Fas信号通路在诱导的胃癌细胞EMT过程中的侵袭及转移

陈辑 易学华 罗瑞升 劳碧兰 陈连清

·临床医学·

Fas信号通路在诱导的胃癌细胞EMT过程中的侵袭及转移

陈辑 易学华 罗瑞升 劳碧兰 陈连清

目的对Fas信号通路在诱导胃癌细胞EMT过程的侵袭以及转移情况进行分析,从而为相关治疗措施提供依据。方法35例胃癌患者,利用相关技术对患者胃癌细胞EMT过程中Fas信号的通路的侵袭和转移情况进行分析。结果Fas在诱导胃癌细胞EMT过程中扮演重要的角色,ERK1/2信号通路能够促进Fas诱导胃癌细胞EMT的成功率。结论Fas信号通路能够诱导胃癌细胞出现EMT现象,相关人员必须加强对其的重视。

Fas信号通路；EMT；胃癌细胞

Fas信号通路在诱导的胃癌细胞EMT过程中有着极为重要的作用［1,2］,相关的研究人员必须加强对其的重视,加强对其的研究水平的提升,这对于胃癌细胞增殖与分化原理的掌握极为重要。本文对其进行研究,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择本院2014年1月～2015年12月收治35例胃癌患者为研究对象,其中男20例,女15例,所有患者纳入前均被确诊为胃癌,且进行了不同程度的化疗。

1.2 方法 对35例胃癌组织进行标本取样,所取组织均距癌组织＜2cm,采集组织后进行固定处理,在固定后在对其进行包埋,为下一步试验的进行创造条件。本次研究中研究的核心是对CAC1基因对于胃癌EMT的诱导作用进行分析,因此在获得胃癌组织后,研究人员需对两者的相关数据进行测定。在对CAC1以及EMT的蛋白表达进行测定时还会运用到免疫组化法,这种方法作用的发挥需要应用到SP方法,其要以相关试剂说明为依据对DAB显色状况进行确定。在对EMT、CAC1相关基因mRNA水平进行测定时所使用的方法为原位杂交法,在测定时要先根据基因特性对探针的合成,在对CAC1基因序列进行设计时要以CAC1编码框序列为依据,所设计的探针的长度要保持在46 bp。在对玻片进行处理过程中所采用的处理试剂为多聚赖氨酸。在对切片进行研究时,需要对切片进行脱蜡至水处理,在脱蜡过程完成后,用3%H2O2在室温的状态下对标本进行10 min的处理,从而达到内源性过氧化物酶灭活的目的。在对核酸片段进行暴露时需要在切片上加稀释的胃蛋白酶,稀释溶液一般选择3%柠檬酸,在反应30 min后,选择洗涤液0.5 M 磷酸盐缓冲液(PB)以及蒸馏水,对其进行洗涤处理。在对相关因素进行杂交之前要对其进行预杂交处理,杂交完成后要对其杂交标本进行洗涤。

在对胃癌细胞株AGA培养时,所使用的培养基要含有10%的小牛血清,在培养基中加100 g/ml青霉素以及100 g/ml的链霉素,把培养基放在37℃的环境下进行培养,然后将其放入湿度保持在5%CO2的培养箱中。在试验进行之前用无血清培养基替换含10%胎牛血清(FBS)的培养基,FasT实验浓度应该控制在12.5 ng/ml。在进行免疫印迹进行探寻的过程中,所选取的AGS细胞应该处于生长期,对细胞总蛋白进行提取,从而使得蛋白浓度可以测量。对蛋白进行电泳处理,电泳时采取的凝胶类型为10%SDS不连续聚丙烯酞胺凝胶。电泳完成之后对其进行转膜、封闭处理。在滤膜洗膜后,对其进行增强化学发光法(ECL)以及X片显影处理,并对结果进行处理。

1.3 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用方差分析；计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

Fas在诱导胃癌细胞EMT过程中扮演着重要的角色,此外ERK1/2信号通路能够促进Fas诱导胃癌细胞EMT的成功率。消化系统肿瘤细胞株流式细胞仪检测结果见表1,结果显示： CAC1在胃癌细胞的表达水平高于其他细胞中的表达水平,其所存在的主要位置为细胞的细胞浆中,其在癌周围正常的组织中表达水平不高,通过检测发现其在正常组织中仅存在于间质中。不同TNM分期及组织类型CAC1阳性率比较差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。不同梯度浓度sFasL和不同时间的AGS细胞数量比较差异有统计学意义(P＜0.05)。见表3。

表1 35例患者实验室消化系统肿瘤细胞株流式细胞仪检测结果

表2 35例患者CAC1在胃癌组织和胃正常组织中的表达比较(n,%)

表3 35例患者不同梯度浓度sFasL和时间AGS细胞数量(±s)

表3 35例患者不同梯度浓度sFasL和时间AGS细胞数量(±s)

注：不同梯度浓度sFasL和时间的AGS细胞数量比较,P＜0.05

sFasL浓度(ng/ml) 1 d 2 d 3 d 合计 F P对照 2.84±0.24 3.38±0.43 10.12±1.32 5.42±3.57 40.958 ＜0.05 12.5 3.12±0.31 3.17±0.04 10.50±0.52 5.51±3.87 635.185 ＜0.01 24.0 3.64±0.21 2.96±0.32 6.98±0.51 4.52±1.78 137.123 ＜0.01 50.0 3.78±0.31 7.52±0.27 4.53±2.34 924.354 ＜0.01合计 3.26±0.38 2.98±0.54 7.32±0.32 4.97±2.95 598.345 ＜0.01F13.657 7.812 17.365 14.214 18.645P＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

3 讨论

Fas信号通路在胃癌细胞的生长过程中扮演着极为重要的角色,这是因为Fas信号通路的形成可以在一定程度上使得细胞凋亡得以实现［3,4］。本文研究发现,胃癌心肿瘤的分化与转移的实现也和Fas信号通路有着较为密切的联系,通过试验发现Fas信号通路可以促进细胞活性的提升,但是具体作用发挥的原理还待探究。为了能够明确Fas信号通路在胃癌细胞的转移以及增殖方面所起的作用,罗柏花［5］研究建立了EMT和MET模型,这两种模型的建立可以对胃癌原发病灶如何实现对转移灶进行扩散的原理进行明。

本研究发现,CAC1在胃癌中表达较为突出,在整个胃癌细胞系中,CAC1 mRNA的水平均高于其他细胞系,此外胃癌细胞系中的CAC1 mRNA含量水平远高于胃黏膜细胞系中。CAC1的表达并不是一成不变的,其在细胞周期变化的过程中也会以动态的形式所存在。相关研究发现,CAC1出现的时期为细胞的G0时期,并随着细胞周期的不断推进而以上升的状态所存在,其水平表达最高的时期为细胞的S期。其开始第一次降低的时期为S中期,在此升高的时期为S/G2期,整个过程中CAC1表达水平最低时期为G0时期［6,7］。上述研究表明CAC1在胃癌细胞系中表达水平呈现较高的状态,并且其参与细胞增殖过程,通过其表达的实现也能够使得细胞周期调控得以实现。此外CAC1也能够对细胞从G1期向S期转换过程进行调节。CAC1对于胃癌细胞EMT的诱导也存在一定的作用,相关研究者发现在胃癌细胞系中以及胃黏膜细胞系中均能够检测出CAC1 mRNA的表达,且胃癌细胞中所含有此项蛋白表达水平处于较高水平,因此可以推断CAC1在胃癌细胞AGS细胞系细胞周期的促进上有着一定的积极意义。

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.12.010

2016-03-29］

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