不同添加物对白及组培壮苗培养的影响

宋智琴， 杨平飞， 罗 鸣， 吴明开

(贵州省现代中药材研究所，贵州 贵阳 550006)

不同添加物对白及组培壮苗培养的影响

宋智琴， 杨平飞， 罗 鸣， 吴明开*

(贵州省现代中药材研究所，贵州 贵阳 550006)

为筛选适宜白及组培壮苗的培养基添加物，以无菌播种取得的白及组培苗进行转接培养成组培壮苗，采用单因素试验设计，在壮苗培养基中分别添加香蕉泥、马铃薯泥、胡萝卜泥、番茄泥等不同添加物，分析其对白及组培壮苗生长的影响，筛选出较为适宜添加物后，再进行添加物适宜浓度筛选试验。结果表明：不同添加物对白及组培苗生长均有一定影响，以香蕉泥对白及组培苗的生长影响最显著，该条件下白及平均球茎1.9 mm、株高3 cm、4个须根、干鲜重比86.75%、叶绿素含量1.219 mg/g香蕉泥，浓度为30 g/L和60 g/L时组培苗生长快速，苗整齐且粗壮，叶色嫩绿。结论：白及组培壮苗适宜培养条件为MS+1.0 mg/L NAA+30 g/L白砂糖+7.0 g/L琼脂+30 g/L香蕉。

白及； 组织培养； 添加物

白及(Bletillastriata)为兰科植物白及属多年生珍稀濒危草本植物，其干燥块茎入药，是《中国药典》收载的中药材品种，性微寒，味苦、甘、涩，归肺、胃、肝经具有收敛止血，消肿生肌的功效。主治咳血吐血，外伤出血，疮疡肿毒，皮肤皲裂，肺结核咳血、溃疡病出血等[1-2]。白及被用于工业上的糊料，浆丝绸、浆纱或作涂料等原料，在化妆品、牙膏等轻工业上使用也非常广泛，随着白及的作用日渐被开发，市场上对白及的需求量也越来越大。目前，市场主要依赖的野生资源被采挖殆尽，种子在自然条件下萌发率极低，无性繁殖极其缓慢，人工栽培规模小，市场供需矛盾突出，亟需进行规模化规范化人工种植，首先解决的瓶颈问题就是要大规模生产优质高产种苗[2-4]。近年来，已开展利用白及蒴果包含上万粒种子进行无菌萌发组培快繁技术研究，培育大量白及组培苗，主要涉及不同成熟度的白及种子无菌萌发、原球茎的发育、无菌苗生长激素的筛选等[4-7]。为进一步优化白及组培育苗条件，笔者筛选白及组培苗不同阶段适宜添加物及幼苗生长特性，以期为白及种苗生产提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验材料为贵州省现代中药材研究所资源圃白及蒴果，剖开取出种子后经无菌播种萌发的组培苗。其原植物经贵阳中医学院何顺志教授鉴定为兰科白及属植物白及(Bletillastriata)。

1.2 无菌材料的获取

先洗净白及蒴果，在超净工作台上进行如下操作：用75%酒精浸泡2～3 min，接着用无菌水冲洗5次，吹干。将消毒好的蒴果从中间剖开，将种子均匀地撒在培养瓶内发芽，用已长至平均株高0.8 cm、球茎1.0 mm的苗作为无菌材料进行后续试验。

1.3 最适添加物的筛选

1.3.1 处理方法 采用单因素试验，取上述发芽的种苗作为材料，在基本培养基中添加不同的有机添加物香蕉泥(处理B)、马铃薯泥(处理C)、番茄泥(处理D)、胡萝卜泥(处理E)，浓度分别为30 g/L，以不加任何添加物为对照(处理A)。培养室条件：温度(26±1)℃，光照12 h/d，光照强度1 500 lx。培养60 d后对球茎、株高、须根数、干鲜重比和叶绿素的含量进行测定。每处理10瓶。

1.3.2 最适添加物浓度的筛选 取发芽的种子苗作为材料，选取获得的较适添加物，以MS+白砂糖30 g/L+NAA 0.5 mg/L为基本培养基，添加不同浓度(30 g/L,60 g/L,90 g/L,120 g/L,150 g/L)的最适添加物，共5个处理，每处理10瓶。培养室条件：温度(26±1)℃，光照12 h/d，光照强度1 500 lx。培养60 d后进行观察并记录试验结果，筛选出最适的添加物浓度。

1.4 测定方法

叶绿素含量测定采用丙酮研磨提取，利用紫外分光光度仪测定。

1.5 统计分析

用Spss统计分析软件对数据进行处理，用LDS法进行差异显著性检验。

2 结果与分析

2.1 白及组培壮苗培养添加物的筛选

从表1可以看出，4种不同添加物对白及组培壮苗球茎、株高、须根数、干鲜重比、叶绿素含量都有影响，其中处理B的球茎达1.966 mm，株高为3.18 cm，须根为4.4根，干鲜重比达86.75%，叶绿素含量为1.219 mg/g，其组培壮苗生长优于处理C、处理D和处理E以及对照(处理A)。表明，添加香蕉泥对白及组培壮苗的生长具有较好的促进作用。

表1 不同添加物的白及组培壮苗生长性状

注：表中同列小写字母表示差异达5%显著水平(P<0.05)。

Note: Different lowercase letters in the same column indicate significance of difference atP<0.05 level.

