小板数结果更为可靠[7]。这是由于核酸染液对血小板进行了染色，再经荧光散射判断，即可较为准确的得到血小板的数量。此法既不会把大血小板算成红细胞中,也不易将破碎红细胞误认为血小板。因此,网织红通道检测的血小板数可作为EDTA-PTCP患者实际血小板数量。临床实验室检验人员，对于单纯性血小板减少患者，应结合患者的病情、病史、凝血功能等实验室报告综合分析，发现可疑结果应及时与患者或医生沟通，了解患者具体状况，及时复检，对于选择何种纠正方法，视实验室及患者具体情况而定，一定要保证检测质量，为临床医生提供准确可靠的诊断依据。

[1]李盛龙,赵丹.乙二胺四乙酸盐依赖性假性血小板减少症研究进展[J].基层医学论坛,2012,16(19):2551-2553.

[2]李姗姗,白清宇,郭步云,等.血小板相关抗体检测在血小板减少性疾病中的应用[J].沈阳部队医药,2011,24(1):12-13.

[3]鹿红梅,张振惠,赵存英,等.EDTA-K2对血小板计数的影响及其纠正方法探讨[J].总装备部医学学报,2014,16(1):31-32.

[4]边红放.全自动血细胞分析仪引起血小板减少原因分析[J].医疗装备,2011,24(10):35-36.

[5]何海洪,陈艳清,贾建,等.枸橼酸钠和EDTA抗凝同时依赖的假性血小板减少症1例[J].广东医学,2013,23(2):3546-3547.

[6]刘成玉,罗春丽。临床检验基础[M].5版.人民卫生出版社,2012: 8.

[7]张茹,张涛.如何减少乙二胺四乙酸抗凝剂依赖性假性血小板减低[J].临床误诊误治,2010,23(2):134-135.

R558+.2

B

1003—6350（2016）11—1881—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.11.055

2015-12-24)

曹锦梅。E-mail：1114737825@qq.com