小口枣黑斑病病原分离鉴定——链格孢属的初步研究

常雪艳,冯致

（甘肃农业大学林学院，甘肃兰州 730070）

小口枣黑斑病病原分离鉴定
——链格孢属的初步研究

常雪艳,冯致

（甘肃农业大学林学院，甘肃兰州 730070）

2012年从景泰县采集小口枣黑斑病病果样品，分别在PDA培养基、枣汁培养基、肉质胨培养基上对病原菌进行分离、纯化，统计和计算分离频率，观察菌落形态特征，共分离出三种菌：菌1，菌2，菌3。通过菌落形态、孢子形态的观察，鉴定出菌3为半知菌亚门链格孢属的Alternariatenuis。进而测定菌3在PDA、肉质胨、枣汁培养基上的生长速率，以及菌3在不同培养基上的产孢量，从而得出菌3最适宜在PDA培养基上生长，同样在PDA培养基上产孢量最大。

小口枣；黑斑病；分离鉴定；链格孢属。

枣树，在我国分布很广，东北南部至华南，西南，西北，新疆均有，而以黄河中下游，华北平原栽培最普遍。枣树是我国最具代表性的民族果树之一，特别是在山，沙，碱，旱，贫地区农民脱贫和财政自立中占有重要地位。枣树全身是宝，枣树的叶，吊，皮，木分别含有维生素，鞣革物质，单宁及枣酸和铁，锌等微量元素。加工制品有消炎活血的作用，具有独特的营养和药用价值，枣果实为核果，富含维生素C，可生食，又可制蜜饯，果脯和酿酒，果入药能补脾胃，润心肺，益气养颜。枣树以其适应性强，果实成熟早，产量高，易管理，生态效益和经济效益显著等优点，在我国农业中占重要地位。

小口枣黑斑病主要危害果实。发病时间一般为果实成熟采收前期，发病部位为果顶部最易发病,果柄处不易发病，发病初期枣果颜色深黑色小圆斑，边缘清晰，病组织呈硬海绵状坏死,无味。发病后期病部果皮完好，变硬，呈黑红色，有光泽，内部症状病果内初浅粉红色，后期病部果肉变肉粉色，病部果肉组致呈圆形,易剥离，发病中期黑斑逐渐变大，并向纵深扩展。

2012年从景泰县采集小口枣黑斑病病果样品，对其进行病原菌的分离，纯化，对分离出的病原进行分离频率的计算，并通过菌落形态的观察，孢子形态的观察对菌3进行鉴定。同时，对其中在不同培养基上测定菌3的生长速率及产孢量。

一、结果与分析

（一）菌种分离频率的计算

表1 在PDA培养基上不同保存方式下不同发病部位四种菌的分离频率(%)

表2 在肉质胨培养基上不同保存方式下不同发病部位四种菌的分离频率(%)

由表1，表2，表3可知：常（30%～40%）的病果在三种培养基上都分离出了菌1，菌2，菌3，且菌1的分离频率最高，而冰箱里保存的病果，在PDA培养基上没有分离出菌1，只分离出了菌2和菌3，肉质胨培养基和枣汁培养基上，三种菌都出现了，且菌3的分离频率最高；常（80%～90%）在枣汁培养基和肉质胨培养基上青霉的分离频率达到了100%，在PDA上也达到87.5%，而冰箱里面和常（30%～40%）保存的枣青霉的分离频率不到10%；从冰箱里保存的枣分离出的致病菌来看，病表的分离出的菌的分离频率大于病肉部位的。

表3 在枣汁培养基上不同保存方式下不同发病部位四种菌的分离频率(%)

（二）链格孢鉴定结果

1.链格孢菌落形态。菌落圆形或近圆形，初期有明显的两次纹论，边缘整齐，初期灰白色，然后转黑色或灰黑色，在培养基上平铺，菌落绒毛状，致密。

分生孢子褐色或褐黑色，形状变化较大，卵圆形，不规则形，既有横膈膜，也有纵隔膜，2～7个链生，倒棍棒形，有喙，喙长度不超过分生孢子的1/3，圆柱形或圆锥形。

分生孢子梗单生，直立或稍弯曲，一般不分枝直立或稍弯曲，淡褐色。

经鉴定，认为该菌为半知菌亚门链格孢属(Alternaria.sp)真菌。

2.菌3在不同培养基上生长速率的测定。由图1可知：该菌在PDA培养基上生长速率最快，枣汁培养基上次之，在肉质胨培养基上生长速率最慢；120 h时，在PDA培养基上菌落直径达到75 mm,长满培养皿，枣汁上为70 mm，而在肉汁胨培养基上菌落直径为62 mm。

图1 菌3在不同培养基上生长速率的测定

3.菌3产孢量的测定。链格孢培养120 h后，由图2可知：在PDA培养基上产孢量最大，每视野可观察到52个孢子，枣汁培养基产孢量次之，肉质胨培养基上产孢量最小，每视野36个。

图2 链格孢产孢量的测定

二、结论

通过对从景泰县采集的小口枣的病原菌进行分离和鉴定，共分离出四种菌，菌1，菌2，菌3还有曲霉；通过分离频率的计算，得到菌3的分离频率最高，其次为菌2，再次为菌1；对病枣不同部位进行分离时，菌在表皮部位的分离频率要高于果肉部分的，可知病原菌大多存在发病部位的表皮部分；对菌3的菌落形态及孢子形态的观察，根据《真菌鉴定手册》鉴定菌3为半知菌亚门交链孢属（Alternariasp）真菌。通过对菌3链格孢菌的生长速率的测定，测得链格孢在PDA培养基上的生长速率最快，在肉质胨培养基上生长最慢，枣汁培养基上生长适中；通过产孢量的测定，测得链格孢在PDA培养基上的产孢量最大。

通过对从景泰县采集的小口枣的病原菌进行分离和鉴定，共分离出四种菌，菌1，菌2，菌3还有青霉，其中菌1为聚端孢属粉红聚端孢酶（Trichotheciumroseum）,菌2为根霉属匍枝根霉[R.stolonifer(Ehrenb.exFr.）Lind]，通过对菌3的菌落形态的观察，通过显微镜对菌3的孢子形态的观察，再通过与真菌鉴定手册的对照初步最终鉴定结果确定菌3为半知菌亚门链格孢属（Alternariatenuis）。从不同材料中分离得到，冰箱里保存的枣分离出链格孢的分离频率最高；从常（80%～90%）在各个枣汁培养基和肉质胨培养基上分离出青霉的分离频率都为为100%，可知青霉的腐生性特别强；通过对链格孢属的生长速率的测定，得到链格孢属在PDA培养基上的生长速率最快，在肉质胨培养基上生长最慢，枣汁培养基上生长适中；通过产孢量的测定，得到链格孢属在PDA培养基上的产孢量最多。

（编辑：刘国华）

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1673-9019(2016)19-0057-02

2016-06-22

常雪艳（1990-），甘肃静宁人，主要从事农艺学研究。