大理地区不同血清学检测试剂对鸡血中HEV的检测

刘 敏 李丽娟（通讯作者） 肖 文 邹云梅 耿成锐

（1.大理大学公共卫生学院，云南大理671000；2.大理大学东喜玛拉雅资源与环境研究所，云南大理671000；3.大理大学农学与生物科学学院，云南大理671000）

大理地区不同血清学检测试剂对鸡血中HEV的检测

刘 敏1，2李丽娟1（通讯作者） 肖 文2邹云梅3耿成锐3

（1.大理大学公共卫生学院，云南大理671000；2.大理大学东喜玛拉雅资源与环境研究所，云南大理671000；3.大理大学农学与生物科学学院，云南大理671000）

目的 了解大理地区鸡中戊型肝炎病毒（HEV）感染情况及比较两家公司生产的HEV检测试剂对鸡血清HEV抗体的检测效果。方法 分别采集大理古城和下关菜市场鸡血92份和91份，应用两家公司生产的HEV抗体试剂盒检测鸡血清中HEV抗体。结果 183份鸡血清中用试剂A1、A2、B1和B2检测，分别检出2份、2份、2份和3份阳性结果，阳性率分别为1.09%、1.09%、1.09%和1.64%。两家公司生产的戊型肝炎病毒IgM抗体诊断试剂和戊型肝炎病毒IgG抗体诊断试剂对同一份鸡血清检测，没有相同的阳性结果，阴性结果符合率很高。结论 大理地区鸡中存在HEV，同时两家公司生产的HEV抗体检测试剂可以作为研究鸡群中HEV的流行病调查，但检测灵敏度不高，需研制更灵敏的检测试剂。

戊型肝炎病毒；鸡；HEV-抗体检测试剂；血清学检测

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus，HEV）引起的一种急性限性传染性疾病，主要经粪-口途径传播[1]，全球广泛分布。研究显示HEV是一种无囊膜的单股正链RNA病毒[2]，一般呈不规则球形，基因组全长约7.3kb[3]，包含三个开放读码框分别编码具有各自功能的蛋白质，其中用于检测HEV的IgM抗体诊断试剂盒和IgG抗体诊断试剂盒就是通过这些蛋白质的特殊抗原表位进行识别[4-5]。机体感染HEV一段时间后，首先产生的是IgM抗体，但IgM抗体在急性期后较快消退，一般可持续2～3个月[6]。而IgG抗体出现晚于IgM抗体，但在急性期内含量持续增多，一直到恢复期，并且可继续维持高水平1.0～4.5年，甚至更久[7]。而禽戊型肝炎病毒（Avian hepatitis E virus，Avian HEV）在2004年第八次国际病毒分类委员会上与猪戊型肝炎病毒被归为戊肝病毒属（Hepevirus），其与人戊型肝炎病毒和猪戊型肝炎病毒的同源性较低，但在ORF2蛋白上存在共有的抗原表位，因而采用检测人戊型肝炎病毒抗体的试剂在理论上是可行的，但检验的效果可能不理想。本实验采用两家公司都生产的IgM抗体诊断试剂盒和IgG抗体诊断试剂盒对大理地区183份鸡血血清进行HEV抗体检验，探究大理地区鸡中HEV的存在状况及比较两家公司生产的HEV检测试剂检验效果哪种更好。

1 资料与方法

1.1 一般资料：鸡血血清样本采集时间为2015年7月23日，分别从古城菜市场采集鸡血血清92份，从下关泰兴菜市场采集鸡血血清91份，共183份。

1.2 试剂：试剂A1：上海科华生物工程股份有限公司生产的戊型肝炎病毒IgM抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）；试剂A2：上海科华生物工程股份有限公司生产的戊型肝炎病毒IgG抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）。试剂B1：北京万泰药业有限公司生产的戊型肝炎病毒IgM抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）；试剂B2：北京万泰药业有限公司生产的戊型肝炎病毒IgG抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）。以上实际操作及结果判定按照各自的说明书严格进行。（注：+表示阳性结果，-表示阴性结果，阴性表示阴性对照，阳性表示阳性对照，空白表示空白对照）。

1.3 方法：无菌采集大理地区古城和和下关两菜市场的鸡血血清，静置过夜分离血清。分别用试剂A1、A2和试剂B1、B2对同一份鸡血血清标本进行实验室检测，使用Excel处理软件分别比较试剂A1和B1对鸡血血清中IgM抗体检测结果，比较试剂A2和B2对鸡血血清中IgG抗体检测结果。

2 结果

2.1 大理地区鸡血血清戊型肝炎病毒抗体检测：使用戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒A1、A2、B1和B2对大理地区鸡血血清中戊型肝炎病毒抗体的检测结果见表1。

表1 大理地区鸡血血清戊型肝炎病毒抗体检测结果

2.2 对古城92份鸡血血清IgM抗体检测结果：采用试剂A1对古城菜市场采集的鸡血血清的IgM抗体进行检测，只有A3和B10孔是阳性结果，阳性率为2.17%（2/92），其余结果都是阴性结果。