表2 不同香蕉泥浓度的白及组培壮苗生长情况

2.2 最适添加物浓度的筛选

由表2可知，不同浓度香蕉泥对白及生长的影响比较明显，粗壮程度并没有完全随着浓度的升高而增加。当香蕉泥浓度达150 g/L时，苗的生长开始不正常，部分出现茎叶变黄。添加30 g/L白砂糖和60 g/L香蕉泥时并没有表现出明显差异，但从经济、节约方面考虑，添加30 g/L香蕉泥较为合适，因此可以确定白及的生长最适香蕉泥浓度为30 g/L。

3 结论与讨论

植物组织培养中常用的天然有机添加物有椰乳、香蕉汁、马铃薯汁等，都是复杂的营养混合物，其主要的作用可能是为植物生长提供一些生理活性物质，补充一些未知的微量成分。由于添加天然有机物的培养基容易配制，且成本低廉，对植物组培苗的生长却有明显促进作用，植物在其中生长良好，所以适于在生产中广泛应用[8]。有机添加物由于含有许多复杂、有效的成分而广泛应用于兰科植物的离体培养[9]。研究结果表明，不同有机添加物对白及组培苗生长的影响存在一定差异，香蕉泥对白及球茎的生长具有显著促进作用，香蕉泥和马铃薯泥对白及的株高具有显著促进作用，各处理对白及须根数的增长没有明显作用，对干鲜重比也没有明显促进作用，香蕉泥对白及叶绿素的积累有显著促进作用，而番茄汁对叶绿素的积累没有作用，这与肉眼观察添加番茄汁培养的白及苗呈黄绿色相符。初步确定了香蕉泥较适合白及组培苗的生长。综合考察各项指标表明，白及组培苗的培养基中添加香蕉能显著促进其生长发育，起到壮苗增大球茎的作用，其中又以添加30 g/L香蕉泥较为合适。白及组培壮苗适宜培养条件为MS+0.5 mg/L NAA+30 g/L白砂糖琼脂+30 g/L香蕉。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出社，2010.

[2] 吴明开，刘作易.贵州珍稀药材白及[M].贵阳：贵州科技出版社，2013.

[3] 李 嵘，王拮之.白及的研究概述及其资源利用对策[J].中草药，2006，37(11)：1751-1755.

[4] 张永为，蒋福升，王 寅，等.白及产业现状及可持续发展的探讨[J].中华中医药学刊，2012，30(10)：2264-2266.

[5] 李雨晴，杨嘉伟，王康才，等.白芨种子无菌萌发特性[J].江苏农业科学，2015，43(4)：253-255.

[6] 张 燕，黎 斌，李思锋.不同培养基上白芨的种子萌发与幼苗形态发生[J].西北植物学报，2009，29(8)：1584-1589.

[7] 叶 静，郑晓君，管常东，等.白芨的无菌萌发与组织培养[J].云南大学学报：自然科学版，2010，32(S1)：422-425.

[8] 赵海红，贝丽霞，陈祥梅.不同附加物对马铃薯脱毒试管苗快繁的影响[J].黑龙江八一农垦大学学报，2007，19(2)：17-20.

[9] 张 超，张茜茜，楼楠男，等.有机添加物对大花蕙兰原球茎及幼苗生长发育的影响[J].安徽农业科学，2009，37(19)：8866-8868，8903.

(责任编辑： 孙小岚)

Effect of Different Additives on Sound Plantlets ofBletillastriata

SONG Zhiqin, YANG Pingfei, LUO Ming, WU Mingkai*

(GuizhouInstituteofModernChineseMedicalMaterials,Guiyang,Guizhou550006,China)

The sterileB.striataplantlets were cultured on media plus different additives of mashed banana, mashed potato, mashed carrot and mashed tomato with different concentration to study the effect of different additives on sound plantlets and to screen suitable medium additives for culturing soundB.striataplantlets. Results: Four tested additives all have a certain effect on growth ofB.striataplantlets and the mashed banana has the most significant effect on growth ofB.striataplantlets among four tested additives. The average bulb diameter, height, fibrous root number, dry weight-fresh weight ratio and chlorophyll content ofB.striataplantlets cultured on the medium plus mashed banana are 1.9 mm, 3 cm, four, 86.75% and 1,219 mg/g respectively.B.striataplantlets cultured on the medium plus mashed banana with 30 g/L and 60 g/L concentration grow rapidly, unanimously and healthily.In conclusion, the optimum medium to culture soundB.striataplantlets is MS+1.0 mg/L NAA + 30 g/L white sugar+7.0 g/L agar + 30 g/L mashed banana.

Bletillastriata; tissue culture; additive

2015-08-28； 2016-02-28修回

2015年中医药行业专项中药类项目“白及品种选育与高产栽培技术熟化提升及应用示范”(201507002-1-11),“贵州珍稀药材石斛、白及品种选育及其产业化”[黔农科院自主创新科研专项字(2014)017]；施秉中药材产业科技合作专项“白及组培球茎驯化及种苗大田高产栽培技术研究与示范”[施中药科合专项(2014)]； 贵州省农业委员会项目“贵州省中药材现代产业技术体系建设专项”(GZCYTX2014-0202)

宋智琴(1982-)，女，助理研究员，从事中药材资源、品质研究。E-mail：815638495@qq.com

*通讯作者：吴明开(1969-),男，研究员，从事中药材资源、育种与栽培工作。E-mail：bywmk1999@163.com

1001-3601(2016)03-0132-0138-03

S682.31； Q813.1

A