膝关节类风湿性关节炎患者关节液中脂联素水平与病情严重程度的关系

温锦益 廖子鸿 戴冠东 黄健

膝关节类风湿性关节炎患者关节液中脂联素水平与病情严重程度的关系

温锦益 廖子鸿 戴冠东 黄健

目的探究膝关节类风湿性关节炎(RA)患者关节液中脂联素水平与病情严重程度的关系。方法120例关节炎患者,其中经临床确诊为膝关节RA患者60例(观察组),普通骨性关节炎患者60例 (对照组)。给予患者相同的非对照处理方式包括护理等手段,通过同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ) 技术检测患者体内脂联素的含量,分析病情严重程度与脂联素含量的关系。结果经过iTRAQ技术发现,2个月后观察组脂联素浓度明显高于对照组(P＜0.05),且随着患者RA的病情程度加重患者体内的脂联素含量呈增加趋势(P＜0.05),相关分析发现,关节液脂联素水平与RA分级呈正相关(rs=0.525,P＜0.05)。结论脂联素在膝关节RA患者中高度表达,脂联素与患者的病情严重程度呈正相关关系。

类风湿性关节炎；脂联素；病情严重程度

RA在大多数情况下是指人体中的一种自身免疫性疾病,是一种由于具有相同过敏原而引起的慢性综合征,是一种常发生在外周关节处的非特殊免疫性疾病。疾病多引起患者的病变关节处及其周围的组织发生进行性破坏,从而引起关节的功能障碍,严重者会累及邻近部位病变,如肌肉、韧带、滑液等的病变［1］。目前有研究表明,脂联素的浓度与RA病变程度有着密切的联系［2,3］。但是近年来有学者研究发现［2］,脂联素可以在很多情况下拮抗炎症介质,并且提出了脂联素参与了骨的代谢以及关节病的发生,但仍然存在很多的争议,为了验证这一说法的正确性以及脂联素与RA病变程度的关系,为以后疾病治疗提供准确的方向,现就本院2013年5月～2015年5月的120例患者进行调查分析,具体报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2013年5月～2015年5月的120例关节炎患者,其中临床确诊为膝关节RA患者60例(观察组),普通骨性关节炎患者60例(对照组)。观察组中女32例,男28例,年龄35～63岁,平均年龄(43.5±9.2)岁；对照组中女31例,男29例,年龄39～61岁,平均年龄(42.8±8.6)岁。观察组患者分为RA 2级9例、RA 3级28例、RA 4级23例。观察组与对照组患者均只因患相应单一疾病而入院,患者所在的家族中遗传因素对疾病的发生无明显影响。两组一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05),具有可比性。120例患者均已签署手术知情同意书。

1.2 纳入标准 纳入标准按照西医的诊断,参照美国风湿病学会(ARA)1987年修订的诊断标准［4,5］：在具备下面7项中4项及以上的患者诊断为RA,符合3项的判断为有可能患有RA。其中第2项和第5项必须得到医生的观察确诊。①清晨起床时身体僵硬时间持续＞1 h(患者病程＞6周)；②有≥3个的关节发生肿大(病程持续时间≥6周)；③腕关节、掌指关节以及近指关节出现肿大时间＞6周；④对称性关节肿大＞6周；⑤在皮肤下面发现结节样硬性物,判断为风湿样结节；⑥对手进行X光照射时发现有骨质疏松和关节间隙狭窄；⑦类风湿性因子的滴度＞1∶32(检测呈阳性)。如未满足上述7项条件,而符合下面的2项及以上标准的患者可判断为可疑的RA。①晨僵(时长与频数不确定)；②持续反复的关节压痛或活动时疼痛≥6周；③现在或过去有关节肿大出现过；④发现皮下硬性结节；⑤血沉速度加快或C反应蛋白试验阳性。