采用试剂B1对古城菜市场采集的鸡血血清的IgM抗体进行检测，只有C1孔是阳性结果，阳性率为1.09%（1/92），其余结果都是阴性结果。

由以上试验结果可发现，试剂A1和B1阳性结果相同的为0份，阴性结果相同的有89份。

2.3 对下关91份鸡血血清IgM抗体检测结果：采用试剂A1对下关菜市场采集的鸡血血清的IgM抗体进行检测，无阳性结果，结果都是阴性结果。

采用试剂B1对古城菜市场采集的鸡血血清的IgM抗体进行检测，只有H3孔是阳性结果，阳性率为1.10%（1/91），其余结果都是阴性结果。

由以上试验结果可发现，试剂A1和B1阳性结果相同的为0份，阴性结果相同的有90份。

2.4 对古城92份鸡血血清IgG抗体检测结果：采用试剂A2对古城菜市场采集的鸡血血清的IgG抗体进行检测，无阳性结果，结果都是阴性结果。

采用试剂B2对古城菜市场采集的鸡血血清的IgG抗体进行检测，只有D2孔是阳性结果，阳性率为1.09%（1/92），其余结果都是阴性结果。

由以上试验结果可发现，试剂A2和B2阳性结果相同的为0份，阴性结果相同的有91份。

2.5 对下关91份鸡血血清IgG抗体检测结果：采用试剂A2对下关菜市场采集的鸡血血清的IgG抗体进行检测，C5和D2孔是阳性结果，阳性率为2.20%（2/91），其余结果都是阴性结果。

采用试剂B2对下关菜市场采集的鸡血血清的IgG抗体进行检测，B2和C2孔是阳性结果，阳性率为2.20%（2/91），其余结果都是阴性结果。

由以上试验结果可发现，试剂A2和B2阳性结果相同的为0份，阴性结果相同的有87份。

3 讨论

本实验研究显示A1、A2、B1和B2对大理地区鸡血血清中HEV抗体的阳性率分别为1.09%、1.09%、1.09%和1.64%，结果证明了HEV在大理地区鸡群中存在，与耿彦生[8]等研究报道的鸡血清抗体阳性率3.58%的结果相似。

试剂A1和试剂B1对HEV-IgM抗体检测阳性检出率相同，该结果与王昌敏等[9]研究表明的两种戊型肝炎病毒IgM抗体捕获法诊断试剂对各类样本检测结果完全相同的研究结果相反。出现上述情况的原因可能是鸡中的HEV属于禽戊型肝炎病毒，与哺乳动物HEV有较大的差异，使得采用基因Ⅰ型HEV结构区内ORF2和ORF3重组蛋白或合成肽为抗原[11]和以E2蛋白为构象型抗原[5]的两家公司生产的诊断试剂检出不相符。试剂B2对HEV-IgG抗体检测阳性检出率略高于试剂A2，与闫强等实验结论一致。

由于禽HEV和人HEV的ORF2区域在氨基酸水平具有56%～62%同源性，ORF2蛋白抗原及相应单克隆或多克隆抗体存在交叉反应，因此用哺乳动物HEV ORF2蛋白为抗原制备HEV检测试剂可以检测禽HEV抗体，但检测的灵敏度可能不高。因此进行HEV在鸡群中的流行病调查，采取这两家任一厂家生产的诊断试剂盒都是可行的，但是要更准确研究鸡中HEV存在状况，研制针对禽HEV的检测试剂是很有必要的。

［1］ D awson GJ，Mushahwar IK，Chau KH，et al.Detection of longlasting antibody to hepatitis E virus in a US traveler to Pakistan［J］.Lancet，1992，340（8816）：426-427.

［2］ Balayan MS.Evidence for a virus in non-A，non-B hepatitis transmitted via the fecal-oral route［J］.Intervirology，1983，20（1）：23-31.

［3］ Reyes GR，Purdy MA.Isolation of cDNA from the virus responsible for enterically transmitted non-A，non-B hepatitis［J］.Science，1990，247（4948）：1335.

［4］ 杨燕，韩红星，李小勇，等.两种方法检测戊型肝炎病毒IgM抗体的临床验证［J］.检验医学与临床，2014，11（22）：3183-3184.

［5］ 闫强，杜海莲，王颖彬，等.两种戊型肝炎IgG抗体检测试剂的比较［J］.中国人兽共患病学报，2008，24（12）：1087-1099.

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［8］ 耿彦生，张硕，赵晨燕，等.我国家禽戊型肝炎病毒感染情况的调查［J］.中国人兽共患病学报，2010，26（5）：429-432.

［9］ 王昌敏，刘长明，赵素元，等.两种HEV-IgM抗体捕获法诊断试剂盒的实验室评价与分析［J］.新疆医学，2006，36：69-70.

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R331

B 学科分类代码： 31044

1001-8131（2016）05-0553-02

2016-05-04

云南省科技厅基础研究面上项目（2013FB060）；大理市科学技术项目（2014F06）