1.3 方法 对120例患者进行膝关节置换取出时,所有软骨组织均从胫骨平面取出,包括负重区域的内侧和外侧。所有患者的脂联素提取均采取同样的方法从病变部位的关节液中提取,避光减少脂联素变质。两组患者均采用iTRAQ对患者的脂联素进行分析,具体方法如下：在病变关节抽取出关节液后,放置于离心机中离心弃掉细胞残渣和关节液内其他的残余物后,迅速放置于-70℃的冷藏箱中存储直到需要检测,保藏时注意密封以及避光,避免离心液变质。用酶标板操作,做双孔重复,每孔加入显色工作液200 μl。具体步骤如下：稀释标准品,配制0～2000 μg/ml浓度梯度的标准品溶液。根据待用离心液数量,配制适量显色液,充分混匀。稀释待测离心液至合适浓度(5～10倍的稀释度)并加入酶标孔中,每孔加入20 μl待检样本及200 μl BCA显色液。37℃温育30 min,选择酶标仪波长为562 nm,测定各孔的吸光值。以蛋白标准品浓度(ng/ml)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘制出标准曲线。以标准曲线作为对照,Excel做出拟合曲线,根据所测样品的吸光值,即可得到相应的待检样本的蛋白浓度(C待测液×稀释倍数=实际浓度)。

1.4 观察指标 iTRAQ技术得到关节液中脂联素的浓度,比较各级程度患者关节液内的脂联素浓度差异,观察膝关节RA患者的病情严重程度与脂联素浓度的关系。

1.5 统计学方法 采用SPSS21.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用t检验；计数资料以率(%)表示,采用χ2检验 ；应用Spearman法对脂联素浓度与膝关节RA病情严重程度的相关性进行分析。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 经过iTRAQ技术发现,2个月后观察组脂联素浓度明显高于对照组(P＜0.05)。见表1。

表1 两组脂联素浓度比较(±s,ng/ml)

表1 两组脂联素浓度比较(±s,ng/ml)

注：与对照组比较,aP＜0.05

组别 例数 关节液脂联素浓度观察组 60 4287.36±1578.52a对照组 60 1195.64±355.64t14.800P＜0.05

2.2 经过iTRAQ技术发现,观察组RA 2级患者的关节液脂联素浓度为(3604.33±801.45)ng/ml,RA 3级患者的关节液脂联素浓度为(4752.54±585.48)ng/ml,RA 4级患者的关节液脂联素浓度为(6343.28±696.68)ng/ml。RA 4级患者的关节液脂联素水平明显高于RA 3级和RA 2级患者(P＜0.05),RA 3级患者的脂联素水平高于RA 2级患者(P＜0.05)。

2.3 应用iTRAQ技术对脂联素浓度与膝关节RA病情严重程度的相关分析时发现,关节液脂联素水平与RA分级呈正相关(rs=0.525,P＜0.05)。见表2。

表2 关节液脂联素水平和病情严重程度的相关性

3 讨论

有研究者认为炎症因子引发RA相关骨质改变的机制可能是通过NF-κB途径使炎症细胞产生相应的炎症因子以及基质降解酶,同时也能使细胞核因子κB受体活化以及子配体(RANKL)活化,从而引起骨质代谢失调,发生RA［6］。然而,有学者近期研究认为,脂联素能下调软骨细胞白细胞介素-1,诱导基质金属蛋白酶-13的表达,上调基质金属蛋白酶抑制剂-2的表达,提示脂联素作为抗炎介质,对关节软骨可能有保护作用［7］。故此,在脂联素联系患者的病情严重程度上存在着较大的争论。

为了验证脂联素与RA患者的病情严重程度是否存在关系,本次试验选取120例关节炎患者。研究发现,RA患者关节液中的脂联素水平明显增高,提示在患者体内脂联素高度表达,说明脂联素的水平影响到RA发病。同时对于分级结果显示,RA 2级和RA 3级患者体内的脂联素水平明显低于RA 4级患者,RA 2级患者的脂联素水平相比于RA 3级患者明显降低,提示脂联素的浓度能反映RA的病情严重程度。

综上所述,脂联素在RA患者中的高度表达以及与RA患者病情严重程度的密切关系提示降低脂联素水平对于治疗RA可能是一个较好的突破口。

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［2］骆家伟,方斌.透明质酸对膝骨关节炎患者关节液中脂联素和瘦素水平的影响.中华关节外科杂志(电子版),2015,9(1):55-59.

［3］赵新秀,寇永锋.类风湿性关节炎证候诊断标准的研究.中华中医药学刊,2010(3):500-502.

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.12.027

2016-04-07］

坪山新区医疗卫生发展孵化资助基金项目(项目编号：201504)

518118 深圳市坪山新区人民医院骨科(温锦益 廖子鸿 戴冠东)； 阳江市人民医院外四科(黄健)

戴冠东